WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |

«С.Ю. Гармонов, Н.С. Шитова, Л.М. Юсупова КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА И БЕЗОПАСНОСТЬ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ Учебное пособие Казань КГТУ 2008 УДК 615:658.012.7(075) ББК 52.81:30.607(075) Г 20 ...»

-- [ Страница 4 ] --

Протолитические растворители – это химические соединения, молекулы которых способны отдавать или присоединять протоны, они участвуют в кислотно-основном процессе. К ним относятся все растворители, не входящие в первую группу. Протолитические растворители, в свою очередь, можно разделить на три группы.

Первая группа – амфипротные (амфотерные, амфолиты) растворители, которые могут как отдавать, так и присоединять протоны. К ним относятся вода, одно- и многоосновные спирты, другие соединения. Амфипротные растворители применяются для титрования веществ как кислотного, так и основного характера.

Вторую группу составляют протогенные (кислые) растворители, у которых способность к отдаче протона значительно превышает способность к его присоединению. К этой группе относятся муравьиная, уксусная, пропионовая и другие кислоты. Протогенные растворители усиливают основные свойства соединений.

Третья группа – протофильные (основные) растворители. К ним относятся химические соединения основного характера, которые отличаются ярко выраженным сродством к протону. У основных растворителей акцепторные свойства по отношению к протону преобладают над донорными. К основным растворителям относятся жидкий аммиак, пиридин, диметилформамид, этилендиамин, диоксан и др. Протофильные растворители усиливают кислотные свойства соединений.

В случае сильных или умеренно сильных кислот и оснований используют растворители кислотного или основного характера. При титровании слабых кислот или оснований кислые и основные растворители желательно разбавлять инертными. Приведём сведения, систематизирующие данные по «силе» кислот и оснований в неводных средах, основанных на измерении величин рКа в воде (табл. 6). Значение рКb для некоторых ЛВ – оснований приведены в табл. 7.

Таблица 6. Сравнительная сила кислот и оснований Таблица 7. Значения рК для некоторых оснований В качестве растворителя при количественном определении оснований и их солей обычно применяют ледяную уксусную и муравьиную кислоты, которые усиливают основные свойства слабых оснований. Условия титрования в уксусной кислоте значительно улучшаются при добавлении уксусного ангидрида, увеличивающего кислотность и диэлектрическую проницаемость среды, а также апротонных растворителей (бензола, дихлорэтана, хлороформа), снижающих ионное произведение среды. Титрантом при неводном титровании оснований и их солей является 0,1 н раствор хлорной кислоты в безводной уксусной кислоте.

В качестве индикатора чаще применяется 0,1% раствор кристаллического фиолетового в безводной кислоте уксусной, который имеет переход окраски при неводном титровании от фиолетовой (щелочная среда) через сине-зеленую (нейтральная среда) к желтовато-зеленой (кислая). Реже применяют насыщенный раствор метилового оранжевого в ацетоне (титруют до изменения окраски от фиолетовой до зелёной, 0,1% раствор тропеолина 00 в метиловом спирте (титруют до появления фиолетовой окраски).

При применении 0,1–0,01 н растворов хлорной кислоты для неводного титрования вероятные пределы ошибки составляют от ±0,2 до ±0,4% в случае оснований, константа диссоциации которых, измеренная в воде, не ниже 10–10. В соответствующих условиях опыта слабые основания (рК12) можно титровать с точностью ±1%.

При растворении слабых оснований в кислом растворителе – безводной уксусной кислоте, молекулы которой отличаются ярко выраженной склонностью отдавать свои протоны, основность указанных соединений увеличивается до основности сильного основания. Например, слабое основание амидопирин в среде безводной уксусной кислоты является значительно более сильным основанием:

В растворе титранта (0,1 н раствор хлорной кислоты в безводной уксусной кислоте) уксусная кислота проявляет свойства основания, т.е. принимает протон от более сильной кислоты – хлорной:

При титровании раствора амидопирина в безводной уксусной кислоте раствором хлорной кислоты ацетат-ионы, обусловливающие в безводной уксусной кислоте щелочность раствора, нейтрализуются ионами ацетония, обусловливающими в том же растворителе кислотность раствора:

Реакция кислотно-основного титрования сопровождается образованием молекул того растворителя, среди которого протекает данная реакция.

