WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

Pages:     | 1 || 3 | 4 |

«Н.И.Латыпова Э.Н.Хисамов Биохимические и морфологические изменения в крови животных и человека при действии бисамина Уфа 2011 УДК 5765.591.111 ББК 28.707+28.080.1 Л 51 Печатается по решению ...»

-- [ Страница 2 ] --

В поддержании каталитической активности АТФаз принимают участие сульфгидрильные группы, модификация которых приводит к ингибированию АТФазной активности. Хотя вопрос о механизме действия бисамина остается открытым, имеющиеся в литературе сведения о сдвиге тиолдисульфидного равновесия в сторону окисленных форм при действии ряда аминов позволяют пред –полагать, что одной из возможных причин снижения активности АТФзы может являться блокирование SH-групп бисамином или его метаболитами. В конечном счете, это может привести к преждевременному гемолизу эритроцитов.

В дестабилизации клеточных мембран важное значение имеют и процессы, связанные с активацией перекисного окисления липидов. Не исключено, что,.при действии бисамина оба процесса имеют место.

2.1.4. Состояние метгемоглобинредуцирующей В норме при диссоциации кислорода с гемоглобином железо гема остается в двухвалентном состоянии. Однако в некоторых случаях, кислород отрывается в виде супероксид-аниона, забирая один электрон у железа и оставляя Нв в виде метгемоглобина (МтНв).В физиологических условиях МтНв образуется в крови в небольших количествах в результате влияния эндогенных метгемоглобинобразователей. Прослеживается связь между накоплением МтНв и возрастом эритроцитов. Так, около 10% эритроцитов МтНв не содержат вообще, треть клеток содержит ivagant.ru МтНв, но чем больше его в клетке, тем реже такие клетки встречаются в русле крови [33,43,116]. Накопление МтНв может происходить в результате повышенного образования перекисей, как это наблюдалось при действии ряда аливатических аминов [121,159]. Активная аминогруппа и сама может быть причиной непосредственного окисления железа гема или вызывать нарушение третичной структуры глобина [19,55,234]. Существенно, что стабильность молекулы гемоглобина после блокирования сулььфгидрильных групп уменьшается и гемоглобин проявляет повышенную склонность к образованию метгемоглобина.

Восстановление МтНв в гемоглобин в эритроцитах осуществляйся при участии двух метгемоглобинредуцирующих ферментных систем, противодействующих накоплению МтНв в эритроцитах. Одна из них связана с пентозофосфатным путем, т.к.: кофактором фермента является НАДФН, другая система, в которой кофактором является НАДН (НАДН-метгемоглобинредуктаза), связана с функционированием гликлиза..

Неферментативные системы восстановления метгемоглобина не связаны с пентозофосфатным циклом, с восстановлением НАДФ. Восстановление МтНв при участии НАДН –метгемоглобинредуктазы в физиологических условиях незначительно. Для восстановления МтНв этим ферментом необходим искусственный переносчик электронов, например, метиленовый синий, аскорбиновая кислота или другие [38].

Основную роль в восстановлении МтНв играет НАДНзависимая метгемоглобинредуктаза, связанная с анаэробным расщеплением глюкозы. В фазе гликолитической оксидоредукции происходит окисление 3фосфоглицеральдегида в 1,3-дифосфоглицериновую кислоту. Образующийся при этом НАДН участвует в восстановivagant.ru лении МтНв /79/. Ко второму энзиматическому механизму, хотя и в меньшей степени участвующему в восстановлении МтНв, относится 10-й этап гликолиза, обратная реакция которого (превращение лактата в пируват, посредством ЛДГ также сопровождается восстановлением НАД [25].

При использовании различных акцепторов электронов было сделано заключение, что МтНв восстанавливается при участии цитохрома В5, НАДН-метгемоглобинредуктаза переносит электрон на цитохром В5, который неферментативно восстанавливает МтНв [36].

Активность НАДН-метгемоглобинредуктазы (НАДНМГР) составляет в нормальных условиях примерно 73% всей редуцирующей способности эритроцитов по отношению к МтНв. Соответствующая активность НАДФН-МГР составляет лишь 6% [58253]. Восстановление МтНв может происходить и неферментативным путем, при участии аскорбиновой кислоты, что составляет общей редуцирующей способности эритроцитов и глютатиона [59,261].

Некоторые авторы отмечают различную скорость образования МтНв в зависимости от пола. Так у самок крыс при воздействии 4-амино-пропиофенона образуются достоверно большие концентрации МтНв в крови, чем у самцов. Вероятной причиной половых различий авторы считают более низкий уровень процесса N – гидроксилирования у самцов [203].

Метгемоглобиновые эритроциты утрачивают способность утилизировать глюкозу, что, по-видимому, связано с нарушением систем гликолиза /119/.

Причиной метгемоглобинемии, таким образом, является обычно недостаточность НАДНметгемоглобинредуктазы, но обусловлена она может быть не только экзогенными факторами, но и наследственной недостаточностью этого фермента [62].

ivagant.ru Проведенные исследования содержания МтНв и активности НАДН-метгемоглобинредуктазной системы показали, что концентрация бисамина 0,185 мг/м оказывает инактивирующее влияние на активность МГР, начиная с 1й недели затравки. Закономерным следствием угнетения основной метгемоглобинредуцирующей системы является повышение концентрации МтНв в крови животных I группы, значимые изменения которого также проявляются ко 2й неделе эксперимента по отношению к контролю. Воздействие бисамина в течение более длительного срока (4 недели) еще более ускоряет процессы метгемоглобинобразования, несмотря на возросшую активность НАДН-МГР.

К следующему сроку исследования (8 недель) концентрация МтНв в эритроцитах по-прежнему выше контроля, несмотря на омоложение популяции красных клеток крови к этому времени. К концу эксперимента инактивирующее влияние бисамина на МГР еще более усиливается, тогда как содержание МтНв в эритроцитах лишь незначительно выше по сравнению с контролем. Возможно, что в этот период подключаются метгемоглобинредуцирующие системы, в нормальусловиях имеющие второстепенное значение.

Низкие концентрации исследуемого соединения на некоторых этапах затравки вызывали даже более резкую реакцию со стороны метгемоглобинредуцирующей системы эритроцитов, чем концентрация в 0,925 мг/м. Так, на стадии 2-х недельной затравки концентрация МтНв у животных 2-й группы значительно ниже, чем в 1-й группе, хотя и наблюдается достоверное торможение активности МГР. Вероятнее всего, это связано с более высоким уровнем ретикулоцитоза у животных 2-й группы.

Поступление высоких концентраций бисамина вызывает значительное метгемоглобинобразование только к 4ivagant.ru й неделе хронического эксперимента, основной причиной которого является низкая активность МГР. При описании кислотных эритрограмм нами отмечался более высокий уровень гемолиза эритроцитов при действии низких концентраций бисамина в те же сроки исследования. Возможно, что причиной понижения стойкости является более высокое содержание МтНв в эритроцитах этой группы животных.

Значимое накопление МтНв в эритроцитах на 8-й и 16й неделе опыта, вероятнее всего, связано с достоверным снижением активности основного метгемоглобинредуцирующего фермента. Небезинтересно, что в отличие от I группы, скорость МтНв –образования все же более высокая, и, возможно, в этих условиях активации второй ферментной системы восстановления МтНв не происходит.

Таким образом, результаты проведенных исследований позволяют отнести бисамин к метгемоглобинобразователям, а основной причиной накопления МтНв можно считать недостаточность НАДН-метгемоглобинредуцирующей системы эритроцитов.

Закономерно встает вопрос о причинах угнетения НАДН-метгемоглобинредуктазы. Одна из них, повидимому, связана с повреждающим действием бисамина, подобно другим аминам, на структуру молекулы фермента [9]. Другой причиной может являться не достаточность НАДН в условиях in vivo в результате блокирования процессов гликолиза, поскольку метгемоглобиновые эритроциты утрачивают способность утилизировать глюкозу.

Функционирование второй ферментной системы НАДФН-метгемоглобинредуктаза зависит от эффективности работы пентозофосфатного шунта, скорость которого определяется в основном активностью глюкозо-6фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ ). Механизмы неферменivagant.ru тативного восстановления МтНв также зависят от активности Г-6-ФДГ. Так, поддержание глутатиона в восстановленном состоянии, через глутатионредуктазу, связано с пентозофосфатным циклом, а дефиците восстановленного глутатиона нарушается детоксикация перекисных соединений глутатионредуктазой [38]. Таким образом, низкая активность Г-6-ФДГ может привести к повышенному МтНв-образованию в результате нарушения процессов детоксикации перекисей и снижения активности метгемоглобинредуцирующих фермеентативных и неферментативных процессов. В связи с чем, для более полного представления о процессах метгемоглобинобразования было проведено изучение активности Г-6-ФДГ эритроцитов. Динамика активности Г-6-ФДГтакова. При поступлении низких концентраций бисамина значительное снижение активности фермента отмечается в начальные сроки исследования (1-я неделя), но уже ко 2-й неделе исследования активность фермента восстанавливается до нормы, тогда как резкого омоложения популяции эритроцитов в этот период не происходит. К 4-й неделе эксперимента, когда по предыдущим показателям отмечается постарение популяции эритроцитов, активность Г-6-ФДГ незначительно снижена.

В следующие сроки исследования активность фермента практически держится на уровне контроля.

При воздействии на животных бисамина в концентрации 0,925 мг/м3 (2-я группа) с первых дней и до 4-й недели исследования прослеживается тенденция к снижению активности Г-6-ФДГ. В последующем активность фермента повышается относительно предыдущего срока, хотя и не достигает контрольного уровня.

Наблюдаемые нами изменения активности Г-6-ФДТ можно объяснить при сопоставлении с количеством ретикулоцитов (табл. 3.1.), так как известно, что в молодых ivagant.ru эритроцитах активность Г-6-ФДТ выше, чем в старых. Угнетение эритропоэза и резкое постарение популяции эритроцитов по данным кислотных эритрограмм на 4-й неделе экспозиции сопровождается существенным снижением активности фермента, а омоложение состава эритроцитов к 8й неделе эксперимента ведет к активации Г-6-ФДГ. При этом прослеживается определенная зависимость между активностью Г-б-ФДГ и состоянием метгемоглобинредуцирующей функции эритроцитов. В частности, снижение активности НАДН-метгемоглобинредуктазы совпадает во времени с повышением активности Г-6-ФДГ, что в определенной мере подтверждает предположение об адаптивном усилении НАДФН-зависимой метгемоглобинредуцирутощей системы при подавлении активности НАДНметгемоглобинредуктазы и наоборот.

Несмотря на то, что наблюдаемые нами изменения носят обратимый характер, т.к. активность НАДН-МГР к 4-й неделе восстанавливается почти до уровня контроля, ожидаемого снижения концентрации МтНв не происходит, следовательно, скорость образования МтНв превышает возможности редуцирующих систем эритроцитов.

Наблюдаемая нами обратная зависимость между активностью НАДН-МГР и Г-б-ФДГ, по нашему мнению, определяется переключением потока глюкозы с одного пути на другой в зависимости от накопления того или иного метаболического груза в эритроцитах.

Наблюдаемая на 8-й неделе активация Г-б-ФДГ определяется значительным омоложением популяции эритроцитов. Возможно, 4-х недельное воздействие бисамина даже в таких низких концентациях (0,185 мг/м3) является критическим, сказывается высокий комулятивный эффект соединения, и приспособительные возможности метаболическом уровне исчерпаны. Значительное накопление МтНв в эритivagant.ru роцитах является одной из возможных причин ускоренного гемолиза клеток, что в свою очередь подключает регенераторные процессы на клеточном уровне.

Низкая активность Г-6-ФДГявляется одним из факторов, провоциющих гемолиз эритроцитов [22]. Это объясняется тем, что замедление первых реакций пентозофосфатного пути окисления глюкозы приводит к дефициту восстановленных форм НА.ДФ и глутатиона, которые участвуют в процессах детоксикации перекисных соединений поддержании тиоловых ферментов и гемоглобина в активном состоянии [38,55]. Таким образом, влияние бисамина на активность Г-6-ФДГ конечном счете может отразиться на структурно-функциональном состоянии эритроцитарных мембран.

2.1.5. Влияние бисамина на холинэстеразную активность сыворотки крови крыс.

Холинэстераза относится к группе ферментов, катализирующих гидролиз эфиров карбоновых кислот – к эстеразам. В отличие от истинной холинэстеразы, – ацетилхолинэстеразы (КФ 3.1.1.7.), специфическим субстратом которой является ацетилхолин, псевдохолинэстераза хорошо гидролизует бутирилхолин, бензоилхолин и ингибируется избытком субстрата /49/, а потому этот фермент иногда называют бутирилхолинэстеразойХКФ 3.1.1.8. ).

