WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

Министерство здравоохранения и социального развития

Иркутский государственный медицинский университет

(ГОУ ВПО ИГМУ МИНСОЦЗДРАВ РАЗВИТИЯ РОССИИ)

Медико-профилактический факультет

Кафедра микробиологии

Методические рекомендации

к практическим занятиям для студентов ИГМУ

по теме:

«МОРФОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ»

Иркутск - 2010 Методические рекомендации составлены:

Профессором, д.б.н. Е.В. Симоновой Ассистентом кафедры: Ю.В. Журавлевой Методические рекомендации составлены в соответствии с типовым учебным планом общеобразовательного стандарта подготовки студентов высших медицинских учебных заведений и медицинских факультетов университетов по курсу «Микробиология с вирусологией и иммунологией» и рабочей программой кафедры микробиологии ИГМУ Методические рекомендации обсуждены на заседании кафедры микробиологии ИГМУ Протокол №от _2010.

Зав. кафедрой, академик, профессор, д.м.н. В.И. Злобин Методические рекомендации рассмотрены и рекомендованы к изданию на заседании методической комиссии медико-биологического профиля ИГМУ.

Протокол №_от 2010.

Председатель ЦМК, профессор, д.м.н. Р.В. Киборт.

ЗАНЯТИЕ Тема: «МНОГООБРАЗИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ. МИКРОБЫ –

ВОЗБУДИТЕЛИ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЧЕЛОВЕКА. МОРФОЛОГИЯ БАКТЕРИЙ.

МЕТОДЫ ИХ ИССЛЕДОВАНИЯ: МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД»

ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:

1. Мир микробов. Принципы классификации микроорганизмов. Современная классификация микроорганизмов. Основные таксономические категории. Критерии вида. Номенклатура микроорганизмов.

2. Особенности морфологии микроорганизмов.

3. Методы исследования морфологии микроорганизмов. Строение светового микроскопа. Правила работы с ним. Особенности световой микроскопии с иммерсионным объективом.

ТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Устройство микробиологической лаборатории.

2. Организацию рабочего места;

3. Технику безопасности при работе с микроорганизмами;



4. Многообразие микроорганизмов и принципы их систематики;

5. Принципы, положенные в основу микроскопического метода исследования.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

1. Готовить фиксированный мазок из исследуемого материала;

2. Уметь окрашивать простым методом;

3. Уметь микроскопировать с помощью иммерсионной системы;

4. Уметь дифференцировать микроорганизмы по их морфологическим особенностям.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ НА ЗАНЯТИИ

ЗАДАНИЕ 1. Изучить правила работы в лаборатории кафедры (1).

Ознакомиться с правилами техники безопасности при работе с микроорганизмами (2).

После чего необходимо расписаться в журнале по технике безопасности.

1. ПРАВИЛА РАБОТЫ В ЛАБОРАТОРИИ КАФЕДРЫ

1. Каждый студент должен иметь постоянное рабочее место.

2. Материал для работы на занятии принимает каждый дежурный по группе у лаборанта кафедры под документ (студенческий билет или зачетную книжку), микроскопы выдаются только под зачетную книжку.

1.1. Перед началом работы студенты обязаны:

1. Надеть медицинский халат 2. Сумки, книги, другие личные вещи положить в стол.

3. Проверить состояние рабочего стола. о всех выявленных нарушениях сообщить дежурному и лаборанту кафедры.

1.2. Обязанности студентов и дежурных во время работы:

1. Во время занятия дежурный раздает материал под контролем преподавателя.

2. Во время работы необходимо:

а) соблюдать правила личной гигиены и ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ;

б) содержать рабочее место в образцовом порядке и чистоте;

в) бережно обращаться с микроскопом, посудой, инструментами другими предметами лабораторного оборудования;

г) проявлять максимальное внимание ко всем этапам работы с культурами и зараженными животными;

д) при выполнении задания не разговаривать и не ходить по лаборатории;

е) все предметы, которые могут быть использованы в работе с живыми микроорганизмами, должны быть сразу обеззаражены прожиганием в пламени спиртовки (петли), либо погружением в раствор для дезинфекции (стекла, пипетки и др.).

1.3. Обязанности студентов и дежурных по окончании работы:

1. Навести порядок на рабочем месте 2. Все использованные стекла положить в банку.

3. Все засеянные пробирки и чашки сдать дежурному для помещения в термостат.

4. Отработанный материал сдать дежурному для стерилизации.

5. Привести в порядок микроскоп.

6. Тщательно вымыть руки с мылом 7. Дежурному вменяется в обязанность:

а) пробирки, чашки, засеянные учебной группой снабдить сопроводительной запиской, в которой указать факультет, номер группы, дату и время посевов, и сдать лаборанту;

б) весь отработанный материал сдать лаборанту;

в) проверить состояние рабочих столов и устранить дефекты уборки;





г) практикум сдать лаборанту;

д) выключить свет

2. Т Е Х Н И К А Б Е З О П А С Н О С Т И

1. Запрещается работать в лаборатории без халатов и шапочек, выпускать из под одежды волосы, воротнички.

2. Запрещается входить в учебные лаборатории в головных уборах и верхней одежде.

3. Запрещается курить, принимать пищу в учебных лабораториях кафедры.

4. Запрещается класть на стол сумки, одежду.

5. Весь материал, с которым предстоит работать, должен рассматриваться как инфицированный.