Кроме амидопирина, методом неводного титрования определяются как основания производные пиридина (никотинамид, изониазид, фтивазид), алкалоиды (резерпин, кофеин, теобромин, теофиллин).

Анализ очень слабых оснований с рК12, к которым относятся кофеин (рК=13,40), теобромин (рК=13,32), никотинамид (рК=13,60), не может быть проведён в безводной уксусной кислоте с достаточной точностью, так как усиление основных свойств в этом случае недостаточно. В уксусном ангидриде такие основания значительно увеличивают свою силу, что позволяет использовать уксусный ангидрид как растворитель для очень слабых оснований. Для получения более четкого изменения окраски индикатора титрование лучше проводить после высушивания препаратов до постоянной массы и, кроме того, в некоторых случаях добавлять апротонный растворитель – бензол.

Органические основания, содержащие азот, протонируются растворителем, в то время как уксусный ангидрид превращается в анион, который реагирует с ионом ацетония с образованием уксусного ангидрида и уксусной кислоты:

Изониазид является двукислотным основанием, в среде ледяной уксусной кислоты протонируются два атома азота (гидразиновый по N-2 и пиридиновый). Однако ледяная уксусная кислота содержит в качестве примеси уксусный ангидрид, который частично ацетилирует изониазид по гидразиновому азоту. Поэтому после растворения препарата в уксусной кислоте добавляют избыток уксусного ангидрида для ацетилирования всего количества ЛВ и затем титруют ацетилированный изониазид как однокислотное основание:

O C NH NH2 O O C NH NH C CH

Соли органических оснований (адреналина и норадреналина гидротартраты, кодеина фосфат, хинина гидрохлорид) можно титровать в безводной кислоте уксусной раствором кислоты хлорной в том случае, если их анионы ведут себя как основания по отношению к иону ацетония и могут принимать протоны. Анионы карбоновых кислот, нитрат-ион, дигидрофосфат-ион ведут себя как однокислотные основания. Сульфат-ион с ионом ацетония также ведёт себя как однокислотное основание, которое при титровании кислотой хлорной превращается в гидросульфат:

Хлорид-ион в безводной кислоте уксусной – очень слабое основание, и при комнатной температуре реакция не идёт количественно слева направо:

Так же ведут себя другие галогениды (бромиды, иодиды). Поэтому при титровании в безводной уксусной кислоте солей галогенидов раствором кислоты хлорной к реакционной смеси добавляют ртути ацетат; при этом образуется недиссоциирующий галогенид ртути (II) и ацетат азотистого основания:

Некоторые гидрохлориды органических оснований могут быть оттитрованы кислотой хлорной в среде уксусного ангидрида без добавления ацетата ртути (II). Уксусный ангидрид реагирует с гидрохлоридом основания с образованием протонированного основания, ацетилхлорида (хлорангидрида кислоты уксусной) и ацетат-иона.

Так, определение эфедрина гидрохлорида основано на следующей реакции:

Титрование ЛС в таблетках иногда проводится без отделения от наполнителей, иногда ЛВ извлекают из таблеток в органический растворитель (хлороформ) и после удаления растворителя проводят количественное определение.

При определении ЛВ в растворах для инъекций необходимо предварительно удалить воду. Это достигается либо упариванием на водяной бане, либо нагреванием с уксусным ангидридом, при этом вода превращается в кислоту уксусную.

При пересмотре НД на ЛФ часто методы неводного титрования заменяют на методы УФ-спектрофотометрии.

При титровании ЛВ кислого характера наиболее часто используют следующие протофильные растворители: диметилформамид (ДМФА), пиридин, бутиламин, этилендиамин. Титрантами для неводного определения кислот могут быть 0,1 н раствор гидроксида натрия в смеси метилового спирта и бензола, 0,1 н растворы метилатов щелочных металлов (натрия, калия, лития), 0,1 н раствор гидроксида тетрабутиламмония.