Роль бутирилхолинэстеразы в организме до конца не выяснена, По данным одних авторов бутирилхолиностераза предотвращает токсическое действие бутирилхолина, образующегося в процессе обмена [143] и других эфиров холина. Другие исследователи считают, что бутирилхолинэстераза предохраняет синапсы от перевозбуждения, ivagant.ru когда при избытке субстрата может иигибироваться истинная холинэстераза [143].

Фермент имеет два активных центра – анионный и эстеразный. Анионный центр выполняет ориентирующую функцию и имеется только у холинэстераз, эстеразный центр выполняет акт гидролиза и характерен для всех эстераз [143].

Применение электрофоретических методов исследования позвоволо выявить несколько молекулярных форм холинэстеразы сыворотки крови [211]. У человека в сыворотке крови обнаружено 7 фракции с холинэстеразной активностью, у крысы – 6 [113, 199]. Фракции с различными формами фермента различались по молекулярному весу [221]. Позднее М.М.Лобанов с соавт. [98] выявили до фракций в полиакриламидном геле с холинэстёразной активностью в сыворотке крови человека и до 10 – у крыс.

Наблюдается полиморфизм сывороточной холинэстеразы в популяции человека. Fleming T.J [216] выделяет 4 фенотипа бутирилхолинэстеразы методом электрофореза в полиакриламидном геле. Другими исследователями обнаружено генотипов, обусловленных 6 вариантами холинэстеразы [215]. При внутримышечном введении животным субстратов холинэстеразы наблюдается индуцированный синтез фермента в печени. Опыты с ингибиторами синтеза белка свидетельствуют о том, что увеличение активности фермента связано с индукцией синтеза белка de Novo не является результатом активации фермента [2]. Авторы предполагают, что митохондрии, наряду с микросомами, обладают способностью к самостоятельному синтезу холинэстеразы.

Обнаружено, что ионы А13 значительно подавляют активность холинэстеразы сыворотки крови человека, тогда как ионы Са2+ активируют, а при совместном введении предохраняют фермент от ингибирующего действия АL3. Ионы Mg 2+ не влияли на активность холинэстеразы [231].

ivagant.ru Воздействие многих химических соединений отражается на холинэстеразной активности сыворотки крови.

Обнаружено ингибирующее действие на этот фермент многих пестицидов [242,270]242, 270/. Антихолинэстеразное действие проявляют фосфорорганические соединения, реагирующие с эстеразным центром фермента [49]; аминонитрилы ингибируют ацетилхолинэстеразу и бутирилхолинэстеразу, степень подавления активности при этом зависит от дозы токсина и от метилирования амина, причем четвертичные аммониевые соединения более эффективны [218]. Некоторые соединения вызывают повышение активности бутирилхолинэстеразы. Подобный эффект наблюдается при введении мышам перхлорэтилена, хлороформа, метилхлорида, четыреххлористого углерода и этанола [225]. Из аминов ингибирующее действие на холиняэстеразу оказывает также диметиламии [7].

В наших исследованиях уровень активности холинэстеразы сыворотки крови у крыс в норме соответствует данным других авторов [98] и колеблется в пределах от 0,55 до 1,67 мкат на г/ белка.

Активность фермента изучена в динамике хронического эксперимента в те же сроки, что и другие показатели (через 1,2,4,8 и 16 недель) при действии двух концентраций бисамина.При поступлении низких концентрации бисамина (1-я группа) резкое торможение активности фермента (на 36%) наблюдается через неделю после начала эксперимента. В последующие сроки исследования, хотя активность холинэстеразы снижается относительно контроля, однако эти изменения не существенны. Высокие концентрации бисамина вызывают уменьшение активности фермента на всех этапах исследования. Минимальная активность фермента при действии исследуемого соединения наблюдается через неделю после, начала затравки, аналогично тому, как ivagant.ru это происходит у животных 1-й группы. Во все последующие сроки исследования функционирование фермента в этой группе животных ниже по сравнению с 1-й группой.

Так же, как и в 1-й группе второй минимум активности фермента отмечается через 8 недель и составляет всего 71% от уровня контрольной группы. К 16 неделе активность бутирилхолинэстеразы повышается, но остается пониженной по сравнению с контролем.

Таким образом,влияние бисамина на животных приводит к снижению активности бутирилхолинэстеразы в сыворотке крови крыс. Степень снижения активности зависит от действующей концентрации бисамина, причем эти изменения появляются достаточно рано от начала воздействия исследуемого соединения.

Активность фермента в сыворотке крови, в какой-то степени отражает функциональное состояние печени и является показателем гепатотропного действия химических раздражителей, т.к. синтезируется, главным образом, в клетках этого органа и оттуда поступает в кровь. Возможно, что изменения в активности холинэстеразы являются признаком снижения синтеза этого белка.

Не исключено, что бисамин способен проявлять свойства ингибитора холинэстеразы, т.к. образует четвертичные «юниевые соединения [118], которые обладают антихолинэстеразными свойствами в результате электростатического взаимодействия положительно заряженного атома азота с анионным центом холинэстеразы [142,143].

Выяснение вопроса о том, является ли снижение активности холинэстеразы признаком раннего поражения печени или следствие непосредственного действия амина на фермент, требует дальнейшего исследования, хотя оба эти механизма не исключают друг друга.

ivagant.ru 2.2. Биохимические и морфологические показатели крови у рабочих нефтехимического производства ионола Опасность токсического действия низких доз бисамина, вытекающая из. экспериментальных исследований, послужила поводом к изучению биохимических показателей крови у рабочих нефтехимического производства, имеющих контакт с бисамином в процессе синтеза ионола. Изучение действия бисамина было направлено не только на выяснение особенностей его влияния на организм, но и главным образом на разработку ранних биохимических критериев интоксикации бисамином, доступных при проведении профосмотров.

2.2.1. Гематологические показатели у рабочих нефтехимического производства ионола Как следует из литературного обзора и экспериментальных исследований, на действие алифатических аминов прежде всего реагирует красная кровь. У рабочих, контактирующих с бисамином, проведены исследования по тем же параметрам, что в эксперименте, и проанализирован характер колебаний показателей в зависимости от пола, стажа, степени выраженности воздействия амина (группы 1а и 16), функционального состояния организма (группы А,Б,В).

В наших исследованиях содержание гемоглобина (Нв) и количество эритроцитов у рабочих не выходит за рамки физиологической нормы, чего нельзя сказать о ретикулоцитах, количество которых свидетельствует о стимуляции эритропоэза.

Не выявлено каких-либо достоверных изменений в количестве эритроцитов и концентрации Нв" в зависимости от интенсивности контакта. Отмечается лишь незнаivagant.ru чительная тенденция к снижению уровня Нв в обеих группах (1а и 16) независимо от пола. В то же время количество эритроцитов в 1а группе несколько повьшено, тогда как в 1 б – у женщин наблюдается снижение, а у мужчин – этот показатель остается без изменений.

Необходимо отметить, что в связи с отсутствием достоверных изменений в отношении количества ретикулоцитов между мужчинами и женщинами, как в контрольной группе (мужчины – II,2 ± 0,5 р0,5; женщины 12,5±0,73 р0,5), так и у рабочих производства ионола (мужчины – 18,7±1,9, женщины – 20,2±2,7; р0,5), этот признак в дальнейшем не учитывался.

Судя по значительному ретикулоцитозу у рабочих 1а группы, можно предположить, что при интенсивном воздействии бисамина происходит некоторая стимуляция эритропоэза. У рабочих 16 группы ретикулоцитоз незначительный.

Количественные изменения гемоглобина и эритроцитов по стажу представлены незначительными колебаниями. Достоверное снижение уровня Нв наблюдается лишь у женщин со стажем до I года, несмотря на существенную стимуляцию эритропоэза, и при стаже более 10 лет, но в этом случае ретикулоцитоз незначителен. В двух других стажевых группах (1-5 лет и б-10 лет) также наблюдается выраженный ретикулоцитоз. Таким образом, в начальные периоды действие бисамина проявляется некоторым снижением уровня гемоглобина, тогда как продукция клеток эритроидного ряда стимулируется. Учитывая, что повышения количества эритроцитов относительно контрольной группы при этом не происходит, наблюдаемый ретикулоцитоз, вероятнее всего, объясняется ускоренным гемолизом красных клеток крови во внутрисосудистом русле и стимулируется продуктами деградации эритроцитов.

ivagant.ru При анализе гематологических показателей по степени компенсации функций у мужчин каких-либо достоверных изменений в количестве эритроцитов и содержании Нв не наблюдается. У удовлетворительно адаптированных лиц наблюдается тенденция к снижению уровня Нв. У лиц с наличием признаков деадаптации (группа Б) содержание Нв незначительно повышается, как у неудовлетворительно адаптированных (группа В) отмечается снижение, что наиболее четко проявляется у женщин. Достоверное снижение Нв у рабочих этой категории наблюдается и относительно первых двух групп (А и Б). Подобные колебания характерны и для количества эритроцитов, с той лишь разницей, что у удовлетворительно адаптированных лиц наблюдается небольшое повышение их количества. Обращает внимание, что стимуляция эритропоэза находилась в той зависимости от степени адаптировалиости рабочих к условиям производства. С появлением признаков дезадаптации наблюдается достоверное повышение количества ретикулоцитов и в гоуппе рабочих с синдромом вегето-сосудистой дистонии (группа В-неудовлетворительная адаптация) превышение нормы достигает более 2 раз (236%).

Таким образом, исследование гематологических показателей у рабочих нефтехимического производства ионола подтверждает экспериментальные данные, хотя колебания таких показателей как Нв и эритроциты менее значительны, чем в эксперименте. Признаки анемии наблюдаются только у лиц с синдромом вегето-сосудистой дистонии. Благодаря ретикулоцитозу уровень Нв и количество эритроцитов сохранятся в пределах нормы. Мы предполагаем, что стимуляция эритропоэза, аналогично тому как это наблюдалось в эксперименте, вызвано спонтанным гемолизом эритроцитов в сосудистом русле. Для выяснения этого вопроса исследоivagant.ru вана кислотная резистентноеть эритроцитов рабочих нефтехимического производства ионола.

2.2.2. Кислотная резистентность эритроцитов у рабочих нефтехимического производства ионола Как отмечалось в предыдущей главе, одним из методов, позволяющих исследовать качественные сдвиги эритрона, является предложенный И.И.Гительзоном и И.А.Терсковым метод кислотных эритрограмм. В литературе имеются сведения о влиянии промышленных ядов на гемолитическую резистентность эритроцитов, что четко отражется на форме кислотных эритрограмм. Исследовано влияние таких химических соединений, как ароматический аминмизидин, дихлоризобутилен, диоксифенилпропан, сероуглерод, амины метиленового ряда и нитробензоаты [28,38, 110,115].

В наших исследованиях гемолитическая резистентность эритроцитов изучена у 42 рабочих производства ионола и у 10 человек контрольной группы. У рабочих контрольной группы гемолиз начинается со второй минуты (без учета сферулярных изменений) после добавления во взвесь эритроцитов соляной кислоты, что не противоречит данным других авторов [37]. Пик кривой, соответствующий распаду наибольшего количества клеток, приходится на 4,5 минуты и на 8,5 минуте разрушение клеток заканчивается.

Постоянный контакт рабочих с бисамином (группа 1а) ведет к уменьшению времени гемолиза основной популяции эритроцитов с параллельным смещением максимума и окончания гемолиза и свидетельствует о снижении стойкости эритроцитов к действию гемолитика. Снижение резистентности с 3 по 4 минуту было достоверным относительно контрольной группы, что отражает значимое повышение процента гемолизированных клеток в этот период. Одноivagant.ru временно смещается относительно контроля правая ветвь эритрограммы, характеризующая распад молодых клеток крови, количество которых снижено у рабочих, имеющих постоянный контакт с бисамином. Как известно, пониженная кислотная резистентность эритроцитов характерна для старых клеток, количество которых может увеличиваться по двум причинам: количественное снижение эритропоэза или сокращение срока жизни эритроцитов. Так как количество ретикулоцитов у рабочих этой группы не снижается, а напротив, наблюдаются стимуляция эритропоэза, то причиной резкого постарения популяции эритроцитов, видимо, является сокращение физиологического срока жизни красных клеток крови в результате повреждающего действия на них химических факторов производственной среды, наиболее токсичным компонентом которой является бисамин.