6. При работе с исследуемым материалом или с патогенными культурами необходимо строго соблюдать следующие технические приемы:

- перед работой необходимо тщательно проверить целостность стеклянной посуды;

- не прикасаться руками к исследуемому материалу и конденсату в засеянных чашках;

- работать только с помощью инструментов (пинцеты, бактериальные петли, иглы, корнцанги и пр.);

- при посеве материала сделать надпись на пробирках, чашках Петри, колбах, флаконах с указанием номера анализа, культуры и даты посева;

- не наклоняться близко над спиртовкой и не протягивать над огнем руки;

- не зажигать спиртовку от другой горящей спиртовки, это можно делать только при помощи спичек;

- растворы, содержащие патогенные микроорганизмы набирать в пипетку с помощью резиновой груши, насасывать ртом и переливать растворы из сосуда в сосуд через край запрещается;

7. О случаях аварии с посудой, содержащей заразный материал, или проливании заразного материала надо немедленно сообщить преподавателю и вместе с ним провести мероприятия по обеззараживанию загрязненных патогенным материалом одежды, частей тела, предметов рабочего места.

ЗАДАНИЕ 2. Разобрать по схеме (рис.1) морфологические формы разных микроорганизмов.

ЗАДАНИЕ 3. Познакомиться с использованием иммерсионной системы для микроскопирования микроорганизмов. Технику микроскопирования с иммерсионной системой записать в тетрадь.

В связи с малыми размерами микроорганизмов изучение их морфологии возможно только с помощью микроскопов, дающих значительное увеличение и обладающих высокой разрешающей способностью. Для исследования морфологии микроорганизмов используют микроскопы, различных типов: световой, фазово – контрастный, темнопольный, люминесцентный, электронный и другие.

Наиболее часто в микробиологической практике пользуются световым микроскопом с иммерсионным объективом.

Иммерсионным объективом называется такой объектив, между фронтальной линзой которого и рассматриваемым препаратом находится масло. В отличие от сухого объектива, где между этими предметами находится воздух. При этом ввиду разницы показателей преломления стекла (на котором находится препарат) и воздуха часть световых лучей отклоняется и не попадает в глаз наблюдателя. Преимущество иммерсионного объектива перед сухим состоит в том, что между стеклом и линзой устанавливается однородная (гомогенная среда) среда (стекло препарата – масло – стекло объектива) с одинаковым коэффициентом преломления. Благодаря этому все лучи, не преломляясь и не изменяя своего направления, попадают в объектив, чем и достигается наилучшее освещение мельчайших объектов и четкость их изображения.

Для этого обычно пользуются кедровым маслом, показатель преломления которого (1,52) почти равен показателю преломления стекла.

ТЕХНИКА МИКРОСКОПИРОВАНИЯ

С ИММЕРСИОННОЙ СИСТЕМОЙ

1. Поднять конденсор микроскопа до уровня предметного столика. Открыть диафрагму.

2. Установить объектив с малым увеличением.

3. Препарат поместить на предметный столик.

4. При помощи плоского зеркала добиться хорошей освещенности поля зрения 5. Перевести револьвер микроскопа на иммерсионный объектив (ОИ 90, МИ 90).

6. На препарат нанести каплю иммерсионного масла.

7. Под контролем глаза макровинтом медленно опускать тубус с иммерсионным объективом до соприкосновения линзы объектива с каплей масла (очень осторожно погрузить линзу в масло так, чтобы не раздавить предметного стекла).

8. Глядя в окуляр макровинтом медленно поднять тубус до появления изображения в поле зрения. Вращая микровинт (не более чем на половину оборота) добиться четкого изображения объекта.

9. По окончании микроскопирования поднять тубус, снять препарат, салфеткой осторожно удалить масло с объектива.

10. Объектив отвести в сторону. Опустить конденсор.

При микроскопировании с помощью микроскопа со встроенным в основание осветителем необходимо:

1. Настроить освещение.

2. На препарат, находящийся на предметном столике нанести каплю иммерсионного масла.

3. Ввести в ход лучей иммерсионный объектив (100*).

4. Под контролем глаза с помощью макровинта осторожно поднять предметный столик до соприкосновения объектива с каплей иммерсии на препарате.

5. Глядя в окуляр макровинтом медленно опустить предметный столик до появления изображения в поле зрения, с помощью микровинта добиться резкого изображения объекта.

6. По окончании работы опустить предметный столик, снять препарат, салфеткой осторожно удалить масло с объектива.

10. Объектив отвести в сторону, выключить свет.

ЗАДАНИЕ 4. Провести микроскопию готовых препаратов приготовленных из разных культур микроорганизмов. Зарисовать в тетрадь, подписать.

ЗАДАНИЕ 5. Познакомиться с методикой микроскопического метода лабораторной диагностики. Определение и этапы микроскопичсекого метода записать в тетрадь.

Микроскопический метод исследования – это метод обнаружения и определения микроорганизмов в исследуемом материале на основании:

- морфологии микробной клетки;

- специфического расположения микробных клеток в мазке;

- наличия специфических (необязательных) органоидов в микробной клетке;

- тинкториальных свойств микробной клетки (отношение к красителям).

МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРЕПАРАТА

ОКРАШИВАНИЕ ПРЕПАРАТА

В зависимости от цели исследования мазок окрашивается разными методами:

- Простые (определение формы микроорганизмов, расположения их в мазке);

- Сложные (выявление отдельных клеточных структур)

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО РЕЗУЛЬТАТАМ ИССЛЕДОВАНИЯ

I этап. ТЕХНИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТА Для этого используют чистые и обезжиренные предметные стекла. Если стекло хорошо подготовлено, то капля воды, нанесенная на его поверхность, равномерно растекается. Для приготовления мазка, материал берут стерильной бактериальной петлей. Бактериальную петлю держат как писчее перо.