В качестве индикатора чаще всего применяют тимоловый синий (титруют до изменения окраски от жёлтой до синей). Кроме того, конец титрования можно определить потенциометрическим методом.

Неводные растворители основного характера усиливают кислотные свойства слабых кислот и амфотерных соединений. Лучшим растворителем для титрования слабых кислот, величина рКа которых не превышает 10,5–11,0, является диметилформамид, так как он имеет высокую диэлектрическую проницаемость, доступен, дёшев, малолетуч. Этот растворитель содержит кислые примеси, поэтому его нейтрализуют непосредственно перед титрованием.

Карбоновые кислоты, соединения, содержащие енольный и фенольный гидроксиды, сульфаниламидные препараты, кислотные аналоги с имидной группой можно титровать в ацетоне. В качестве титранта целесообразно применять тетрабутиламмония гидроксид.

В зависимости от относительной электрофильности используемых растворителей, имеющих основной характер, в этих растворителях изменяется также и относительная сила кислот (табл. 8).

Таблица 8. Относительная сила кислот Амфотерные соединения (амфолиты) в зависимости от растворителя могут проявлять как кислотный, так и основной характер (табл. 9). Как кислоты методом неводного титрования могут быть определены карбоновые кислоты, аминокислоты, барбитураты, пуриновые алкалоиды (теобромин и теофеллин), сульфаниламидные препараты, фенолы и другие соединения.

Фенолы могут титроваться в среде этилендиамина (обладающего более основными свойствами, чем диметилформамид) раствором метилата натрия.

Такая слабая кислота, как стрептоцид, не может быть отитрована в диметилформамиде, но титруется в среде н-бутиламина растворами метоксида натрия или тетрабутиламмония гидроксида (индикатор азофиолетовый). Другие сульфаниламидные препараты с более выраженными кислотными свойствами (с заместителями в сульфамидной группе) могут быть оттитрованы в среде диметилформамида растворами натрия гидроксида в смеси метилового спирта и бензола или метилатов щелочных металлов.

Таблица 9. Условия титрования амфолитов Соединение Как кислоты (растворитель, Как основания (растворититрант) тель, титрант) Изониазид Диэтиламин, СН3ОК СН3СООН–СНСl3, HClO ДМФА, C5H5N, C4H9NH2, Этиленгликоль – изопропиСульфаниламиды Титрование в основных растворителях необходимо проводить в тщательно закрытых сосудах для титрования или в атмосфере инертного газа для исключения влияния углекислого газа, содержащегося в воздухе.

При растворении кислот и кислотных аналогов (фенолов, енолов, имидов и т.д.) в протоноакцепторных основных растворителях, таких как этилендиамин, пиридин, нбутиламин и диметилформамид, образуются сопряжённое основание и сольватированный протон, например:

Следовательно, кислотность при этом возрастает и появляется «ониевый ион», который и титруют:

Определение барбитуратов проводится в среде диметилформамида путём титрования более сильных кислот – барбитала, фенобарбитала (рКа 7,3–7,8) – 0,1 н раствором натрия гидроксида в смеси метилового спирта и бензола, а очень слабых кислот – 0,1 н раствором натрия метилата.

На примере фенобарбитала рассмотрим реакции, которые протекают при его количественном определении. Под действием основного растворителя диметилформамида, который обладает способностью присоединять протон, происходит усиление кислотных свойств фенобарбитала:

фенобарбитал диметилформамид При титровании «ониевого» иона раствором натрия гидроксида образуется натриевая соль фенобарбитала и растворители (диметилформамид и вода):

Окислительно-восстановительные процессы лежат в основе многих химических реакций, используемых для количественного определения ЛВ. Если определяемое ЛВ способно отдавать электроны, т.е. действовать как восстановитель, то его можно определить титрованием стандартным раствором подходящего окислителя, и наоборот. Конечная точка титрования чаще всего определяется с помощью специальных обратимых окислительновосстановительных индикаторов (ферроин, дифениламин), специфических индикаторов (например, крахмал – индикатор на иод) или же безиндикаторным методом (в перманганатометрии индикатором служит избыток титранта). Кроме того, конечная точка титрования может быть определена потенциометрическим методом.