Подобные же изменения наблюдаются у рабочих группы 16. Пик эритрограммы сдвинут влево, достоверно повышен процент гемолизированных эритроцитов за промежуток времени с 3,5 до 4,5 минут. За первые пять минут в этой группе гемолизировало 77,6% эритроцитов, что значительно превышает процент гемолизированных эритроцитов за это же время в контрольной группе (65,9%) и несколько ниже, чем у рабочих группы 1а (80,8%). Гемолитическая резистентность молодых эритроцитов, распад которых отражает правая ветвь эритрограммы, снижена относительно нормы, но достоверности при этом не наблюдается.

В то же время, процент устойчивых к кислотному гемолизу эритроцитов выше, чем в группе 1а. На форме кислотных эритрограмм это отражается в проявлении небольшого горба на правом крыле эритрограммы, однако количество ретикулоцитов незначительно превышает в этой группе контрольные показатели, но значительно ниже, чем у рабочих I ivagant.ru а группы. Время окончания гемолиза при относительном контакте с бисамином не меняется.

Таким образом, при постоянном контакте рабочих с исследуемым соединением происходит сдвиг всей эритрограммы влево, тогда как при импульсивном воздействии (группа 1б) наблюдается подъем левого крыла эритрограммы и сдвиг максимума кривой влево.

Характер кислотных эритрограмм меняется в зависимости от длительности работы в условиях производства ионола.

Отклонения от нормы появляются уже в первый год работы на данном производстве. К этому времени пик эритрограммы уже сдвинут влево и процент гемолизированных эритроцитов в максимальной точке достоверно повышен относительно контрольной группы, укорочено время окончания гемолиза. Процент гемолизированных эритроцитов за первые пять минут также повышается относительно контроля до 73,8% (в контроле – 65,9%).

При более продолжительном стаже (1-5 лет) достоверное повышение низкостойких к кислотному гемолизу эритроцитов наблюдается с 3-й минуты после добавления во взвесь гемолитика [4.2.]. Левое крыло эритрограммы приподнято, точка максимального гемолиза сдвинута на полминуты влево.

В следующей стажированной группе (6-10 лет) наблюдается некоторая нормализация кислотных эритрограмм, но и здесь процент низкостойких эритроцитов превышает контрольные показатели. Однако достоверность наблюдается только в момент регистрации 3,5– минутного гемолиза и в точках, расположенных ближе ко времени окончания гемолиза, что говорит о снижении количества высокостойких эритроцитов. Процент гемолизированных за первые пять минут эритроцитов уменьшается до 77,8%, ivagant.ru по сравнению с предыдущей стажевой группой (80,4%"), но все же значительно превышает норму (65,9%). Несмотря на значительный подъем левой ветви эритрограммы, сдвига максимума гемолиза не происходит.

У рабочих, имеющих стаж более 10 лет в условиях производства ионола, происходит резкое повышение пониженно-стойких, стареющих эритроцитов, согласно классификации В.Г.Леоновой /81/, за счет снижения зрелых – среднестойких и повышенно-стойких эритроцитов.

Начиная с 3-й минуты, достоверные изменения наблюдаются во всех фиксируемых во времени точках кислотной эритрограммы. В этой группе самый высокий процент гемолизированных за первые пять минут эритроцитов (87,3%). Окончание гемолиза происходит на минуту раньше, чем в норме. Соответственно происходит изменение формы эритрограммы, основание которой становится уже, левое крыло приподнято, а пик эритрограммы сдвинут влево, относительно нормы на минуту, правое плечо эритрограммы опущено и укорочено.

Таким образом, продолжительность производственной деятельности, также как и интенсивность контакта с химическими агентами, оказывает влияние на функциональное состояние эритроцитов и отражается в динамике кислотных эритрограмм. Динамика кислотных эритрограмм по степени компенсации показывает что уже у лиц, отнесенных в группу функций А (удовлетворительно адаптированные), достоверно снижается гемолитическая резистентность эритроцитов, о чем свидетельствует повышение процента гемолизированных эритроцитов за первые пять минут с момента добавления гемолитика до 78% относительно контроля (65,9%). Соответственно наблюдается подъем левой ветви эритрограммы и сдвиг максимума гемолиза. Процент повышенно стойких эритроцитов понижается. С появлением признаков вегеivagant.ru то-сосудистой дистонии (группа Б) наблюдаемые изменения усиливаются. Процент гемолизированных эритроцитов достоверно повышается начиная с 3 минуты, форма эритрограммы меняется – становится уплощенной, крутизна левой ветви усиливается и максимум гемолиза по-прежнему остается сдвинутым влево. В отношении повышенно-стойких эритроцитов можно сказать, что их изменения менее значительны, чем в группе А, хотя количество их и снижено, по сравнению с нормой, но достоверности не наблюдается. Это, видимо, связано с повышением количества ретикулоцитов в данной группе относительно нормы и незначительным превышением их в сравнении с предыдущей группой. На правой ветви эритрограммы появление молодых, устойчивых к кислотному гемолизу клеток, сопровождается с небольшим возвышением на кривой, ближе к концу гемолиза, окончание которого сокращается на пол минуты. Наиболее значительные изменения характерны для группы В, в которую вошли лица с синдромом вегето-сосудистой дистонии (неудовлетворительная адаптированные). Достоверные изменения относительно контроля наблюдаются почти во всех точках кислотной эритрограммы. Процент гемолиза за первые пять минут достигает 89%, сама эритрограмма сдвинута влево вместе с максимумом на целую минуту, вершина ее становится плоской, правое крыло эритрограммы опущено и, несмотря на значительный ретикулоцитоз, признаки омоложения популяции эритроцитов отсутствуют. Полученные данные свидетельствуют о серьезных нарушениях в функциональном состоянии красных клеток крови. Характерным является левый сдвиг эритрограммы, свидетельствующий об ускоренном гемолизе эритроцитов в результате снижения их кислотной резистентности. Стойкость эритроцитов интимно связана с их возрастом. В наших исследованиях, надо полагать, при воздействии химических факторов происходит усivagant.ru коренное старение популяции эритроцитов. Скорость этого процесса определяется интенсивностью и длительностью контакта с химическими агентами производственной среды.

Повышение процента низкостойких эритроцитов предшествует появлению клинических признаков патологического процесса, что в этом случае повышает ценность данного метода, в плане возможности использования его для ранней диагностики профессиональных интоксикаций (табл.2.2.1).

Показатели кислотного гемолиза эритроцитов при контакте бисамином разной интенсивности (%) Время (мин.,сек.) 1. 2. 2. 3. 3. 4. 4. 5. 5, 6. 6. 7. 7. ivagant.ru Как уже отмечалось выше, основной причиной ускоренного старения красных клеток крови при действии бисамина, по нашему мнению, является сокращение физиологического срока жизни эритроцитов. Мы обосновываем это тем, что повышение количества низкостойких эритроцитов не связано с угнетением эритропоэза, напротив, при наблюдаемом ретикулоцитозе отмечается снижение повышенно-стойких эритроцитов.Сокращение физиологического срока жизни эритроцитов может быть связано с повреждением мембранных структур в результате непосредственного воздействия токсинов на эритроцитарную мембрану вследствие перекисного окисления липидов мембраны. Для более детального изучения роли мембранных структур в ускорении гемолитических процессов исследована активность мембраносвязанного фермента – аденозинтрифосфатазы (АТФаза) (табл.2.2.2.).

Показатели кислотного гемолиза эритроцитов при контакте бисамином при разных уровнях адаптированности (%) Время Контрольная Группа адаптиро- Группа деадаптимин.,сек.) группа n-20 ванных рабочих рованных рабочих ivagant.ru АТФазная активность эритроцитов была изучена у 115 рабочих производства ионола и у 30 человек контрольной группы. Уровень суммарной активности фермента в эритроцитах колебался в контрольной группе от 1,8 до 3,7 мкат/л эритроцитов, Са, Mg –АТФазы – от 1, до 3,0 и К, Nа-АТФазы – от 0,4 до 1,0 мкат/л эритроцитов.

У рабочих, контактирующих с бисамином, границы активности фермента расширены как в сторону повышения, так и в направлении снижения активности фермента, последнее наблюдается значительно чаще. Так, суммарная активность АТФазы изменяется в пределах от 1,2 до 3, мкат/л эритроцитов; Ca,Mg –АТФаза – от 0,6 до 2,7; K,NаАТФаза – от 0,2 до 1,3 мкат/л эритроцитов.

Как в контрольной группе, так и у рабочих, контактирующих с бисамином, достоверных изменений по полу и возрасту,не выявлено, что позволило элиминировать эти признаки при дальнейшем описании результатов.

При сравнении активности фермента у рабочих производства ионола с контрольной группой видно, что достоверно снижена как суммарная активность АТФазы, так и Ca,Mg –АТФаза и К, Nа-АТФаза. Прерывистый контакт с бисамином (группа 16) не приводит к нарушению функционирования транспортной уабаин-зависимой АТФазы.

Суммарная активность АТФазы снижена за счет достоверного угнетения Ca,Mg –АТФазы, тогда как при постоivagant.ru янном контакте с бисамином наблюдается инактивация и Ca,Mg – и К, N а-АТФазы.

Для выяснения вопроса о влиянии длительности контакта с бисамином проведен анализ АТФазной активности в зависимости отстажа. Достоверное угнетение суммарной активности АТФазы наблюдается уже в первый год работы и определяется в основном значительным угнетением Са, М g-АТФазы. С увеличением стажа до 5 лет наблюдается еще большая инактивация ферментов и в следующий срок исследования, при стаже 6-10 лет, практически остается на том же уровне. Достоверных изменений в активности К, Nа-АТФазы не отмечается и в дальнейшем.

Прослеживается лишь тенденция к снижению. Максимальное угнетение этого фермента наблюдается при стаже более 10 лет. Минимальная активность к этому времени регистрируется и в активности суммарной АТФазы и Са, Mg-АТФазы, но здесь мы фиксируем достоверные изменения относительно контрольной группы.

Анализ АТФазной активности эритроцитов в зависимости от степени компенсации функций показал, что достоверное угнетение суммарной активности фермента наблюдается уже в А группе, в которую включены лица удовлетворительно адаптированные, не предъявляющие жалоб на состояние здоровья. Значимое снижение активности суммарной АТФазы – результат незначительного инактивирования в этой группе ее составляющих –Ca,Mg– и К, Na-АТФаз.

С появлением признаков вегето-сосудистой дисфункции (группа Б), наряду с достоверным угнетением суммарной активности АТФазы, появляются достоверные изменения в функционировании Са,Мg-АТФаэы. Значительные отклонения в работе фермента отмечаются не только по отношению к контрольной группе, но и относительно усредненного покаivagant.ru зателя в группе А. В отношении К, Na-АТФазы сохраняется только тенденция к снижению активности. Существенная инактивация К, N а-АТФазы проявляется только в следущей группе, в которую включены лица с синдромом вегетососудистой дистонии. Для этой же группы характерно максимальное торможение в активности суммарной АТФазы и Са,Мg-АТФазы. Так же, как и в предыдущей группе, работа фермента достоверно снижена как относительно контроля, так и относительно группы А.

Таким образом, изучение АТФазной активности эритроцитов у рабочих производства ионола свидетельствует об ингибирующем действии данного комплекса химических факторов на активность АТФаз (табл. 2.2.3-2.2.5).

Динамика АТФ азной активности эритроцитов у рабочих производства ионола в зависимости интенсивности контакта с бисамином (мкат/л эритроцитов) КонГруппа.рабочих (посто- (импульсивтрольная Показатели группа.

Суммарная 2,520,05 1,950,06* 2,080,08* активность АТФ азы тролю АТФ аза ivagant.ru тролю АТФ аза тролю Динамика АТФ азной активности эритроцитов у рабочих производства ионола в зависимости от длительности контакта с бисамином (мкат/л эритроцитов) Показатели Суммарная ак- 2,520,05 1,950,06* 1,860,07* тивность АТФ азы Ca, Mg – АТФ 1,850,08 1,410,05* 1,340,08* аза K, Na – АТФ 0,660,06 0,580,04 0,520, аза ivagant.ru Динамика АТФ азной активности эритроцитов у рабочих производства ионола в зависимости от адаптированности к бисамину (мкат/л эритроцитов) Показатели Суммарная 2,520,05 1,850,08* 1,680,09* активность АТФ азы Ca, Mg – АТФ 1,850,08 1,300,08* 1,20,07* аза K, Na – АТФ 0,660,06 0,550,04 0,480,06* аза 2.2.4. Активность НАДН-метгемоглобинредуктазы и содержание метгемоглобина в эритроцитах Содержание метгемоглобина (МтНв) в крови у лиц контрольной группы варьировало в пределах от 0 до 1,4%, что соответствовало литературным данным. При использовании данного метода рамки физиологической нормы составляют 0-1,5% [113]. У рабочих производства ионола наблюдается значительное повышение скорости. Содержание МтНв у них колебалось от 0 до 4,6% и было достоверно выше, чем в контроле. Широкий диапозон колебаний данного показателя объясняет тот факт, что в некоторых случаях, несмотря на повышение уровня МтНв в несколько раз ivagant.ru по отношению к контролю, достоверности не наблюдается.