Чтобы простерилизовать бактериальную петлю, сначала держатель петли в горизонтальном положении вносят в среднюю часть пламени спиртовки, а затем в вертикальном положении прокаливают саму петлю (до покраснения). Повторяют несколько раз.

Техника приготовления мазков определяется характером исследуемого материала.

1. Стерильной круглой бактериальной петлей (полное ушко) или стерильной пипеткой взять исследуемый материал.

2. Поместить на середину сухого чистого стекла.

3. Взятый материал осторожно круговыми движениями распределить по стеклу ровным тонким слоем, формируя мазок диаметром 1- 2 см.

4. Простерилизовать бактериальную петлю в пламени спиртовки, пипетку поместить в емкость с дезинфицирующим раствором.

1. На середину стекла стерильной бактериальной петлей нанести каплю стерильного физиологического раствора или дистиллированной воды.

2. Простерилизовать петлю.

3. Взять пробирку с исследуемым материалом в левую руку, вращательным движением вынуть пробку из пробирки, прижимая ее мизинцем и безымянным пальцем правой руки к ладони.

4. Обжечь края пробирки, осторожно ввести петлю и взять материал.

5. Вынуть петлю, обжечь край пробирки, закрыть пробкой.

6. Петлю с исследуемым материалом внести в каплю, эмульгировать, круговыми движениями распределить в виде мазка круглой или овальной формы, диаметром 1- см.

7. Простерилизовать бактериальную петлю.

ВЫСУШИВАНИЕ

Мазки высушивают на воздухе при нормальной температуре или в потоке теплого воздуха, держа стекло высоко над пламенем спиртовки. Недопустимо перегрева, так как при этом может нарушиться структура микроорганизмов.

ФИКСАЦИЯ МАЗКА

Цель фиксации:

- закрепить мазок на стекле, тем самым предохранить мазок от смывания в процессе окраски;

- обезвредить патогенный материал, тем самым обезопасить себя от возможности заражения;

- убитые микроорганизмы лучше окрашиваются.

Способы фиксации:

1. ФИЗИЧЕСКИЙ способ, в основу которого положено воздействие высокой температуры на микробную клетку. Предметное стекло берут за край мазком вверх и троекратно проводят через наиболее горячую часть пламени. Фиксация этим способом продолжается 6 секунд, а действие пламени – 2секунды. Правильность фиксации проверяют путем прикладывания стекла к тыльной поверхности руки. При этом стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущения ожога. При излишнем нагревании мазок портится, вследствие сильного изменения структуры клеток; недостаточная фиксация не достигает цели, так как мазок смывается при последующей обработке.

В ряде случаев (при исследовании тонких структур клетки) фиксация жаром оказывается слишком грубой. Тогда прибегают к фиксации препарата химическим способом.

2. ХИМИЧЕСКИЙ способ предусматривает применение химических средств (фиксаторы), вызывающих коагуляцию белков цитоплазмы. Для этого фиксатор наливают на мазок или погружают в сосуд с фиксирующей жидкостью на определенное время, а затем высушивают. Наиболее употребляемыми являются следующие фиксаторы:

а) метиловый спирт – в течение 5 минут;

б) этиловый спирт (96) – 10 минут;

в) смесь Карнуа (этиловый спирт: уксусная кислота – 1:1);

г) ацетон- 5 минут;

д) пары формалина - в течение нескольких секунд.

II этап. ОКРАШИВАНИЕ ПРЕПАРАТОВ Для окраски препаратов в бактериологической практике используются как основные, так и кислые красители. Из основных красителей наиболее часто применяются: нейтральный красный – сафранин, фуксин (красные); генцианвиолет, метилвиолет, кристалвиолет (фиолетовые); везувин (коричневый); метиленовый синий, малахитовый зеленый. Из кислых красителей ширококе применение находят: кислый фуксин, эозин (красные), Конго, пикриновая кислота (желтые), нигрозин (черный). Для окраски мазков пользуются растворами красок или красящей бумагой, предложенной Синевым А.И.

Различают простые и сложные методы окраски. При простом методе прокрашивается вся клетка, при сложном – определенные клеточные структуры.

Простой метод окраски позволяет быстро определить форму микроорганизмов, размеры, расположение микроорганизмов в мазке. Для этого применяют какой–нибудь один краситель. Чаще всего пользуются фуксином или метиленовым синим.

ТЕХНИКА ПРОСТОГО ОКРАШИВАНИЯ

1. Приготовленный и зафиксированный препарат поместить на стеклянный мостик.

2. На поверхность мазка налить раствор красителя, так, чтобы краситель равномерно покрывал мазок, если применяется красящая бумага, то на мазок нанести несколько капель воды и положить окрашенную бумажку величиной 2 на 2 см.

3. Выдержать: фуксин Пфейффера - 1-2 минуты, метиленовая синь - -5 минут.

4. По окончании экспозиции препарат промыть водой, пока стекающая вода не станет бесцветной.

5. Мазок подсушить на воздухе или с помощью фильтровальной бумаги, затем микроскопировать.

В правильно окрашенном и хорошо промытом препарате поле зрения остается светлым и чистым, а окрашенными оказываются только клетки микроорганизмов.