Величину молярной массы (М.м.) эквивалента окислителя (или восстановителя) находят путем деления его молекулярной массы на число принимаемых (или отдаваемых) им в данной химической реакции электронов:

Методами окисления-восстановления может быть определено количественное содержание многих ЛС, которые в достаточной степени проявляют окислительные или восстановительные свойства; применение косвенных методов позволяет проводить количественное определение ЛВ, не обладающих окислительно-восстановительными свойствами.

В фармацевтическом анализе применяется большое количество методов окислительновосстановительного титрования: иодометрия, броматометрия, перманганатометрия, цериметрия и др.

В основе иодометрического метода лежит полуреакция:

Видно, что каждый атом иода присоединяет один электрон и, следовательно, масса эквивалента иода равна его атомной массе.

Иод, будучи относительно слабым окислителем, применяяется для определения сильных восстановителей в средах, близких к нейтральной. Титрованный раствор иода представляет собой раствор иода в водном растворе иодида (иод очень мало растворим в воде и легко растворим в водном растворе калия иодида с образованием трииодидного комплекса КI3).

Конечная точка титрования может быть определена тремя способами:

– при титровании бесцветных растворов конечная точка титрования определяется по окраске трииодид-иона (желтый цвет);

– для более высокой чувствительности к раствору добавляют несколько миллилитров несмешивающегося с водой растворителя, например хлороформа. При встряхивании основная масса иода переходит в органический слой и придает ему интенсивную фиолетовую окраску;

– наиболее широко используемым индикатором в иодометрии служит водная суспензия крахмала. Крахмал является специфическим индикатором и в присутствии небольших количеств иода образует адсорбционный комплекс, окрашенный в синий цвет, в образовании которого участвует растворимая часть крахмала – -амилоза. Комплекс легко разрушается, а следовательно, раствор обеспечивается при восстановлении I2 до I –. При большой концентрации I2 крахмал разрушается с образованием продуктов, являющихся необратимыми индикаторами. Поэтому крахмал следует добавлять к растворам, содержащим незначительные количества иода, на что указывает светло-желтая окраска раствора.

При способе обратного титрования к испытуемому раствору добавляют избыток стандартного раствора иода и после окончания реакции окисления испытуемого вещества избыток иода титруют раствором натрия тиосульфата.

При определении окислителей в раствор, содержащий окислитель, вводят избыток иодида калия. В результате окисления иодид-ионов определяемым окислителем выделяется эквивалентное количество иода, который титруют раствором натрия тиосульфата:

При определении восстановителей применяется как прямое, так и обратное титрование. Иодометрическим методом определяются многие ЛС, являющиеся восстановителями, например тиосульфат натрия, аскорбиновая кислота, метионин, изониазид, фурацилин, Иодометрический метод применяется для количественного определения -лактамидов:

суммы пенициллинов в солях бензилпенициллина, полусинтетических цефалоспоринов, цефалексина и цефалотина. Метод основан на окислении иодом продуктов щелочного гидролиза пенициллинов или цефалоспоринов.

Для определения антипирина используется реакция электрофильного замещения; для определения кофеина – реакция образования периодида, в обоих случаях применяют способ обратного титрования.

Определение дихлорида ртути. Вначале ртути дихлорид переводят в калия тетраиодмеркуриат (при взаимодействии с калия иодидом).

Последний восстанавливают раствором формальдегида в щелочной среде до металлической ртути, которую окисляют избытком титрованного раствора иода в кислой среде в присутствии избытка калия иодида:

Избыток титранта (I2) оттитровывают раствором тиосульфата натрия.

Определение анальгина. В основе определения лежит реакция окисления серы сульфитной до сульфатной раствором иода.