Отмечается более высокое содержание МтНв у женщин, что согласуется с выводами других авторов [9,10,169], хотя достоверных отличий не обнаружено ни в контрольной группе, ни у рабочих, занятых на производстве ионола. Это, видимо, связано с недостаточно высокой активностью НАДН-метгемоглобинредуктазы у женщин. Необходимо отметить, что подобная закономерность прослеживается и в контрольной группе, но различие это было еще менее значительным.Сопоставление результатов определения содержания МтНв и активности НАДН-МГР позволило установить следующие особенности. У рабочих, имеющих постоянный контакт с бисамином ( группа 1а) активность НАДНМГР достоверно угнетена, как относительно контрольной группы, так и относительно 16 группы, рабочие которой не имеют постоянного контакта с бисамином (р0,01). Снижение способности восстанавливать МтНв, при постоянном контакте с бисамином, ведет к значимому повышению его концентрации в крови рабочих 1а группы. В 16 группе содержание МтНв у обследуемых также несколько выше контроля, но при этом наблюдается незначительная активация НАДН-МГР, что позволяет организму поддеркивать уровень МтНв в рамках физиологической нормы.

Анализ исследуемых показателей в зависимости от длительности производственной деятельности в условиях синтеза ионола показал зависимость активности НАДНМГР от стажа. Как следует из таблицы, в первый год работы наблюдается угнетение ферментативной функции и, как следствие, повышение уровня метгемоглобина. У половины рабочих этой группы уровень МтНв в крови составляет более 1%.

С увеличением стажа до 5 лет чаще встречаются лица с нормальной активностью НАДН-МГР и с повышенной ivagant.ru активностью фермента. В этой группе наблюдается максимальная активность фермента и некоторое снижение содержания МтНв относительно предыдущей группы.

При стаже работы 6-Ю лет метгемоглобинредуцирующая функция вновь угнетена, а уровень МтНв выше 1% встречается примерно у половины обследованных. Если анализировать наблюдаемые изменения в зависимости от пола, то можно заменить разнонаправленную тенденцию в активности фермента в этой группе. У женщин угнетение фермента достигает 12% и, как следствие, наблюдается значимое, почти в три раза, повышение концентрации МтНв, выходящее за пределы физиологической нормы. У мужчин уровень МтНв превышает контрольные показатели, но наблюдаемая ак-тивация НАДН-МГР в этой группе, видимо, позволяет поддерживать в пределах физиологических границ. При стаже более 10 лет зависимая от гликолиза НАДНметгемо-глоинредуцирующая система сохраняет тенденцию к снижению. 0днако, судя по тому, что концентрация МтНв в крови все же снижается относительно предыдущей группы, можно сделать предположение о повышении роли других метгемоглобинредуцирующих систем в этот период.

Таким образом, у женщин роль гликолиза в восстановлении посредством НАДН-МГР достигает максимума уже к пяти годам работы, а у мужчин – к десяти годам работы на данном производстве. К этому времени, видимо, повышается роль второстепенных систем восстановления МтНв в эритроцитах. Описанные выше изменения можно рассматривать и под другим углом зрения с учетом генетически запрограммированных и наследственно закрепленных признаков. Возможно, что лица с наследственной недостаточностью НАДН-МГР или других ферментных систем, функционирование которых так или иначе отражается на способности восстанавливать МтНв, выбывают ivagant.ru из процесса производства в связи с ухудшением состояния здоровья, что приводит к повышению усредненного показателя активности НАДН-МГР. Воздействие метгемоглобинобразователей компенсируется активацией метгемоглобинредуцирующих систем, недостаточность которых проявляется в накоплении "метгемоглобинового груза", что по мнению некоторых исследователей предшествует изменениям нервной системы [8,9,10,110].

Для выяснения этого вопроса нами проведен анализ исследуемых показателей в зависимости от степени компенсации функций по трем группам. У рабочих группы А, которые при клинико-физиологическом обследовании не имели объективных отклонений в состоянии здоровья, уже наблюдается повышение уровня МтНв в крови, а у 30% представителей этой группы содержание МтНв превышает 1%. Но резервы основной метгемоглобинредуцирующей системы в этой группе еще достаточно высоки и адаптация достигается за счет активации НАДН-МГР. В следующей группе (группа Б), в которую включены лица с признаками дезаптации, содержание МтНв значительно выше контольной группы.

Причиной этого, видимо, является угнетение активности фермента, хотя и очень незначительное. Повышение содержали МтНв у лиц этой группы чаще всего встречалось при низкой активности НАДН-МГР, но в некоторых случаях скорость образования МтНв, вероятно, очень высокая, и активация НАДН-МГР не обеспечивает нормального уровня МтНв в крови. В третьей группе, в которую включены лица с объективными отклонениями, главным образом, со стороны нервной и сердечно-соудистой систем, обнаружены серьезные изменения со стороны метгемоглобинредуцирующей функции эритроцитов. Значительное угнетение активности НАДН-метгемоглобинредуктазы (на 26%) уже не обеспечивает уровня МтНв в пределах физиологической ivagant.ru нормы, содержание которого в крови повышается относительно контрольной группы более, чем в 4 раза. У женщин эти изменения более значительны – средний уровень МтНв у них достигает 2,1%, что превышает границы нормы. Это объесняется значительным угнетением НАДНметгемоглобинредуцирующей системы, активность которой составляет 66% от контроля. У мужчин инактивирующее влияние амина проявляется в меньшей степени.

Таким образом, исследования метгемоглобинредуцирующей функции эритроцитов показывают, что хроническое воздействие бисамина снижает скорость восстановления МтНв в крови у рабочих производства ионола. Одна из причин, видимо, связана с понижением активности основного метгемоглобинредуцирующего фермента, что более характерно для женского организма. Однако довольно часто высокие концентрации метгемоглобина обнаруживались при достаточно высокой активности этого фермента.

Из этого следует, что в образовании метгемоглобина при действии бисамина определенную роль играют другие факторы. К ним можно отнести модификацию сульфгидрильных групп в молекуле глобина, дефицит восстановленных форм НАД, как это следует из эксперимента, недостаточность НАДфН2. Для подтверждения этих предположений требуются дальнейшие исследования. Повышение уровня метгемоглобина предшествует появлению признаков заболеваний нервной системы. На это указывает тот факт, что увеличение концентрации метгемоглобина в крови постепенно нарастает в зависимости от степени компенсации функций. Уже в А группе, в которую включены лица с удовлетворительной адаптацией, каких-либо изменений в состоянии здоровья, наблюдается увеличениe концентрации МтНв в крови. У лиц с вегето-сосудистой дистонией ( группа В) уровень МтНв существенно превышает ivagant.ru пределы физиологической нормы. И хотя в этой группе активность НАДН2-метгемоглобинредуктазы самая низкая, но и в этом случае достоверное снижение активности фермента отмечается только у женщин (табл. 2.2.6-1.2.8).

Динамика активности НАДН-метгемоглабинредуктазы (мкМ 02Нв/мин х нНв) и содержание метгемоглобина в крови у рабочих (в % к Нв ) производства ионола в зависимости интенсивности контакта с бисамином ПоказаМ m; n-34,*– Р тели МГР Динамика активности НАДН-метгемоглабинредуктазы (мкМ 02Нв/мин х нНв) и содержание метгемоглобина в крови у рабочих (в % к Нв ) производства ионола в зависимости от стажа контакта с бисамином Показаная группа. М m; n-38,*– Р М m; n-34,*– Р тели МГР ivagant.ru Динамика активности НАДН-метгемоглабинредуктазы (мкМ 02Нв/мин х нНв) и содержание метгемоглобина в эритроцитов крови у рабочих (в % к Нв ) производства ионола в зависимости от уровня адаптированности к бисамину ПоказатеМ m; n-41,*– Р М m; n-15,*– Р контролю 2.2.5. Активность холинэстеразы сыворотки крови Известно, что соотношение в системе ацетилхолинхолинэстеразы отражает состояние парасимпатического отдела вегетативной нервной системы и является одним из основных звеньев сложного механизма нервной регуляции [67,68]. Ряд авторов отмечают изменения холинэргической системы, в основном активности сывороточной холинэстеразы, при влиянии различных химических агентов в производственных условиях [23,64,67,68,237,265].

Обнаружено, что холинэстеразная активность у мужчин выше, чем у женщин в возрасте до 50 лет, независимо от сезона [237]. Действие химических веществ также в значительной степени определяется полом работающих /68/.

ivagant.ru Учитывая, что в экспериментальных исследованиях бисамин оказывает инактивирующее действие на холинэстеразу сыворотки крови крыс, а также высокий процент функциональных изменений вегетативной нервной системы среди рабочих нефтехимического производства ионола, было сделано предположение о прогностической ценности исследования этого показателя в условиях данного производства. С этой целью было проведено определение холинэстеразы в сыворотке крови у 143 рабочих производства ионола и у 27 рабочих этого завода, но из вспомогательных цехов, составивших контрольную группу. Уровень активности фермента изучали в зависимости от возраста, пола, интенсивности контакта с бисамином и от длительности работы на данном производстве. По причине того, что возрастных колебаний в активности фермента нами не выявлено, этот фактор в дальнейщем не учитывался. В обследуемой группе у мужчин, занятых в производстве ионола, активность бутирилхолинэстеразы была значимо выше по сравнению с женщинами того же производства, а потому обработка материала велась с учетом пола рабочих. В контроле активность холинэстеразы сыворотки крови колебалась от 7,25 до 10,6 мкат/г белка; у рабочих производства ионола активности были шире – минимальная активность составляла 4,14, а максимальная – 11,54 мкат/г белка. Активность фермента холинэстеразы ниже 7,0 отмечается у 35,8% рабочих; низкая активность чаще встречается у женщин и составляет 39,1%. Мужчины с низкой активностью холинэстеразы составляют 33,7%. Активность фермента у мужчин снижена относительно контроля, однако не столь значительно, как это наблюдается у женщин того же производства, у которых фермент достоверно менее активен по сравнению с контрольной группой, так и относительно уровня активности холинэстеразы у мужчин.

ivagant.ru При постоянном контакте (группа 1а) с исследуемым веществом можно отметить значительное уменьшение активности фермента относительно группы сравнения как у мужчин, так и у женщин. Необходимо отметить, что среди женщин низкая активность фермента встречалась чаще – в 72% случаев, а у мужчин только в 33% случаев. Активации фермента выше нормы в этой группе мы не обнаружили. У мужчин, постоянно контактирующих с бисамином, активность фермента значительно снижена и относительно группы 16, не имеющих постоянного контакта с исследуемым амином, тогда как у женщин этого не наблюдается. Это, видимо, связано с тем, что при относительном контакте с бисамином (группа 16) наблюдается разнонаправленные изменения в активности фермента. У мужчин прослеживается тенденция к активации фермента, а у женщин, активность хотя и снижена относительно контроля, но менее значительно (на 10%), чем у женщин постоянно контактирующих с бисамином на 17%. В1б группе у 11% работающих активность фермента была выше 10,0 мкат/г белка; снижена – у 29% лиц и у 50% она находилась в пределах нормы. Сравнивая характер изменений активности холинэстеразы в этих двух группах, считаем возможным сделать вывод, что значимое снижение активности бутирилхолинэстеразы в сыворотке крови рабочих la группы, видимо, является следствием интенсивного влияния бисамина.

У женщин наблюдается достоверное снижение активности фермента независимо от стажа на данном производстве с незначи тельными колебаниями между стажевыми группами. Наиболее существенное снижение отмечается в первый год работы. В этой стажевой группе 60% женщин имеют активность ниже контрольного уровня менее 7,0 мкат/г белка. Незначительная активация ферivagant.ru мента при стаже 1-5 лет – лица с активностью фермента ниже контрольного минимума составляют всего 23%, – при более длительном стаже сменяется тенденцией к уменьшению активности.

У мужчин исследуемый фермент в первый год работы незначи тельно активируется, примерно на 5%. Максимальное снижение ак тивности холинэстеразы наблюдается при стаже 1-5 лет; в этой группе активность фермента достоверно снижена относительно контрольной группы – 45% мужчин имеют активность фермента ниже контроля.

При более длительной экспозиции активность фермента нормализуется, а при стаже более 10 лет вновь наблюдается снижение. Однако достоверности в изменениях холинэстеразной активности в этих группах не наблюдается.

Таким образом, влияние бисамина на организм человека вызывает снижение активности холинэстеразы сыворотки крови, но у мужчин оно менее значительно, чем у женщин, что, возможно, связано с особенностями гормональной регуляции биосинтеза этого фермента в клетке.