ЗАДАНИЕ 6. Из чистой культуры микроорганизмов, выросшей на скошенном питательном агаре, приготовить фиксированный препарат. Окрасить простым методом. Промикроскопировать, определить морфологию бактерий и расположение их в мазке. Препарат зарисовать.

Методические рекомендации к выполнению задания № 6.

а) Обратите внимание на характер исследуемого материала. От этого будет зависеть техника приготовления мазка.

б) Следите, чтобы мазок получился тонким и ровным.

в) Приготовленный мазок сушите на воздухе, в крайнем случае, высоко над пламенем спиртовки.

г) Не забудьте зафиксировать мазок. Проконтролируйте качество фиксации мазка.

д) При окрашивании точно выдерживайте время экспозиции. Не забудьте тщательно промыть препарат. Окрашенный препарат сушите на воздухе или с помощью фильтровальной бумаги, осторожно промокая по краям мазка.

е) При микроскопировании масло наносите только на сухой мазок. Иначе изображение не будет фиксироваться, будет «плыть».

ж) Оцените качество приготовленного препарата.

з) Изучите морфологию микроорганизмов и характер их расположения в приготовленном вами мазке. Сравните с изображением на таблицах. Попробуйте дать название. Проконсультируйтесь с преподавателем.

е) После окончания микроскопирования не забудьте привести микроскоп в порядок.

Тема: «СТРОЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ. СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ

ОКРАСКИ. МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД ЛАБОРАТОРНОЙ

ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:

1. Отличия эукариотической клетки от прокариотической.

2. Строение бактериальной клетки. Постоянные и непостоянные структуры бактериальной клетки.

3. Строение клеточной стенки. Различия грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов. Значение для таксономии.

4. Постоянные структурные компоненты бактериальной клетки (нуклеоид, мезосомы, рибосомы, ЦПМ) 5. Кислотоустойчивые бактерии. Особенности химического состава.

Диагностическое значение.

6. Споры бактерий: функции, значение, химический состав. Этапы спорообразования. Этапы прорастания спор.

7. Капсула бактерий: химический состав. Функции, роль капсулообразования в патогенезе инфекционных заболеваний.

8. Включения. Химический состав. Значение. Условия появления.

9. Плазмиды и другие внехромосомные факторы наследственности. Строение.

Функции. Роль в детерминации патогенных признаков и лекарственной устойчивости.

10. Жгутики бактерий. Строение и их значение для бактериальной клетки.

Классификация микроорганизмов по расположению и числу жгутиков.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Знать отличия эукариотической клетки от прокариотической.

2. Знать строение бактериальной клетки и функциональную значимость структурных компонентов клетки.

3. Знать назначение и сущность сложных методов окраски.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

1. Уметь окрашивать препараты по методу Грама.

2.Уметь дифференцировать микроорганизмы на основе их тинкториальных свойств.

3. Уметь в готовых микроскопических препаратах дифференцировать необязательные клеточные структуры.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ.

ЗАДАНИЕ 1. Разобрать отличия в строении прокариотических клеток от эукариотических, используя таблицу 1.

Отличительные особенности прокариотических и эукариотических клеток.

1. Химический состав Нет различий 4. Генетический материал Представлен в виде Представлен в виде 7.Субклеточные органоиды:

ЗАДАНИЕ 2. Разобрать строение бактериальной клетки, функции обязательных и необязательных компонентов бактериальной клетки (рис. 1-4).

ЗАДАНИЕ 3. Изучить сущность и назначение сложных методов окраски (рис.

5).

Сложные методы окраски (их еще называют дифференциальными) основаны на особенностях физико-химического строения микробной клетки. Они применяются для изучения структуры клетки, а также для дифференциации микроорганизмов на основе тинкториальных свойств.

При сложном способе окраски на мазок, приготовленный из исследуемого материала, воздействуют двумя красящими веществами, из которых один является основным, а другой дополнительным. Кроме красящих веществ, при сложных методах окраски применяют различные дополнительные вещества: спирт, кислоты, щелочи – для обесцвечивания или протравы микроорганизмов.

Промикроскопировать. Дать заключение Методические рекомендации к выполнению задания № 4.

1. Ознакомьтесь с сущностью и методикой окрашивания по методу Грама.

2. Какую роль выполняет раствор Люголя при окрашивании по методу Грама?

3. Какие дифференцирующие вещества используются при окраске по Граму?

4. При окрашивании препарата полностью придерживайтесь методики. Четко выдерживайте указанное время экспозиции красителей и дополнительных веществ.

5. Оцените качество окрашивания препарата.

6. Найдите в мазке грамотрицательные микроорганизмы. Какую форму они имеют? Как вы назовете (учитывая морфологию) грамположительные бактерии? В случае необходимости проконсультируйтесь у преподавателя. Зарисуйте препарат и подпишите его.

7. С какой целью используют данный метод окрашивания?

ОКРАСКА ПО ГРАМУ.

Сущность: Все бактерии по способности окрашиваться красителями трифенилметанового ряда в сочетании с йодом делятся на две большие группы. К одной относятся бактерии, в клетках которых комплекс, образуемый генцианвиолетом (генциановый фиолетовый) и йодом, удерживается при обработке их спиртом. Такие микроорганизмы называются грамположительными. К другой группе относятся бактерии, не обладающие свойством удерживать комплекс и обесцвечивающиеся при обработке спиртом. Они приобретают цвет дополнительного красителя при докрашивании. Способность и неспособность клеток удерживать комплекс генцианвиолета с йодом связывают с различным химическим составом и структурой клеточной стенки бактерий.