Для предотвращения гидролиза анальгина навеску помещают в сухую колбу и растворяют в 90% спирте. Чтобы исключить окисление формальдегида, который может окисляться иодом только в щелочной среде, к раствору анальгина добавляют 0,01 н раствор хлороводородной кислоты. В результате реакции окисления анальгина иодом образуются бисульфат натрия и две молекулы иодоводородной кислоты, одна из которых образует соль (гидроиодид) с 4-метиламиноантипирином-продуктом гидролиза анальгина:

Определение аскорбиновой кислоты основано на восстановительных свойствах и проводится иодатометрическим или иодометрическим методами.

Определение кофеина в кофеин-бензоате натрия основано на образовании осадка кофеина периодида при взаимодействии препарата с избытком титрованного раствора иода в кислой среде. После отфильтровывания осадка в части фильтрата определяют избыток иода путем титрования раствором тиосульфата натрия:

Определение сульфата меди основано на реакции:

Нормальный потенциал системы Cu2+ / Cu+, равный 0,15 В, ниже потенциала системы I2 / 2I –, равного 0,54 В, однако равновесие может быть смещено вправо вследствие малой растворимости меди (I) иодида в присутствии достаточного избытка иодида. В реально протекающей полуреакции нормальный потенциал системы Cu2+/Cu+ равен 0,86 В:

поэтому равновесие реакции:

смещено вправо. В этой реакции иодид служит не только восстановителем меди (II), но и осадителем меди (I). Выделившийся иод титруют раствором тиосульфата натрия.

Определение формальдегида и глюкозы основано на окислении альдегидной группы этих соединений раствором иода в щелочной среде, где образуется гипоиодид:

Образовавшийся гипоиодид окисляет альдегиды до карбоновых кислот:

Затем в раствор прибавляют серную кислоту, чтобы выделить иод из гипоиодита, не вступившего в реакцию взаимодействия с альдегидом, и оттитровывают иод раствором тиосульфата натрия. В этих определениях необходимо строго соблюдать условия методик – количество реактивов и порядок их прибавления.

При определении суммы пенициллинов в солях бензилпенициллина и феноксиметилпенициллине препарат пенициллина подвергают щелочному гидролизу, при этом происходит раскрытие бета-лактамного кольца с образованием соответствующей пенициллиновой кислоты в открытой тиольной форме. Эта тиольная форма окисляется шестью эквивалентами иода до SO3H-группы. Еще два эквивалента иода расходуются на окисление промежуточного продукта кислоты пенальдиновой до кислоты дегидропенальдиновой:

N C COOH

COOH N C COOH COOH

Аналогичным образом проводят количественное определение полусинтетических цефалоспоринов цефалексина и цефалотина.

При иодометрическом определении -лактамидов (пенициллинов и цефалоспоринов) используют стандартные образцы, так как реакция взаимодействия иода с продуктами щелочного разрушения пенициллинов не протекает строго стехиометрически. Этим же целям стандартизации служит поддержание определенного значения рН среды, температурных условий и времени анализа.

Метод броматометрии основан на применении в качестве титранта бромата калия, который в кислой среде является сильным окислителем:

Обычно в анализируемый раствор перед титрованием добавляют бромид калия, который при взаимодействии с броматом в кислой среде выделяет бром. Образующийся бром используется как окислитель:

В качестве индикаторов при прямом броматометрическом определении чаще применяют кислотно-основные индикаторы (метиловый оранжевый, метиловый красный, конго красный), которые в конечной точке титрования необратимо окисляются избытком окислителя (обесцвечиваются). При обратном титровании избыток брома определяют иодометрически:

Броматометрический метод применяется для количественного определения ЛС, которые являются восстановителями, например изониазида, а также фенолов (фенола, тимола, резорцина, кислоты салициловой, синэстрола и др.) и первичных ароматических аминов (например, стрептоцида). Определение фенолов и ароматических аминов основано на реакции электрофильного замещения – бромирования.

В случае изониазида при титровании протекает следующая реакция:

Метод основан на реакциях окисления определяемого вещества перманганат-ионами.