Анализ функционирования холинэстеразы в зависимости от степени компенсации функций также указывает на более высокую чувствительность женщин к воздействию факторов, выделяемых в воздух рабочих помещений в процессе нефтехимического производства ионола. Как уже отмечалось выше, все обследованные были распределены в зависимости от степени компенсации функций на три группы. У женщин активность фермента изменяется прямо пропорционально степени компенсации функций.

Достоверное сниже ние активности фермента наблюдается уже в группе с удовлетвори тельной адаптацией ( группа А), т.е. тогда, когда еще никаких патологических изменений со стороны нервной системы не выявляется. Несмотря на это, 30% женщин этой группы имели активivagant.ru ность фермента ниже нормы. С появлением признаков дезадаптации (группа Б), процент лиц с активностью фермента ниже 7,0 мкат/г белка повышается до 44,4%. При неудовлетворительной адаптации ( группа В) низкая активность холинэстеразы наблюдается в 100% случаев.

У мужчин снижение активности холинэстеразы сыворотки крови не превышало 10% по сравнению с контрольной группой. Тенденция к снижению активности холинэстеразы, также как у женщин, появляется уже у здоровых, удовлетворительно адаптированных лиц (группа А )при отсутствии каких-либо признаков дезадаптации. Однако, по срав нению с женщинами, степень подавления активности фермента у них не достигает значимых величин ни в одной из трех групп. В отли чие от женщин, у которых повышенная активность холинэстеразы в сыворотке крови не встречалась, у мужчин повышение активности фермента наблюдалось довольно часто.

В группе с удовлетворительной адаптацией 6,4% мужчин имели активность фермента выше 10,0 мкат/г белка, но и для мужчин снижение активности энзима под влиянием данного комплекса факторов является более характерным ( 33% обследованных ). При появлении признаков дезадаптации ( группа Б ) число лиц с пониженной активностью фермента увеличивается и составляет 37%, тогда как повышение наблюдается только у одного представителя этой группы, а у остальных активность фермента держится на уровне нижней границы контрольных показателей. Лица с синдромом вегето-сосудистой дистонии, неудовлетворительно адаптированные (группа В ), имели активность холинэстеразы ниже 7,0 мкат/г белка в 39% случаев, повышения активности не наблюдается ни у одного представителя этой группы.

ivagant.ru Одна из причин, выявленного нами снижения активности холинстеразы в сыворотке крови у рабочих, видится в том, что бисамин предположительно может проявлять свойства обратимого ингибитора отношению к этому ферменту. Известно, что на активной поверхности холинэстераз существует "анионный центр", который играет ориентирующую роль при взаимодействии с субстратом и соответствует катионной головке ацетилхолина, и "эстеразный центр", соответствует сложноэфирной группе. Весамин достаточно легко протонируется по атому азота, образуя при этом четвертичные аммониевые соединения, антихолинэстеразные свойства которых доказаны [49,142,143].

Положительно заряженный атом азота электростатически взаимодейстует с анионным центром холинэстераз и тем самым обеспечивает образование комплекса фермент-ингибитор. Этот комплекс непрочен, и поэтому, здесь особенно ярко выражены конкурентные отношения с естественным субстратом [142]. Кроме двух положительно заряженных атомов азота, благодаря чему становится возможным электростатическое притяжение к анионному центру холинэстеразы молекулы бисамина, каждый из них связан с тремя метильными группами, что также немало важно, т. к. они обусловливают возникновение неспецифических сил ван-дер-Ваальса с анионным центром. Это было убедительно указано Вильсоном [149, который исследовал тормозящее действие холинэстеразу производных аммония, содержащих различное число метильных групп метиламин, диметиламин, триметиламин и тетраметиламин. Все четыре соединения не отличались друг от друга по ряду, но ингибирующее действие было тем выше, чем большее число метильных групп было при атоме азота. Таким образом, разница в тормозящей активivagant.ru ности зависела от образования дополнительных связей за счет сил ван-дер-Ваальса.

Перечисленные выше факты, по нашему мнению, достаточно убетельно свидетельствуют в пользу того, что бисамин может выступать в роли обратимого ингибитора холинэстераз. Однако для угочнения этого вопроса требуются дополнительные целенаправленные исследование (табл.2.2.9-2.2.11).

Динамика активности холинэстеразы в сыворотке крови (К.Ф.3.1.1.8) у рабочих в зависимости от интенсивности Женщины,n- ны,n- Мужчины, n- n- ivagant.ru Динамика активности холинэстеразы в сыворотке крови (К.Ф.3.1.1.8) у рабочих в зависимости от стажа работы Группы по Стат. пока- Контрольстажу 1-5 стажу Женщины, n- n- Мужчины, n- n- Динамика активности холинэстеразы в сыворотке крови у рабочих в зависимости от адаптированности к бисамину Женщины,n- ны,n- ны,n-30 тролю Мужчины, n- ivagant.ru n- 2.2.6. Содержание гаптоглобина в сыворотке крови и фенотипы гаптоглобина у рабочих По современным представлениям биологическая роль гаптоглобина Нр не ограничивается известной ранее функцией защиты организма от потери геминового железа, как это считалось ранее. Наряду с Нв, он способен образовывать комплексы и с другими белковыми и небелковыми соединениями, выполняя, таким образом, не специфическую, в отличие от антител, защитную функцию.

Сходство четвертичной структуры молекулы Нр с молекулой иммуноглобулинов позволило предположить существование некоторого сходства их функций [117]. Позднее выяснилось, что гаптоглобин, подобно антителам, пособен агглютинировать некоторые стрептококки, играя определенную роль в иммунной системе [236].

Белковые компоненты Нр состоят из двух различных полипептидных цепей. Различия трех обычных фенотипов Нр I-I, Нр 2-1, Нр 2-2 сводятся к структурным особенностям альфа цепи,бетта –цепи идентичны для всех типов Нр [137].

Нр 1-1 представляет собой монодисперсный белок с молекулярной массой – 99 000, Нр 2-т и Нр 2-2 циркулируют в крови в виде системы полимеров, их средняя молекулярная масса значительно выше, чем у Нр I-I [187].

Несмотря на значительное количество работ, роль Нр в организме до конца еще не ясна. Предполагают, что одной из возможных функций Нр является способность предотвращать протеолитическое действие катепсинов при ivagant.ru их попадании туда в результате воспалительных процессов. Нр и его комплекс с Нв оказывали ингибирующее действие на активность лизосомальных протеиназ – катепсинов А и В, выделенных из печени крыс [238].

Многократное увеличение количества Нр в ответ на различные раздражители связано со стимуляцией белкового синтеза. Роль же стимуляторов в синтезе Нр играют гормоны коры надпочечников [186]. Синрез гаптоглобина происходит исключительно в печени, очевидно, в ее паренхимных клетках. Катаболизм комплекса НрНв протекает на порядок быстрее, нежели катаболизм свободного Нр, и осуществляйся в печени, костном мозге и селезенке ретикуло-эндотелиальными клетками [187]. Этим объясняется снижение уровня Нр в сыворотке крови при циррозах и других паренхиматозных заболеваниях, печени [103]. При всех патологических заболеваниях, связанных с гемолизом, концентрация Нр падает до нерегистрируемых величин [176]. Это происходит в результате того, что Нр быстрее расходуется на образование комплекса с Нв, чем вновь синтезируется, т.е. увеличение катаболизма Нр в связи с гемолизом не служит адекватным стимулом синтеза Нр [187].

С 60-х годов появились работы, в которых обращено внимание существование взаимосвязи между генетическим типом Нр и частотой некоторых заболеваний. Так, частота Нр 1-1 у пациентов с аллергическим контактным дерматитом, а также среди больных миеломной болезнью была выше, чем в контроле [112]. У лиц с фенотипом Нр 2-2 прослеживается предрасположенность к инфаркту миокарда, гипертонической болезни и сахарному диабету.

Это, видимо, связано с более низкой противосвертывающей реакцией, чем при типе Нр 2-1 и Нр I-I [139]. На сопряженность гиперкоагуляционных сдвигов при фенотипе ivagant.ru Нр 2-2, а именно повышенную вязкость угнетение фибринолиза, указывает Л.М.Галкина [39]. В развитии тонзиллита и сирингомиелии тип Нр 2-2 считается фактом риска [16,255]. Более высокие титры антител к стрептококкам выявлены носителей типа Нр 2-1, затем Нр 2-2 и самый низкий титр – при I-I [236].

Объяснение выше перечисленным фактам пока не найдено. Это возможно, что тии Нр при наследовании сцеплен с другими признаками, определяющими скорость тех или иных метаболических реакций. Это предположение подтверждают исследования, указывающие на взаимосвязь активности некоторых ферментов с генотипом Нр. Активность эсфатазы, например, выше на 18% при генотипе Нр, чем при генотипе Нр1 [249] При этом же генотипе повышена активность креатинкиназы и ее изоферментов MB, аспартатаминотрансферазы и лактатдегидрогеназы [206].

Несомненно, большое практическое значение имеют исследования по изучению влияния различных токсических соединений на уровень в крови. Количество работ такого плана незначительно. Подьем уровня Нр в крови морских свинок обнаружен при воздействии триэтилентетраамина [261]. Выявлено повышение концентрации Нр в крови у рабочих, контактирующих с асбестовой пылью [84], хлорорганические пестициды снижали содержание Нр в крови. Здесь интересен тот факт, что снижение Нр происходило только у тех рабочих, генотипе которых имеется аллель Нр2, причем оно наиболее выражено в случае гомозиготного типа Нр2Нр2 [141]. Н.А.Яковлев с соавторами обнаружили, что в условиях длительного воздействия хрома дисфункция нервной системы чаще развивается у лиц с фенотипом Нр 2-2 [64].

ivagant.ru В наших исследованиях содержание Нр в сыворотке крови было определено у 378 рабочих производства ионола и у 243 доноров, не имеющих контакта с химическими факторами производства, которые представили контрольную группу. Концентрация Нр не выходила за рамки физиологической нормы и варьировала в пределах от 0,45 до 1,48 г/л в контрольной группе и от 0,4 до 1,6 г/л в обследуемой группе рабочих. Наряду с концентрацией гаптоглобина определяли фенотип Нр у рабочих и доноров с целью изучения фенотического вклада в количественные изменения в зависимости от стажа, пола, возраста и адаптационных возможностей.

Как уже отмечалось в предыдущих разделах (гл.2.7.) в норме концентрация Нр в сыворотке крови в определенной степени зависит от его типа. Полученные нами результаты соответствуют литературным данным как по количественным показателям, так и по фенатипическому распределению при обследовании контрольной группы. У рабочих нефтехимического производства ионола эта закономерность несколько изменена. Количество Нр при фенотипе 2и Нр 2-1 примерно одинаково. Содержание Нр у рабочих достоверно повышено относительно контроля. Однако вклад разных фенотипов в это повышение неодинаков. Так, у индивидуумов с фенотипом Нр 2-2 наблюдается наибольший прирост концентрации Нр (19%), гда как у индивидуумов с фенотипом Нр 2-1 и Нр I-I прирост этого белка был намного скромнее (соответственно 7% и 8%).Мужчины и женщины имели примерно одинаковые значения концентрации гаптоглобина в сыворотке крови, как в обследуемой группе рабочих, так и в контрольной группе, и потому пол работающих в контакте с бисамином и доноров в дальнейшем не учитывался. Среди рабочих чаще встречаются лица с фенотипом Нр И-1 и с фенотипом Нр 2-2.

ivagant.ru Если рассматривать процентное соотношение фенотипов Нр в стажевых группах, то прослеживается определенная зависимость. Количество рабочих с фенотипом Нр 2-1 постепенно увеличивается, что по нашему мнению свидетельствует о хороших адаптационных возможностях в условиях производства ионола лиц с этим фенотипом. Рабочие же с гомозиготными типами Нр выбывают из процесса производства с увеличением стажа на данном производстве.

Количество Нр у рабочих, имеющих фенотип Нр 2- значительно повышается уже в первый год работы и достоверно отличается от уровня этого показателя в контрольной группе, достигая максимума стаже более 10 лет.

Достоверность наблюдается и всех других стажевых группах. У рабочих с гетерозиготным типом –Нр значимое повышение количества Нр появляется при стаже 1- лет, с максимальным показателем содержания Нр при стаже 6-10 лет. У лиц с гомозиготным типом Нр I-I существенное повышение концентрации Нр в сыворотке крови появляется только при стаже более 10 лет. Колебания между стажевыми группами в уровне Нp однако не существенны. Можно сказать, что существенных колебаний в концентрации в зависимости от стажа не наблюдается. Основной прирост в содержании этого белка происходит в первый год работы и в дальнейшем поддерживается организмом на том же уровне.