Методика окраски: 1. На фиксированный мазок положить фильтровальную бумагу, пропитанную генцианвиолетом (бумажка Синева). На нее налить несколько капель воды. Выдержать 1-2 минуты.

2. Снять бумажку. Слить краситель. Не промывая водой налить раствор Люголя на 1 минуту.

3. Слить раствор Люголя. Не промывая водой, на мазок налить спирт на 30- секунд. При этом слегка покачивать стекло до отхождения фиолетовых струек красителя.

4. Слить спирт. Тщательно промыть препарат водой.

5. Докрасить мазок водным раствором фуксина (фуксин Пфейффера) в течение 1-2 минут.

6. Слить краситель. Тщательно промыть водой. Высушить (можно с помощью фильтровальной бумаги).

Вид: В препарате грамположительные бактерии окрашиваются основным красителем в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные воспринимают дополнительный краситель, приобретая розово-красный цвет.

ЗАДАНИЕ 5. Промикроскопировать мазок, окрашенный по методу ЦильНильсена. Зарисовать. Подписать.

Методические рекомендации к выполнению задания № 5.

Среди микроорганизмов есть такие, которые обладают выраженной устойчивостью к неорганическим кислотам, спиртам, щелочам. Их называют кислотоустойчивыми микроорганизмами. Эта особенность связана с наличием в клеточной стенке и цитоплазме сравнительно большого количества липидов, воска, миколовой кислоты. Из патогенных микроорганизмов кислотоустойчивостью обладают возбудители туберкулеза, лепры, некоторые виды актиномицет. Основным способом выявления кислотоустойчивых микроорганизмов является окраска по методу ЦИЛЬНИЛЬСЕНА. Именно этот способ применяют для обнаружения микобактерий туберкулеза в мокроте больных людей.

ОКРАСКА ПО ЦИЛЬ-НИЛЬСЕНУ.

Сущность: Для окрашивания кислотоустойчивых бактерий вместо обычных красителей применяют концентрированные растворы красителей с подогревом, например карболовый фуксин Циля, который окрашивает все микроорганизмы в рубиново-красный цвет. При последующей кратковременной обработке кислотой одни микробные клетки прочно удерживают краситель и не обесцвечиваются в растворе кислот, другие - теряют цвет. Это позволяет кислотоустойчивые микроорганизмы отличить от не обладающих этим свойством. Затем при дальнейшем докрашивании красителем другого цвета (например, метиленовой синью), некислотоустойчивые микроорганизмы приобретают цвет дополнительного красителя. А кислотоустойчивые микроорганизмы сохраняют цвет основного красителя (фуксина Циля).

кислотоустойчивые микроорганизмы имеют рубиново-красный цвет, некислотоустойчивые микроорганизмы, лейкоциты, элементы ткани – голубой цвет.

ЗАДАНИЕ 6. Промикроскопировать готовый мазок, окрашенный по методу Ожешко. Зарисовать. Подписать.

Методические рекомендации к выполнению задания № 6.

Наличие спор у микроорганизмов можно обнаружить с помощью окраски по методу ОЖЕШКО.

ОКРАСКА ПО ОЖЕШКО.

Сущность: Споры по сравнению с вегетативной клеткой обладают устойчивостью к факторам окружающей среды. Они являются кислотоустойчивыми и с трудом воспринимают красители. Объясняется это наличием плотной оболочки, небольшой концентрацией свободной воды, высоким содержанием липидов. В препаратах, окрашенных простым способом или по Граму, споры остаются бесцветными. Поэтому для окраски спор пользуются специальными методами с применением протрав (кислоты, щелочи). Протравы разрыхляют оболочку споры, облегчая проникновение в нее красителя. Далее действуют по такому же принципу, как для окраски кислотоустойчивых микроорганизмов: препарат окрашивают концентрированным красителем (например, карболовым фуксином Циля) с подогревом, а затем обесцвечивают кислотой и докрашивают в какой-нибудь контрастный цвет (например, метиленовым синим).

Вид: По методу ОЖЕШКО споры окрашиваются в красный цвет, вегетативные клетки - в голубой.

микроорганизмами, окрашенными по Бурри-Гинсу. Зарисовать. Подписать.

Методические рекомендации к выполнению задания № 7.

Наличие капсулы у микроорганизмов можно определить, окрасив препарат по методу БУРРИ-ГИНСА.

ОКРАСКА ПО БУРРИ-ГИНСУ.

Сущность: В силу своего химического строения капсулы при обычных методах окраски остаются бесцветными. Для их обнаружения применяют негативную окраску.

(Все представленные ранее методы относятся к позитивным, так как при их использовании окрашиваются микробные клетки). При негативных же способах краситель заполняет пространство вокруг бактерий (для этого можно использовать черную плакатную тушь, которая не проникает в микробную клетку, а, следовательно, не окрашивает ее). Далее докрашивается красителем (например, фуксином) микробное тело. В результате чего капсула будет контрастировать на темном фоне препарата и микробной клетки.


Вид: При окрашивании по методу БУРРИ-ГИНСА на темном фоне препарата контрастно выделяются неокрашенные капсулы, внутри которых находятся бактерии ярко-малинового цвета.

ЗАДАНИЕ 8. Разобрать сущность окрасок по методу Леффлера и Нейссера.