Титрование проводят в сильнокислых, чаще всего сернокислых растворах. Хлороводородную и азотную кислоты применять не следует, так как в присутствии этих кислот могут протекать конкурирующие окислительно-восстановительные реакции. Основное уравнение перманганатометрии имеет следующий вид:

Индикатором конца титрования служит слабо-розовая окраска титранта – перманганата калия.

Достоинства перманганатометрического метода следующие:

– в связи с высоким окислительным потенциалом системы растворы калия перманганата в кислой среде можно применять для определения многих веществ, которые не взаимодействуют с более слабыми окислителями;

– большинство окислительно-восстановительных реакций с участием MnO4–-ионов протекает стехиометрически и при оптимально выбранных условиях с достаточной скоростью;

– возможно титрование без индикатора;

– перманганат калия является легкодоступным реагентом.

Недостатки метода:

– перманганат калия трудно получить в химически чистом состоянии. Поэтому титр 0,1 н раствора KMnO4 следует часто проверять, а 0,02 н и 0,01 н растворы для хранения не готовят;

MnO4 -иона требуют строгого соблюдения условий, рекомендуемых методикой анализа (рН, температуры и т.д.).

Перманганатометрически легко определять содержание пероксида водорода в растворе:

или Нитритометрия – титриметрический метод, применяемый для количественного определения первичных ароматических аминов (сульфаниламиды, производные nаминобензойной и n-аминосалициловой кислот, дифенилсульфона, аминоакридина), их ацилированных производных (после предварительного гидролиза) или ароматических нитропроизводных, которые легко могут быть восстановлены до ароматических аминов (левомицетин). Этот метод может быть также использован для определения вторичных ароматических аминов (фелиевая кислота, дикаин, хиноцид), гидразидов (изониазид) и других соединений. В нитритометрии титрантом является нитрит натрия, в неводной среде – эфиры азотистой кислоты алкилнитриты.

Первичные ароматические амины при действии нитрита натрия в кислой среде образуют соли диазония, а вторичные ароматические амины – нитрозопроизводные:

где R = Ag; X = Cl –, Br –, HSO4–, OAs –.

Титрование проводят при температуре не выше 15–20°С, а в некоторых случаях – при охлаждении до 0–5°С, так как соли диазония непрочные соединения и легко разлагаются.

Конечную точку титрования определяют двумя способами:

– электрохимическим (потенциометрическое титрование);

каторов).

При потенциометрическом титровании в качестве индикаторного электрода применяют платиновый электрод; электродом сравнения служит насыщенный каломельный электрод.

Внутренние индикаторы указываются конкретно в частных статьях ГФ. В качестве внутренних индикаторов используют тропеолин 00 (4 капли раствора), тропеолин 00 и капли раствора метиленового синего, нейтральный красный (2 капли 0,5% раствора в начале и 2 капли в конце титрования) и др. Индикатор тропеолин 00, который в кислой среде окрашен в красно-фиолетовый цвет, от избытка HNO2 становится бесцветным или слабожелтым. Титрование со смесью индикаторов (тропеолин 00 + метиленовый синий) ведут до перехода окраски от красно-фиолетовой до голубой, с нейтральным красным – от малиновой до синей. Выдержку в конце титрования с нейтральным красным увеличивают до двух минут.

Иодкрахмальная бумага как внешний индикатор может быть применена во всех случаях нитритометрического определения фармакопейных препаратов. Индикатор – иодкрахмальная бумага – это пропитанная водными растворами крахмала и иодида калия фильтровальная бумага. Титруемую жидкость стеклянной палочкой наносят на полоску иодкрахмальной бумаги.

Титрование с иодкрахмальной бумагой ведут до тех пор, пока капля титруемого раствора, взятая через одну минуту после прибавления раствора нитрита натрия, не будет немедленно вызывать синее окрашивание бумаги:

6.4. Осадительное титрование лекарственных веществ В методе осадительного титрования применяются реакции образования малорастворимых продуктов при взаимодействии с ЛВ. Наиболее часто для качественного анализа применяется реакция осаждения раствором серебра нитрата и раствором аммония тиоцианата. Многие ЛС – соединения галогенов – количественно характеризуются по реакции осаждения серебра нитратом (аргентометрия). Для анализа ЛВ применяется и меркурометрический способ, но более ограниченно вследствие ядовитости соединений ртути.