Анализ количественных изменений Нр по адаптационным группам показал, что рабочие удовлетворительно адаптированные (группа А), независимо от фенотипа Нр имеют самый высокий уровень Нр, достоверно отличающийся от контрольной группы (табл.4.19.). С появлением признаков дезадаптации (группа Б) количество Нр в сыворотке крови снижается относительно группы А; значимое превышение контрольного уровня сохраняется только при ivagant.ru фенотипе Нр 2-2. При неудовлетворительной адаптации группа В содержание Нр в сыворотке еще более приближается к контрольному уровню. Снижение концентрации Нр, вероятнее всего связано с ускоренным гемолизом эритроцитов, на что указывает кислотная резистентность эритроцитов табл., и образованием гаптоглобингемоглобиновых комплексов, которые не промеряются риваноловым методом, используемым для определения концентрации Нр в сыворотке крови.

На основании полученных данных можно сделать следующие выводы: повышение уровня гаптоглобина в сыворотке крови, видимо, можно расценивать как компенсаторную реакцию на воздействие химических факторов производства ионола и в какой-то степени отражющее реактивность организма.

Лица с фенотипом Нр 2-2 более чувствительны к данному комплексу производственных факторов, но у них же быстрее наступает срыв адаптационных возможностей, о чем свидетельствует уменьшение количества рабочих с этим фенотипом высоко стажированных группах в несколько раз и увеличение количества рабочих с признаками дезадаптации. Незначительный процент рабочих, неудовлетворительно адаптированных с фенотипом Нр 2-2, по нашему мнению, не противоречит этому выводу, т.к. стаж работы у лиц с фенотипом Нр 2-2, которые попали в эту группу, менее продолжителен, по сравнению с рабочими этой же группы с фенотипом Нр 2-1. Таким образом, имеются все основания считать фенотип Нр 2-2, определяемый у рабочих, контактирующих в процессе производства ионола с бисамином, одним из факторов риска, а лиц с фенотипом гаптоглобина 2-1, имеющими наиболее высокие адаптационные возможности к данному комплексу производственных факторов (табл.2.2.12-2.2.15).

ivagant.ru Количественные изменения гаптоглобина в зависимости марный пок.

кол.Нр Процентное распределение фенотипов гаптоглобина в зависимости от стажа работы ivagant.ru Фенотипический вклад в количественные изменения гаптоглобина в зависимости от стажа работы (г/л) Группы трольная До 1 года 1-5 лет 6-10 лет по тиn- пам Нр 1-1 1,220,03 1,210,25 1,350.07 1,350.22 1,640. 2-1 1,090,02 1,140,07 1,70,04 1,80,05 1,70, 2-2 0,960,02 1,70,01 1,80,05 1,30,06 1,210, Количественные изменения гаптоглобина по фенотипам в зависимости от степени компенсации функций 2.3. Гематологическая индикация ионола В целях выяснения характера действия на систему крови химических веществ, не относящихся непосредственно к "кровяным ядам”, нами изучались некоторые химические соединения из группы антиокислителей. Широivagant.ru ко распространенный в практике антиокислитель ионол (2,6-ди-треть-бутил-п-крезол, бутилированный окситолуол, алкофен-БП, бубинол) считается малотоксичным ингибитором окислительных процессов.

Подопытным животным –кроликам, вводились относительно небольшие концентрации ионола (60, 100, мг/кг) внутримышечно в течение 10 дней ежедневно. Дозы ионола, соответствующие 60, 100 мг/кг, достоверных сдвигов в показателях периферической крови не вызывали. При введении ионола в концентрации 150 мг/кг были отмечены заметные изменения со стороны форменных элементов циркулирующей крови. Уже на 2-3 сутки опыта количество эритроцитов начинало уменьшаться и на 10 сутки принимало минимальное выражение. Дефицит эритрона в этот срок в среднем равнялся 1,0х1012/л (22,2%), и одновременно сопровождался ретикулоцитозом. Количество ретикулоцитов на 10 сутки увеличилось и составило 36,3%о. Содержание гемоглобина в крови у подопытных животных имело тенденцию к уменьшению. Как и у других показателей красной крови, количество гемоглобина наиболее заметно снижалось на 10 сутки. Дефицит содержания гемоглобина в этот срок в среднем составлял 2,0%. Общий объем эритроцитов (по гематокриту) постепенно уменьшался и на 10 сутки принимал минимальную величину (в среднем 25,4).

Средний диаметр эритроцитов подопытных кроликов имел тенденцию к уменьшению и на 10 сутки опыта в среднем равнялся 6,1 мк. При этом нормоциты составляли 46,1% (6,0 – 7,0 мк), макроциты – 24,3% (7,1 – 8,5), микроциты – 29,6% (5,9 – 4,8 мк). По сравнению с исходным состоянием увеличивался уровень анизоцитоза, больше стало макроцитов и микроцитов при соответствующим снижении относительного числа нормоцитов.

ivagant.ru Следовательно, концентрация ионола в дозе 150 мг/кг обуславливала эритроцитопению, ретикулоцитоз, небольшой микроцитоз, анизоцитоз и некоторое снижение содержания гемоглобина в крови.

Параллельное изучение лейкоцитов крови кроликов при введении ионола 150 мг/кг показало определенные изменения как количественного, так и качественного характера. Они носили обратно пропорциональный характер количественным изменениям красной крови. Наибольшему дефициту эритрона соответствовало максимальное повышение количества лейкоцитов. На 10 сутки опыта число лейкоцитов по сравнению с исходным уровнем повышалось в среднем на 2,4 х 109/л.

Цитохимические исследования при введения ионола (150, мг/кг) показали снижение содержания гликогена и некоторое повышение активности ферментов пероксидазы и щелочной фосфатазы в псевдоэозинофилах, что отражает усиление внутриклеточного обмена.

В лейкоцитограмме наблюдалось увеличение относительного числа псевдоэозинофилов, моноцитов при соответствующем понижении содержания лимфоцитов. Одновременно происходил сдвиг "влево" в нейтрофилограмме и лимфоцитограмме.

Параллельно в лейкоцитограмме изучались деструктивные формы, которые отличаются необычной структурой. В литературе принято их считать "патологическими" или "дегенеративными" (И.А.Кассирский и соавт., 1962).

Более подробно они приводятся при описании гематологической картины лучевой болезни. Однако эти разновидности лейкоцитозов возникают не только при патологии или вследствие перерождения ("дегенерации"), а являются результатом естественного процесса отмирания лейкоцитов, представляющего собой неотъемлемую часть клеточivagant.ru ного обновления. В физиологических условиях альтерация лейкоцитов мало уловима, но в состоянии функционального напряжения, а также при нарушении равновесия между процессами отмирания и образования лейкоцитов в условиях эксперимента или патологии содержание деструктивных форм клеток белой крови может увеличиваться. В наших исследованиях как в норме, так и при воздействии ионолом (150 мг/кг) были отмечены различные проявления альтерации лейкоцитов.

Cреди нетипичных гранулоцитов были выявлены псевдоэозинофилы с "токсикогенной зернистостью". Эти клетки определялись при окраске мазков крови по методу Май-Грюнвальд-Гимза. Токсикогенная зернистость наблюдалась в цитоплазме юных палочкоядерных и чаще сегментоядерных псевдоэозинофилов. Эти гранулы грубо пикнотичны, с резкими контурами, неодинаковой величины и, как правило, имеют темный цвет. Форма гранул неправильная или в виде коротких толстых палочек. Цитоплазма между ними отличалась некоторым просветлением. Ядро псевдоэозинофилов с "токсигенной зернистостью" характеризовалась в одних случаях плотной структурой хроматина, а в других – некоторыми признаками "распластывания", т.е. постепенной гомогенизацией его содержимого. В таких клетках "токсигенная зернистость" была видна и на поверхности ядер.

В противоположность псевдоэозинофилам с "токсигенной зернистос-тью" в периферической крови кроликов встречались и гранулоциты со скудной или вовсе без специфической зернистости. Ядро таких клеток сохраняло свое типичное строение или подвергалось фрагментации.

Размеры псевдоэозинофилов при этом также изменялись.

Одни клетки увеличивались, как бы набухали, другие, наоборот, уменьшались, сморщивались. В такой клетке иноivagant.ru гда оставался лишь один сегмент ядра с эксцентричным расположением. Цитоплазма приобретала комковатый характер и окрашивалась оксифильно. Параллельно в мазках крови встречались псевдоэозинофилы, ядро которых распадалось одновременно на множество мелких частиц.

Специфическая зернистость цитоплазмы сохраняла прежний вид,но иногда между ними появлялись вакуоли.

Процесс отмирания псевдоэозинофилов совершался и другим путем, когда преобладал кариолизис. В этом случае клетка увеличивалась. В ядре и цитоплазме наблюдались крупные просветвления-вакуоли, а содержимое ядра клетки "растекалось" по всей цитоплазме. Хроматин терял обычную плотность. Структура его становилась нежно гомогенной с отдельными пикнотическими островками. Клетка выпускала множество цитоплазменных выростов, оболочка ее контуировалась очень плохо. Так образовались "тельца Боткина-Гумпрехта” гранулоцитарного происхождения. В некоторых случаях наблюдалась фрагментация псевдоэозинофила на несколько частей в виде разбитого стекла с сохранением структуры ядра и цитоплазмы.

Из числа нетипичных лимфоцитов были отмечены такие клетки, которые испытывали разделение ядра на 2 или части. Хроматин ядра при этом имел плотную структуру.

Цитоплазма характеризовалась резкой базофилией или наличием сероватого оттенка, или резко розовой окраской.

Иногда в ней содержалась мелкая азурофильная зернистость. Наряду с отмирающими лимфоцитами путем распада (циторексис) встречались и "формы растворения" с образованием "телец Боткина-Гумпрехта". Моноциты отмирали также путем цитолизиса. В таких случаях "тельца БоткинаГумпрехта" имели довольно большие размеры (до 30 мк).

Описываемые форменные элементы крови возникали в процессе постепенного "распластывания", "расползания" ядра ivagant.ru по всей цитоплазме клетки. При этом ядро набухало, растекалось, изменяя свою обычную форму. Контуры его сглаживались в виде наплывающего тумана, хроматин ядра терял свое характерное строение, “таял", испытывая явление нежной гомогенизации. Вначале этот однородный вид нарушался наличием грубых глыбок хроматина в виде островков и участков просветления, вакуолей. Цитоплазма подвергалась равномерному просветлению. Иногда появлялись вакуоли.

Позже происходило полное перемешивание содержимых ядра и цитоплазмы. Одновременно всю клетку как бы обволакивал густой туман и имеющиеся плотные островки хроматина теряли контуры и напоминали далекие темные облака неправильной округлой, перистой или продолговатой формы. В целом клетка заметно увеличивалась в размерах (до 20-27 мк), принимала вид неправильного эллипса со множеством цитоплазматических выростов и имела хорошо выраженные контуры. Кроме того, местами по периферии клетки, примыкая к ее оболочке, появлялись контрастные ножки шириной примерно в 0,5-1,0 мк. В дальнейшем клетка начинала "растекаться", занимая свободное пространство между эритроцитами, и приобретала самые разнообразные формы. Иногда такая клетка напоминала растекающуюся каплю краски в мазке крови. Однако в отличие от азура-11 и эозина она имела красновато-фиолетовый тон. На последнем этапе "тельца Боткина-Гумпрехта" полностью покрывались мелкими просветлениями и начинали крошиться на мелкие фрагменты, образуя детрит.

Электронная микроскопия деструктивных форм лейкоцитов выявляла выраженные дистрофические и некротические изменения. Псевдоэозинофилы с "токсигенной зернистостью" характеризовались наличием неправильной формы, разбросанных по всей цитоплазме электронноплотных участков коагуляционного некроза как гиалоivagant.ru плазмы, так и структурных элементов. “Токсигенные гранулы", расположенные в гиалоплазме, не имели оболочку и отличались неровными слабыми контурами."Токсигенная зернистость", обусловленная тотальной денатурацией белков в структурных элементах, чаще всего белково-гиалиновой дистрофии митохондрий, имела несколько иные тинкториальные особенности – контрастные ровные границы, гомогенную или слоистую резко выраженную осмиофильную внутреннюю структуру. Локализованные участки так называемого сухого некроза, воспринимаемые при световой микроскопии как "токсигенная зернистость", иногда определялись в расширенных канальцах эндоплазматического ретикулума, а также в крупных везикулярных образованиях. Реже наблюдался коагуляционный некроз в целом пластинчатого комплекса, который также может быть оценен под оптическим микроскопом как "токсигенная зернистость". Если придерживаться взгляда, что "токсигенная зернистость" – это участки коагуляции белка в цитоплазме, можно допустить, что она имеется и в других видах лейкоцитов, т.е.