Промикроскопировать мазок с возбудителем дифтерии, окрашенный по Леффлеру.

Зарисовать. Подписать.

Методические рекомендации к выполнению задания № 8.

В цитоплазме некоторых бактерий могут образовываться отложения гранул (зерен) волютина, гликогена, гранулезы, капелек жира, кристаллов оксалатов, жидкой серы, скоплений пигмента. Зерна волютина содержат значительное количество метафосфатов и других соединений фосфора. Эти зерна хорошо обнаруживаются, например, у дифтерийной палочки, что является важным дифференциальнодиагностическим признаком возбудителя дифтерии. Для обнаружения зерен волютина чаще всего пользуются методами окраски по ЛЕФФЛЕРУ и НЕЙССЕРУ.

ОКРАСКА ПО ЛЕФФЛЕРУ

Сущность: Зерна волютина по своему составу отличаются от цитоплазмы. При простой окраске (например, щелочной метиленовой синью) зерна волютина выявляются в виде более темных участков цитоплазмы, т.е. гранулы окрашиваются более интенсивно, чем цитоплазма (явление метахромазии).

Вид: По методу ЛЕФФЛЕРА цитоплазма микробных клеток окрашивается в голубой цвет, гранулы волютина – в синий.

ОКРАСКА ПО НЕЙССЕРУ

Сущность: В силу того, что зерна волютина отличаются от цитоплазмы по химическому составу, при сложной окраске они адсорбируют иные красители, чем цитоплазма, и поэтому окрашиваются в другой цвет.

Вид: По методу НЕЙССЕРА тела бактерий окрашиваются в нежный светлокоричневый цвет, зерна волютина – в темно-синий, почти черный.

ЗАДАНИЕ 9. Ознакомиться с методами определения наличия жгутиков у микроорганизмов.

Методические рекомендации к выполнению задания № 9.

Все бактерии подразделяются на подвижные и неподвижные. Органами движения у бактерий являются жгутики, длина которых в несколько раз превышает длину тела микробной клетки. Для определения наличия жгутиков существуют прямой и непрямой методы.

Первый предусматривает непосредственное выявление жгутиков с помощью окрашивания. Следует отметить, что жгутики являются очень тонкими структурами и чтобы их обнаружить применяют специальную обработку. Обычно перед окрашиванием при помощи протравы достигается разбухание жгутиков и увеличение их размеров, благодаря чему они становятся видимыми при микроскопировании. При этом методе можно определить расположение и количество жгутиков. Строение их и другие детали изучают методом электронной микроскопии.

Косвенные методы позволяют выявить наличие жгутиков, определяя подвижность микроорганизмов. Подвижность микроорганизмов изучают в живом состоянии в препаратах «раздавленной» или «висячей капли».

1. На середину предметного стекла наносят каплю бульонной культуры микроорганизмов.

2. Каплю накрывают покровным стеклом так, чтобы избежать образования пузырьков воздуха. В правильно приготовленном препарате «раздавленной капли»

стёкла плотно склеиваются и жидкость тончайшим слоем заполняет пространство между ними, не выступая за края покровного стекла.

1. На середину покровного стекла, края которого смазаны вазелином, наносят каплю бульонной культуры.

2. Каплю материала покрывают специальным предметным стеклом с углублением (лункой).

3. Осторожно переворачивают предметное стекло с прилипшим к нему покровным стеклом. В правильно приготовленном препарате капля должна свисать в углубление, не соприкасаясь с его дном и краями.

Препараты, приготовленные по типу «раздавленная капля» или «висячая капля»

микроскопируют в темном поле зрения.



 


Похожие работы:

«СИМФЕРОПОЛЬСКИ Й УНИ ВЕРСИТЕТ ГЕОГ РАФИЧ ЕСК ИЙ ФАКУЛЬТЕТ КАФЕД РА ФИЗ ИЧЕСКОЙ ГЕО Г РАФИ И И ОКЕАН ОЛ ОГ И И Ю.Ф.БЕ З РУ КОВ РЕКРЕАЦИОННЫЕ РЕСУРСЫ И КУРОРТОЛОГИЯ УЧЕ БН ОЕ П О СО БИ Е СИМФЕРОПОЛЬ 1998 2 ОГЛАВЛЕНИЕ СИМФЕРОПОЛЬСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ГЕОГРАФИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ КАФЕДРА ФИЗИЧЕСКОЙ ГЕОГРАФИИ И ОКЕАНОЛОГИИ Ю.Ф.БЕЗРУКОВ РЕКРЕАЦИОННЫЕ РЕСУРСЫ И КУРОРТОЛОГИЯ УЧЕБНОЕ ПОСОБИЕ 1. ОБЩИЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О РЕКРЕАЦИОННОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ 1.1. РЕКРЕАЦИОННЫЕ ПОТРЕБНОСТИ 1.2. ФУНКЦИИ РЕКРЕАЦИОННОЙ...»

«ПРИОРИТЕТНЫЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ ПРОЕКТ ОБРАЗОВАНИЕ РОССИЙСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ДРУЖБЫ НАРОДОВ И.И.ВАСЕНЕВ Е.Н. ПАКИНА СОВРЕМЕННЫЕ ДОСТИЖЕНИЯ В ОПТИМИЗАЦИИ АГРОЛАНДШАФТОВ И ОРГАНИЗАЦИИ УСТОЙЧИВЫХ АГРОЭКОСИСТЕМ Учебное пособие Москва 2008 Рецензент: профессор, доктор биологических наук Макаров О.А. Инновационная образовательная программа Российского университета дружбы народов Создание комплекса инновационных образовательных программ и формирование инновационной образовательной среды, позволяющих эффективно...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ГОУВПО СИБИРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ГЕОДЕЗИЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ Л.А. Черновский УЧЕНИЕ О ГИДРОСФЕРЕ Утверждено редакционно-издательским советом академии в качестве учебно-методического пособия для студентов, обучающихся по специальности 020804 Геоэкология Новосибирск СГГА 2010 УДК 556 ББК 26.22 Ч493 Рецензенты: кандидат технических наук, профессор СГГА Б.В. Селезнв кандидат биологических наук, зав. лабораторией ИПА СО РАН Н.П. Миронычева-Токарева...»

«Английский язык в сфере промышленного рыболовства : учеб. пособие / сост. : Г.Р. АбдульА 13 манова, О.В. Федорова Астрахан. гос. техн. ун-т. Астрахань Изд-во ; – : АГТУ, 2010. – 152 с. ISBN 978-5-89154-363-8 Предназначено для аудиторной и самостоятельной работы студентов I–III курсов очной, заочной и дистанционной форм обучения, обучающихся по специальности 111001.65 Промышленное рыболовство. Основной целью сборника является овладение навыками чтения текстов профессиональной направленности. В...»

«Министерство сельского хозяйства РФ Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Мичуринский государственный аграрный университет Кафедра общей зоотехнии УТВЕРЖДЕНО протокол № 8 учебно-методической комиссии Технологического института от 20 февраля 2005г. Сельскохозяйственная радиобиология Методические указания по изучению дисциплины и задания для контрольной работы студентам - заочникам по специальности 110401 – Зоотехния; 110305 – Технология...»

«МИНИСТЕРСТВО ПРИРОДНЫХ РЕСУРСОВ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 9 марта 1999 г. N НМ-61/1119 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ПО ОХРАНЕ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ 5 марта 1999 г. N 02-19/24-64 ПИСЬМО О МЕТОДИЧЕСКИХ УКАЗАНИЯХ ПО РАЗРАБОТКЕ НОРМАТИВОВ ПРЕДЕЛЬНО ДОПУСТИМЫХ ВРЕДНЫХ ВОЗДЕЙСТВИЙ НА ПОВЕРХНОСТНЫЕ ВОДНЫЕ ОБЪЕКТЫ МПР России и Госкомэкология России направляют согласованные с Госкомрыболовством России, Минздравом России, Росгидрометом, Миннауки России и Российской академией наук Методические...»

«МИНЗДРАВСОЦРАЗВИТИЯ РОССИИ Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования ИРКУТСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ (ГБОУ ВПО ИГМУ Минздравсоцразвития России) Медико-профилактический факультет Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии Т.А. Платонова, О.Г. Карноухова МОРФОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ Методические рекомендации к практическим занятиям для студентов фармацевтического факультета ИГМУ Рекомендовано ЦКМС ГБОУ ВПО ИМГУ в качестве...»

«ПРИОРИТЕТНЫЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ ПРОЕКТ ОБРАЗОВАНИЕ РОССИЙСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ДРУЖБЫ НАРОДОВ Л.П. СОШЕНКО, А.Г. КУХАРСКАЯ СОВРЕМЕННАЯ ВЕТЕРИНАРНАЯ ГОМЕОПАТИЯ Учебное пособие Москва 2008 1 Инновационная образовательная программа Российского университета дружбы народов Создание комплекса инновационных образовательных программ и формирование инновационной образовательной среды, позволяющих эффективно реализовывать государственные интересы РФ через систему экспорта образовательных услуг Экспертное заключение...»

«Министерство образования и науки Российской Федерации Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Удмуртский государственный университет Кафедра природопользования и экологического картографирования О.В. Гагарина ОЦЕНКА И НОРМИРОВАНИЕ КАЧЕСТВА ПРИРОДНЫХ ВОД: критерии, методы, существующие проблемы Учебно-методическое пособие Издательство Удмуртский университет Ижевск 2012 УДК 556.5(07) ББК 26.222,8я7 Г 127 Рекомендовано к изданию...»

«ПРИОРИТЕТНЫЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ ПРОЕКТ ОБРАЗОВАНИЕ РОССИЙСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ДРУЖБЫ НАРОДОВ В.Н. ГРИШИН СОВРЕМЕННЫЕ ПРОБЛЕМЫ ПРЕСНОВОДНОЙ АКВАКУЛЬТУРЫ Учебное пособие Москва 2008 1 Инновационная образовательная программа Российского университета дружбы народов Создание комплекса инновационных образовательных программ и формирование инновационной образовательной среды, позволяющих эффективно реализовывать государственные интересы РФ через систему экспорта образовательных услуг Экспертное заключение –...»

«МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Федеральный научный клинико-экспериментальный центр традиционных методов диагностики и лечения ФИТОТЕРАПИЯ Методические рекомендации № 2000/63 Москва 2006 Фитотерапия: Методические рекомендации МЗ РФ 2000/63/ Карпеев А.А., Киселева Т.Л., Коршикова Ю.И., Лесиовская Е.Е., Саканян Е.И.// В кн.: Фитотерапия: нормативные документы/ Под общ. ред. А.А. Карпеева, Т.Л. Киселевой - М.: Изд-во ФНКЭЦ ТМДЛ Росздрава, 2006.- С. 9-42....»

«ПРИОРИТЕТНЫЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ ПРОЕКТ ОБРАЗОВАНИЕ РОССИЙСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ДРУЖБЫ НАРОДОВ Н.А. ЗИНОВЬЕВА, П.М. КЛЕНОВИЦКИЙ, Е.А. ГЛАДЫРЬ, А.А. НИКИШОВ СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ ГЕНЕТИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ СЕЛЕКЦИОННЫХ ПРОЦЕССОВ И СЕРТИФИКАЦИЯ ПЛЕМЕННОГО МАТЕРИАЛА В ЖИВОТНОВОДСТВЕ Учебное пособие Москва 2008 Инновационная образовательная программа Российского университета дружбы народов Создание комплекса инновационных образовательных программ и формирование инновационной образовательной среды, позволяющих...»

«Н.И.Хотько ОРГАНИЗАЦИОННЫЕ И МЕТОДИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКОГО ОБСЛУЖИВАНИЯ НАСЕЛЕНИЯ Москва 2005 1 УДК 615.37.03/371-372-084 ОРГАНИЗАЦИОННЫЕ И МЕТОДИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКОГО ОБСЛУЖИВАНИЯ НАСЕЛЕНИЯ РЕФЕРАТ Предлагаемая вниманию специалистов книга посвящена организационно-методическим проблемам противоэпидемического обеспечения населения. При изложении материала авторами использован опыт работы по постдипломному образованию врачей профилактической направленности. В I главе —...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Уральский государственный университет им. А.М. Горького ИОНЦ экология и природопользование биологический факультет экологии кафедра МОРФОЛОГИЯ И АНАТОМИЯ ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ Учебное пособие Подпись руководителя ИОНЦ Дата Екатеринбург 2007 2 От авторов Учебное пособие является практической частью общего теоретического курса Морфология и анатомия высших растений. Оно подготовлено...»

«ГОУ ВПО ТАТАРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ГУМАНИТАРНО-ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ КАФЕДРА БИОЭКОЛОГИИ А.М. Басыйров ВАЛЕОЛОГИЯ Учебное пособие Казань ЗАО Новое знание 2010 УДК 613 (075.8) ББК 51.204.0 я73 Б27 Печатается по решению редакционно-издательского совета Татарского государственного гуманитарно-педагогического университета Научный редактор: Доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой биоэкологии ТГГПУ И.И. Рахимов Рецензенты: Кандидат биологических наук, доцент кафедры ТИМЕГО ТГГПУ...»

«0 Новосибирский городской комитет охраны окружающей среды и природных ресурсов Новосибирский институт повышения квалификации и переподготовки работников образования Институт детства Новосибирского государственного педагогического университета Дворец творчества детей и учащейся молодежи Юниор Средняя общеобразовательная школа Перспектива О. А. Чернухин ЭКОЛОГИЧЕСКОЕ ВОСПИТАНИЕ ШКОЛЬНИКОВ В УСЛОВИЯХ РЕАЛИЗАЦИИ ОБРАЗОВАТЕЛЬНЫХ СТАНДАРТОВ ВТОРОГО ПОКОЛЕНИЯ Учебно - методическое пособие Новосибирск...»

«Министерство образования Республики Беларусь Учреждение образования Международный государственный экологический университет имени А. Д. Сахарова ЭНЕРГОСБЕРЕЖЕНИЕ И ВОЗОБНОВЛЯЕМЫЕ ИСТОЧНИКИ ЭНЕРГИИ Под общей редакцией профессора С. П. Кундаса Учебно-методическое пособие Минск 2011 1 УДК 620.91:621.311.2:620.97 ББК 31.15 Э65 Рекомендовано к изданию НМС МГЭУ им. А. Д. Сахарова (протокол № 9 от 17 мая 2011 г.) Авторы: Родькин О. И., проректор по учебной работе, доцент кафедры энергоэффективных...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Уральский государственный университет им. А.М. Горького РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК УРАЛЬСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ Институт экологии растений и животных А.Г. Васильев, И. А. Васильева, В.Н. Большаков Феногенетическая изменчивость и методы ее изучения Учебное пособие Утверждено постановлением совета ИОНЦ УрГУ Экология природопользования от.09.2007 для студентов и магистрантов биологического...»

«РЕКОМЕНДАЦИИ ЕВРОПЕЙСКОГО ОБЩЕСТВА КАРДИОЛОГОВ по профилактике, диагностике и лечению инфекционного эндокардита (новая версия 2009) Guidelines on the prevention, diagnosis, and treatment of infective endocarditis (new version 2009) The Task Force on the Prevention, Diagnosis, and Treatment of Infective Endocarditis of the European Society of Cardiology (ESC) Endorsed by the European Society of Clinical Microbyology and Infectious Diseases (ESCMID) and by the International Society of...»

«База нормативной документации: www.complexdoc.ru Научно-исследовательский институт охраны атмосферного воздуха (НИИ Атмосфера) Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору МЕТОДИЧЕСКОЕ ПОСОБИЕ ПО РАСЧЕТУ, НОРМИРОВАНИЮ И КОНТРОЛЮ ВЫБРОСОВ ЗАГРЯЗНЯЮЩИХ ВЕЩЕСТВ В АТМОСФЕРНЫЙ ВОЗДУХ (Дополненное и переработанное) Санкт-Петербург 2005 Настоящее пособие является переработкой изданного Методического пособия по расчету, нормированию и контролю выбросов загрязняющих веществ...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.