Определение момента эквивалентности проводится визуально по изменению цвета раствора или осадка в присутствии индикаторов или физико-химическими методами (чаще потенциометрическим). Индикаторы, используемые для установления момента эквивалентности в аргентометрическом титровании, можно разделить на три группы:

– образующие окрашенные осадки;

– образующие окрашенные комплексы;

– адсорбционные.

Метод Мора используется для титрования хлоридов и бромидов, имеющих в титруемых растворах нейтральную реакцию, раствором нитрата серебра (прямое титрование). В качестве индикатора применяют хромат-ионы (хромат калия), образующие в момент полного осаждения хлорид (бромид)-ионов оранжево-желтый осадок хромата серебра:

Реакция титрования:

Реакция в конечной точке титрования:

Растворимость хромата серебра значительно выше растворимости хлорида (бромида) серебра. Поэтому при малой концентрации хромат-ионов в присутствии избытка хлоридионов при добавлении стандартного раствора нитрата серебра в первую очередь происходит осаждение хлорида серебра, и только после полного осаждения серебра хлорида (момент эквивалентности) образуется серебра хромат. Титрование этим методом проводят при pH 7,0–10,0. В кислой среде равновесие смещено вправо и чувствительность индикатора резко понижается. Титрование иодидионов не дает удовлетворительных результатов, так как осадок иодида серебра адсорбирует хромат-ионы и момент эквивалентности фиксируется неточно.

Метод Фольгарда основан на осаждении галогенидов избытком стандартного раствора нитрата серебра и титрования избытка нитрата серебра стандартным раствором тиоцианата аммония в кислой среде (обратное титрование). В качестве индикатора используют раствор солей железа (III), например двойного сульфата железа (III) и аммония (квасцы железоаммониевые). После осаждения избытка ионов серебра в виде белого осадка тиоцианата серебра избыток титранта (тиоцианата аммония) образует с Fe3+ в растворе красного цвета комплексы:

Осадки иодида серебра и бромида серебра менее растворимы, чем роданид серебра, и поэтому избыток нитрата серебра титруют непосредственно раствором тиоцианата аммония. Хлорид серебра, напротив, более растворим, чем роданид, и его следует отделять фильтрованием, чтобы в процессе титрования он не перешел в роданид:

Метод Фаянса предполагает применение адсорбционных индикаторов – соединений, которые являются кислотами или их солями и в момент эквивалентности адсорбируются на осадке галогенида серебра и изменяют цвет осадка. В первую очередь, на осадке адсорбируются ионы, одноименные с осадком. Например, при титровании раствора иодида калия раствором нитрата серебра на осадке хлорида серебра до точки эквивалентности будут адсорбироваться преимущественно иодид-ионы, и для нейтрализации отрицательного заряда к частицам осадка будут притягиваться положительно заряженные ионы К+ из раствора. После достижения точки эквивалентности адсорбироваться на осадке будут избыточные ионы Ag+, и для нейтрализации уже положительного заряда осадка из раствора будут притягиваться отрицательно заряженные ионы, в том числе анионы индикатора, которые изменяют желтый цвет осадка AgI на розовый (индикатор натрия эозиат):

Титрование с адсорбционными индикаторами проводится при определенном рН среды, при котором преобладает ионная форма индикатора.