лимфацитах и моноцитах.

Псевдоэозинофилы с "токсигенной зернистостью", как правило, не имели глубоких некробиотических сдвигов. Имеющиеся изменения сводились к некоторой гомогенизации хроматина ядра, содержимых митохондрий, расширению канальцев эндоплазматического ретикулума, а также незначительной гидратации гиалоплазмы. Псевдоэозинофилы, наблюдаемые в периферической крови в противоположность псевдоэозинофилам с "токсигенной зернистостью", в состоянии дегрануляции в одних случаях не испытывали глубоких некротических изменений ядра и органелл цитоплазмы. Лишь отмечалась в легкой степени фрагментация крист митохондрий и расширение каivagant.ru нальцев эндоплазматического ретикулума. В других случаях дегрануляция нейтрофилов являлась только одним из многочисленных признаков общего разрушения клетки.

Электронно-микроскопическая картина псевдоэозинофилов с частичной или полной редукцией ядра одновременно характеризовалась и заметными деструктивными изменениями цитоплазмы, в том числе и специфической зернистости. "Тельца Боткина-Гумпрехта" гранулоцитарного происхождения имели электронно-плотную полимофорную грануляцию, которая, вероятно, была обусловлена частично остатками специфической зернистости и ядерного материала, а также ограниченными участками фокального коагуляционного некроза компонентов цитоплазмы. В описываемых тельцах хорошо заметны признаки разрушения как ядра, так и цитоплазмы. Ядерная оболочка фрагментировалась и местами полностью растворялась. В участках разрыва ядерной мембраны кариоплазма как бы "вливалась" в цитоплазму и смешивалась с гиалоплазмой, превращаясь в относительно однородную массу со средней электронной плотностью и расплывчатыми контурами. Хроматин ядра терял свое типичное строение и напоминал растекающуюся разбавленную темную краску. В цитоплазме на фоне общей гидратации определялись остатки разрушенных органоидов (обрывки цитомембран, фрагменты митохондрий с гомогенизированной матрицей и т.д.), а также "тельца Маллори" – локальные участки коагуляционного некроза гиалоплазмы. Иногда эти форменные элементы со множеством везикулярных структур выпускали большое число ложноножек – цитоплазматических выростов. "Тельца Боткина-Гумпрехта", являющиеся результатом преобладания колликвационного некроза над коагуляционным некрозом лимфоцитов и моноцитов, чаще были лишены гранулярных структур и предivagant.ru ставляли собой полигональной формы, более или менее однородную массу. Однако в этой относительно гомогенной массе, особенно если имели место не самые поздние стадии цитолизиса, нетрудно было заметить сильное изменение ядра с разрушенной оболочкой. В цитоплазме находились лизирующиеся осмофильные образования коагуляционного некроза. В некоторых случаях в "тельцах Боткина-Гумпрехта" общая гидратация сочеталась с ограниченной формой ее вакуолизацией.

Приведенные в работе деструктивные формы лейкоцитов в сущности являлись проявлением разных этапов единого процесса клеточной альтерации, без которой немыслимо представить клеточную регенерацию. Ранние признаки освобождения организма от "изношенных", потерявших способность эффективно функционировать клеточных элементов, прежде всего затрагивали наиболее ответственные в энергетическом балансе и пластических процессах структурные образования – митохондрии и эндоплазматический ретикулум. Деструкция митохондрий начиналась с нарушения правильного расположения и фрагментации крист, исчезновения гранул, потери двухконтурности оболочки. Возможно, эти изменения в митохондриях носили обратимый характер и являлись проявлением одного из этапов внутриклеточного обновления.

Однако в основе описываемых нами форменных элементов крови могли лежать и грубые деструктивные изменения. В одних случаях происходило уплотнение митохондрий (их матрикса), коагуляция белков с образованием электронно-плотных структур типа "белково-гиалиновых" превращений. Последние имели неровные, слабо выраженные контуры и гомогенное или слоистое строение. В других – наблюдалось набухание митохондрий. Вслед за гомогенизацией внутренних структур наступали вакуолиivagant.ru зация или общая гидратация матрикса. На фоне выраженного отека и растворения крист выступали участки коагуляции белка типа белково-гиалиновой дистрофии гомогенного и слоистого характера. Впоследствии происходила фрагментация и лизис митохондрий. Ранние изменения эндоплазматического ретикулума заключались в очаговом или диффузном расширении канальцев, исчезновении на поверхности рибосом, скоплении в расширенных канальцах обрывков мембран, распавшихся клеточных структур ("заболачивание"). К более поздним и глубоким изменениям эндоплазматического ретикулума относились разрыв оболочек сильно расширенных канальцев, появление в них электронно-плотных участков вследствие коагуляции белка, фрагментация канальцев, а затем и растворение их.

В погибающих лейкоцитах определенные изменения испытывал и пластинчатый комплекс. Эти сдвиги заключались чаще в набухании цистерн и растворении внутренних структур. Несколько реже после коагуляционного некроза наблюдалось превращение их в плотные осмифильные тельца. Таким образом, в изучаемых нами деструктивных формах лейкоцитов периферической крови в целом прослеживались стереотипные явления некроза тканевых структур. В клетках возникали типичные изменения ядра и цитоплазмы. Ядро сморщивалось (кариопикноз), распадалось на глыбки (кариорексис) и растворялось (кариолизис). Эти изменения ядра, очевидно, отражали динамику процесса активации гидролаз-рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, что ведет к отщеплению от нуклеопротеидов фосфатных группировок и высвобождению нуклеиновых кислот, подвергающихся деполимеризации.

В цитоплазме происходили денатурация и коагуляция белка, что может поначалу захватывать часть цитоплазмы (локальный коагуляционный некроз), а затем и всю клетivagant.ru ку. Наиболее ранние изменения при этом выявлялись в митохондриях и эндоплазматическом ретикулуме. По мере увеличения в них деструкции, вероятно, усиливалась активность лизосомного аппарата клетки. Вслед за коагуляцией цитоплазмы происходили не только ее распад (плазморексис), но и все нарастающая гидратация, что может привести к фокальному колликвационному некрозу или расплавлению всей клетки (цитолиз). В динамике некроза клетки наблюдалась смена процессов коагуляции и колликвации. Однако нередко отмечалось преобладание одного из них, что может зависеть от различных причин.

Видимо, этим и объясняется наличие разных видов деструктивных форм лейкоцитов в периферической крови.

Параллельное изучение цитохимических особенностей разрушающихся лейкоцитов показывало заметные сдвиги внутриклеточного обмена. При окраске мазков крови на гликоген во всех видах деструктивных лейкоцитов отмечалась отрицательная реакция. Постановка бензидиновой реакции на выявление пероксидазы за исключением редких случаев также показывала отрицательные результаты. В то же время в изучаемых лейкоцитах определялась умеренная активность щелочной фосфатазы. В целом полученные цитохимические данные указывали на нарушение гликогенообразовательной функции, снижение окислительновосстановительной реакции и на некоторую активацию процессов, связанных с деятельностью гидролаз, катализируемых гидролиз эфиров фосфорной кислоты. Последнее, очевидно, обусловлено выходом в гиалоплазму гидролитических ферментов из лизосом, направленных на переваривание разрушающихся внутриклеточных структур. Процентное содержание деструктивных лейкоцитов в периферической крови здоровых кроликов составляло в среднем 0,8%. В условиях введения ионола относительное число их ivagant.ru повышалось. На 10 сутки оно приобретало максимальное значение в среднем 2,3%. Это происходит в состоянии наибольшего дефицита эритрона. Повышенное содержание деструктивных лейкоцитов периферической крови в условиях гипоксии, обусловленной введением ионола, отражало более высокий уровень обновления белой крови вследствие более быстрого изнашивания и альтерации в связи с функциональным напряжением.

Таким образом, в периферической крови кроликов, как в норме, так и в эксперименте, циркулировало некоторое количество деструктивных лейкоцитов, которые отражали резорбтивную фазу физиологической, а также репаративной регенерации белой крови. Разные формы деструктивных лейкоцитов обуславливались, во-первых, преобладанием одного из стереотипных процессов клеточной альтерации-коагуляции и колликвации, а вовторых, неравномерным распадом ядра и цитоплазмы.

Существовала прямо пропорциональная зависимость между числом деструктивных лейкоцитов в циркулирующей крови и лейкоцитарной реакцией. Усиление регенерации белой крови сопровождалось повышением числа деструктивных лейкоцитов. Некробиозу лейкоцитов предшествовали дистрофические изменения внутриклеточных структур. Наиболее ранние деструктивные изменения возникали в митохондриях и эндоплазматическом ретикулуме.

Однако определенные дистрофические изменения в лейкоцитах могли быть проявлением репарации структурных элементов клетки и носить обратимый характер.

Следовательно, применение антиокислителей небезразлично для организма. В физиологических концентрациях биоантиоксиданты необходимы для осуществления ферментативного окисления клеточного дыхания и, как правило, или стимулирует, или нормализует его. Однако при ivagant.ru длительном действии высоких концентраций антиокислителей может наступить снижение синтеза в организме собственных антиоксидантов, что повлечет усиление свободнорадикального окисления. Но и чрезмерное преобладание биологического окисления при резком угнетении свободнорадикального окисления может привести к нарушению постоянства уровня суммарной антиокислительной активности тканей, что служит одним из основных условий физиологического гомеостаза. Кроме того, некоторые продукты переокисления, в частности, перекиси липидов, являются промежуточными продуктами гормонов, простогландина Е и прогестерона. Они также участвуют в гидроксилировании астероидного ядра холестерина. Перекиси, образовавшиеся в результате неферментативного окисления, могут выступать в роли неспецифических участков обмена, например, в фаго– и пиноцитозе, регулируя проницаемость мембран лизосом. Таким образом, значительное и длительное изменение антиокислительного эффекта определяется не количеством антиокислителя, а тем, насколько фактически удается усилить систему естественных тканевых биоантиокислителей.

Многие патологические процессы в организме сопровождаются кислородным голоданием тканей. При этом часто изменяется соотношение биологического ферментационного и свободнорадикального окисления. В свя-зи с этим нами было предпринято исследование действия ионола в условиях гипоксии. Для этого была создана экспериментальная модель циркуляторно-гемической гипоксии – постгеморрагическая анемия путем кровопускания из расчета 20 процентов из общей массы крови кроликов.

Анемизированным животным вводились небольшие дозы – 30 мг/кг, которые в целом оказывали благоприятное действие на течение анемии и восстановление крови.

ivagant.ru Изучение состояния красной крови показало, что через 3 суток после кровопускания среднее количество эритроцитов составляла 2,8х1012/л, тогда как при введении 30 мг/кг ионола оно соответствовало 3,5х1012/л, что указывает на значительное снижение уровня дефицита эритрона. В последующие сутки опыта темпы восстановления количества эритроцитов у животных, получавших ионол, заметно ускорились по сравнению с контрольной группой.

Так, через 15 суток после кровопускания число эритроцитов в крови у контрольной группы в среднем равнялась 3,9х1012/л, тогда как при введении ионола в дозе 30 мг/кг этот показатель соответствовал 4,4х1012/л.

Содержание гемоглобина в крови после кровопускания (контроль) и при введении ионола анемизированным животным было неодинаково. Различия содержания гемоглобина в известной степени повторяли сдвиги со стороны количества эритроцитов. Через 3 суток после кровопускания содер-жание гемоглобина в крови контрольных животных в среднем равнялось 6,1г%, а при введении ионола – 7,6 г%. Через 15 суток опыта описываемый показатель у контрольной группы составлял 10,1 г%, а при введении ионола – 10,9 г%.

Общий объем эритроцитов (по гематокриту) в различных условиях опыта, как и содержание гемоглобина, претерпевал изменения, аналогичные сдвигам эритроцитов. Через 3 суток после кровопускания общий объем эритроцитов у контрольных животных составлял в среднем 17,3 ед., а при введении ионола – 27,6 ед. Через 15 суток этот показатель у контрольной группы равнялся 26, ед., а при введении ионола – 28,9 ед.



Pages:     | 1 || 3 | 4 |
 


Похожие работы:

«Московский городской психолого-педагогический университет Научный центр психического здоровья РАМН Московский НИИ психиатрии К 100-летию Сусанны Яковлевны Рубинштейн Диагностика в медицинской психологии: традиции и перспективы Москва 2011 ББК 48 Д 44 Редакционная коллегия: Зверева Н.В., кандидат психологических наук, доцент (отв. ред.) Рощина И.Ф. кандидат психологических наук, доцент Ениколопов С.Н. кандидат психологических наук, доцент Д44 Диагностика в медицинской психологии: традиции и...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ КАЛИНИНГРАДСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ А.А. Девяткин ЯВЛЕНИЕ СОЦИАЛЬНОЙ УСТАНОВКИ В ПСИХОЛОГИИ ХХ ВЕКА Калининград 1999 УДК 301.151 ББК 885 Д259 Рецензенты: Я.Л. Коломинский - д-р психол. наук, проф., акад., зав. кафедрой общей и детской психологии Белорусского государственного педагогического университета им. М. Танка, заслуженный деятель науки; И.А. Фурманов - д-р психол. наук, зам. директора Национального института образования Республики...»

«В.А. Слаев, А.Г. Чуновкина АТТЕСТАЦИЯ ПРОГРАММНОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ, ИСПОЛЬЗУЕМОГО В МЕТРОЛОГИИ: СПРАВОЧНАЯ КНИГА Под редакцией доктора технических наук, Заслуженного метролога РФ, профессора В.А. Слаева Санкт-Петербург Профессионал 2009 1 УДК 389 ББК 30.10 С47 Слаев В.А., Чуновкина А.Г. С47 Аттестация программного обеспечения, используемого в метрологии: Справочная книга / Под ред. В.А. Слаева. — СПб.: Профессионал, 2009. — 320 с.: ил. ISBN 978-5-91259-033-7 Монография состоит из трех разделов и...»

«МИНОБРНАУКИ РОССИИ ФГБОУ ВПО Уральский государственный лесотехнический университет Институт качества жизни В.А. Копнов А.И. Бессонов О.М. Астафьева Стратегический подход к управлению качеством закупок машиностроительного предприятия Монография Екатеринбург 2012 УДК 658.5.011 ББК 65.9(2)-80 К 65 Рецензенты: Доктор экономических наук, профессор Тамбовского государственного технического университета К.Н. Савин; Доктор экономических наук, профессор Мордовского государственного университета им. Н.П....»

«.. -. URL: http://www.molgvardia.ru/nextday/2008/10/10/2143?page=26;. URL: http://www.extremeview.ru/index/id/26305 Северный (Арктический) федеральный университет Northern (Arctic) Federal University Ю.Ф. Лукин ВЕЛИКИЙ ПЕРЕДЕЛ АРКТИКИ Архангельск 2010 УДК [323.174+332.1+913](985)20 ББК 66.3(235.1)+66.033.12+65.049(235.1)+26.829(00) Л 841 Рецензенты: В.И. Голдин, доктор исторических наук, профессор; Ю.В. Кудряшов, доктор исторических наук, профессор; А.В. Сметанин, доктор экономических наук,...»

«Белгородский государственный технологический университет им. В.Г. Шухова Государственное учреждение культуры Белгородский государственный центр народного творчества Н. И. Шевченко, В. А. Котеля Философия духовной культуры: русская традиция Белгород 2009 УДК 13 ББК 87.21 Ш 37 Рецензенты: д-р филос. наук, проф. Ю.Ю. Вейнгольд (БГТУ им. В.Г. Шухова) д-р филос. наук, проф. М.С. Жиров (БелГУ) канд. искусствоведения, доц. И.Н. Карачаров (БГИКИ) Шевченко, Н.И. Ш 37 Философия духовной культуры: русская...»

«К а к и м о в А.К М ЕХ А Н И Ч ЕС К А Я О БРАБО ТКА И ТЕХН О ЛО ГИ Я КО М БИ Н И РО ВАН Н Ы Х М Я С Н Ы Х П РО ДУКТО В Какимов А.К. М Е Х А Н И Ч Е С КА Я О БРАБО ТКА И ТЕХН О ЛО ГИ Я КО М Б И Н И Р О В А Н Н Ы Х М Я С Н Ы Х ПРО ДУКТО В Р е с п у б л и к а Казахстан С е м и п а л а ти н ск, 2006 У Д К 6 3 7.5.0 7 : 6 37.5.03 : 6 3 7.5 14.7 ББК 36.92 К 16 Ре цензенты : д о к то р т е хн и ч е с к и х н а у к, проф ессор Б.А. Рскелд иев д октор техн и чески х н аук, п р о ф е ссо р Д. Ж...»

«Семченко В.В. Ерениев С.И. Степанов С.С. Дыгай А.М. Ощепков В.Г. Лебедев И.Н. РЕГЕНЕРАТИВНАЯ БИОЛОГИЯ И МЕДИЦИНА Генные технологии и клонирование 1 Министерство сельского хозяйства Российской Федерации Министерство здравоохранения и социального развития Российской Федерации Омский государственный аграрный университет Институт ветеринарной медицины и биотехнологий Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Россельхозакадемии Российский национальный...»

«356 Раздел 5. ПУБЛИКАЦИЯ ИСТОЧНИКОВ А. В. Шаманаев УДК 902/904 ДОКУМЕНТЫ О ПРЕДОТВРАЩЕНИИ ХИЩЕНИЙ КУЛЬТУРНЫХ ЦЕННОСТЕЙ НА ХЕРСОНЕССКОМ ГОРОДИЩЕ ВО ВТОРОЙ ПОЛОВИНЕ XIX в. Исследуется проблема предотвращения хищений культурных ценностей и актов вандализма на территории Херсонесского городища (Крым, Севастополь). Публикуется семь документов 1857—1880 гг. из фондов ГАГС, которые характеризуют деятельность Одесского общества истории и древностей, монастыря Св. Владимира и военных властей по созданию...»

«Н. А. Б а л о н и н НОВЫЙ КУРС ТЕОРИИ УПРАВЛЕНИЯ ДВИЖЕНИЕМ Rank [ X0 AX0. B AB. ] = n (A E) S = B X = X0 + A+(B – AX0) Санкт-Петербургский государственный университет 1 Н. А. Балонин НОВЫЙ КУРС ТЕОРИИ УПРАВЛЕНИЯ ДВИЖЕНИЕМ САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 2000 УДК 62.52 ББК 32.965 Б 20 Рецензент д-р физ.-мат. наук, проф. А.Х. Гелиг Рекомендовано к печати Ученым советом 2 Учебно-научного центра математики, механики и астрономии С.-Петербургского государственного университета Балонин Н.А. Б 20 Новый курс теории...»

«Министерство образования и науки РФ Алтайский государственный университет Центр социально-экономических исследований и региональной политики А. М. Сергиенко, С. А. Решетникова Социальная поддержка СельСких молодых Семей в алтайСком крае Монография Барнаул Издательство Алтайского государственного университета 2013 УДК 316 ББК 60.561.51 C 323 Рецензенты: доктор социологических наук, профессор О.Т. Коростелева; доктор социологических наук, профессор С.Г. Максимова; доктор социологических наук,...»

«Иванов А.В., Фотиева И.В., Шишин М.Ю. Скрижали метаистории Творцы и ступени духовно-экологической цивилизации Барнаул 2006 ББК 87.63 И 20 А.В. Иванов, И.В. Фотиева, М.Ю. Шишин. Скрижали метаистории: творцы и ступени духовно-экологической цивилизации. — Барнаул: Издво АлтГТУ им. И.И. Ползунова; Изд-во Фонда Алтай 21 век, 2006. 640 с. Данная книга развивает идеи предыдущей монографии авторов Духовно-экологическая цивилизация: устои и перспективы, которая вышла в Барнауле в 2001 году. Она была...»

«Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Северо-Осетинский институт гуманитарных и социальных исследований им. В.И. Абаева ВНЦ РАН и Правительства РСО-А ПАРСИЕВА Л.К., ГАЦАЛОВА Л.Б. ГРАММАТИЧЕСКИЕ СРЕДСТВА ВЫРАЖЕНИЯ ЭМОТИВНОСТИ В ЯЗЫКЕ Владикавказ 2012 ББК 8.1. Парсиева Л.К., Гацалова Л.Б. Грамматические средства выражения эмотивности в языке. Монография. / Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Северо-Осетинский институт гуманитарных и социальных исследований им....»

«БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИНСТИТУТ КОНФУЦИЯ Дин Жуджунь, М. М. Ковалев, В. В. Новик ФЕНОМЕН ЭКОНОМИЧЕСКОГО РАЗВИТИЯ КИТАЯ Монография Минск Издательский центр БГУ 2008 УДК 338.24.021.8(510) ББК 65.9(5КИТ)-1 Д44 Рецензенты: доктор экономических наук, профессор В. Ф. Байнев, доктор экономических наук, профессор Л. Н. Давыденко, доктор экономических наук, профессор А. Н. Тур Рекомендовано к изданию Ученым Советом экономического факультета БГУ протокол № 4 от 26 февраля 2008 г. Жуджунь...»

«169. Юдин В.В. Тектоника Южного Донбасса и рудогенез. Монография. Киев, УкрГГРИ. 2006. 108 с., (с геологической картой ). 1 УДК 551.24+662.83(477.62) ББК 26.3 (4 Укр - 4-Дон) Юдин В.В. Тектоника Южного Донбасса и рудогенез. Монография.- К.: УкрГГРИ, 2006._10-8 с. - Рис. 58 Проведено детальное изучение тектоники в зоне сочленения Донецкой складчато-надвиговой области с Приазовским массивом Украинского щита. Отмечена значительная противоречивость предшествующих построений и представлений. На...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО МОРСКОГО И РЕЧНОГО ТРАНСПОРТА ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ МОРСКОГО И РЕЧНОГО ФЛОТА ИМЕНИ АДМИРАЛА С. О. МАКАРОВА С. А. Барановская Н. И. Сербенко ТЕАТР В КУЛЬТУРЕ ДЕТСТВА Рекомендовано Редакционно-издательским советом Государственного университета морского и речного флота имени адмирала С. О. Макарова Санкт-Петербург 2014 УДК 111.12:792 ББК (Щ) 85.33 Рецензенты: доктор...»

«Е.Ю. Иванова-Малофеева РЕФОРМА ГОСУДАРСТВЕННОЙ ДЕРЕВНИ В ТАМБОВСКОЙ ГУБЕРНИИ (середина 30-х – середина 50-х гг. XIX в.) • ИЗДАТЕЛЬСТВО ТГТУ • 3 Министерство образования и науки Российской Федерации Тамбовский государственный технический университет Тамбовский государственный университет им. Г.Р. Державина Е.Ю. ИВАНОВА-МАЛОФЕЕВА РЕФОРМА ГОСУДАРСТВЕННОЙ ДЕРЕВНИ В ТАМБОВСКОЙ ГУБЕРНИИ (середина 30-х – середина 50-х гг. XIX в.) Тамбов • Издательство ТГТУ • ББК Т3(2Р-4Т) И Р е ц е н з е н т ы: Доктор...»

«АДЫГЕЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ А.А. Хатхе НОМИНАЦИИ РАСТИТЕЛЬНОГО МИРА В КОГНИТИВНОМ И ЛИНГВОКУЛЬТУРОЛОГИЧЕСКОМ АСПЕКТАХ (на материале русского и адыгейского языков) Майкоп 2011 АДЫГЕЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ А.А. Хатхе НОМИНАЦИИ РАСТИТЕЛЬНОГО МИРА В КОГНИТИВНОМ И ЛИНГВОКУЛЬТУРОЛОГИЧЕСКОМ АСПЕКТАХ (на материале русского и адыгейского языков) Монография Майкоп 2011 УДК 81’ 246. 2 (075. 8) ББК 81. 001. 91 я Х Печатается по решению редакционно-издательского совета Адыгейского...»

«ЮРИДИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ КАЗАНСКОГО УНИВЕРСИТЕТА: два века образования и науки УДК 34 ББК 67Г Ю70 Печатается по решению Юбилейной комиссии по издательской деятельности Казанского университета Научный редактор доктор юрид. наук, профессор И.А.Тарханов Редакционная коллегия: профессор Р.М.Валеев, профессор Ф.Р.Сундуров, профессор М.В.Талан, фотоснимки И.Ф.Сафина Ю70 Юридический факультет Казанского университета: Два века образования и науки. – Казань: Изд-во Казанск. ун-та, 2004. – 180 с. ISBN...»

«Жизнь замечательн ых людей Се р и я б и о г р а фи й Основана в 1890 году  Ф. Павленковым  и продолжена в 1933 году  М. Горьким                          И.Ю. Лебеденко, С.В.Курляндская и др. КУРЛЯНДСКИЙ                                                 Москва Молодая гвардия                 _       УДК 616.31(092) ББК 56. К Авторский проект И. Ю. ЛЕБЕДЕНКО Коллектив авторов С. В. КУРЛЯНДСКАЯ, А. В. БЕЛОЛАПОТКОВА, Г. И. ТРОЯНСКИЙ, Е. С. ЛЕВИНА, В. С. ЕСЕНОВА © Лебеденке И. Ю., авт. проект, ©...»







 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.