Комплексонометрия – титриметрический метод, основанный на реакциях комплексонообразования ионов металлов с комплексонами. Комплексонами называют полидентантные хелатообразующие органические соединения, отличающиеся наличием в их молекулах основных и кислотных групп, обеспечивающих образование прочных растворимых в воде комплексов (хелатов) с ионами различных металлов. Основной группой обычно является третичная аминогруппа, в которой атом азота имеет неподеленную пару рэлектронов; кислотной группой может быть ацетатная – СН2СООН, карбоксильная – СООН и др. В качестве титранта наиболее часто применяется комлексон III (трилон Б, динатриевая соль кислоты этилендиаминотетрауксусной, ЭДТА). Для написания формулы ЭДТА и ее ионов часто используют сокращения Н4Y, H3Y–, H2Y2–, HY3–, Y4– (условное обозначение Na2H2Y):

ЭДТА является шестидентантным лигандом, так как содержит четыре карбоксильные группы и два атома азота, имеющие каждый по неподелённой паре электронов. С большинством металлов, имеющих более одного положительного заряда, ЭДТА образует бесцветные хорошо растворимые в воде устойчивые хелатные комлексы октаэдрической структуры, которые состоят не менее чем из трех пятичленных хелатных колец (рис. 8, 9).

Хелаты ЭДТА с ионами металлов называют комлексонатами. Комплексонаты ионов металлов с координационным числом 6, например Са2+, содержат пять хелатных циклов, а с координационным числом 4, например Zn2+, – три хелатных цикла.

1:1 независимо от зарядов катиона, при этом происходит выделение двух ионов водорода, например:

Для связывания ионов водорода в анализируемый раствор добавляют аммиачный буфер или щёлочь. Если определение проводят в кислой среде, то ионы водорода не связывают.

Точку эквивалентности в комплексонометрии устанавливают с помощью металлоиндикаторов. Металлоиндикаторы – это органические красители, образующие с ионами титруемого металла интенсивно окрашенные комплексы, цвет которых отличается от окраски свободного индикатора, свойственного ему при данном значении рН.

Комплекс индикатора с ионом металла должен быть достаточно устойчивым, но в раз менее устойчивым, чем комплекс металла с ЭДТА. Концентрация индикатора в растворе должна быть максимально малой (индикатор должен связывать менее 0,01 ионов металла), изменение окраски индикатора должно быть чётким, контрастным и быстрым.

Одним из широко применяемых индикаторов является эриохром чёрный Т (кислотный хром чёрный специальный, хромоген чёрный специальный ЕТ-00), который представляет собой натриевую соль слабой трёхосновной кислоты:

или сокращённо NaH2Ind, где Н – протоны индикатора: натриевой соли 1-[(1-гидрокси-2нафтил)азо]-6-нитро-2-нафтол-4-сульфо-кислоты.

Эриохром чёрный Т за счёт о,о-диоксиазогруппы способен образовывать хелаты с ионами металлов. При рН6,0 протон сульфогруппы диссоциирован и индикатор присутствует в виде иона красного цвета; при рН 7,0 преобладает форма Hind2– синего цвета; а при рН 12,0 – полностью депротонированный ион Ind3– жёлто-оранжевого цвета:

Комплексы металлов с эриохромом чёрным Т имеют красный цвет, поэтому для получения чёткого перехода цвета (красный – синий) необходимо проводить титрование с эриохромом чёрным Т в щелочной среде при рН 7,0–11,0. При образовании комплексов металлов в этом интервале второй протон фенольного гидроксила замещается ионом металла, а полученный комплекс становится полностью депротонированным и для двухвалентных металлов имеет состав MеInd–.

Эриохром чёрный Т применяется для титрования солей магния, цинка при рН 9,5– 10,0. Недостатком индикатора является малая устойчивость его растворов во времени. Поэтому чаще его применяют в смеси с натрия хлоридом (1:100) (индикаторная смесь).

Прямое титрование применяют для определения ионов металлов, быстро реагирующих с ЭДТА, при условии существования подходящего индикатора для детектирования конечной точки титрования. В способе прямого титрования к аликвотной части анализируемого раствора прибавляют буферный раствор для создания необходимого значения рН, вводят и титруют стандартным раствором ЭДТА до изменения окраски раствора. Способ прямого титрования применяют для определения ионов Ca2+, Mg2+, Zn2+, Bi3+, Co2+, Mn2+ и других.

Процесс прямого комплексонометрического титрования состоит из трёх стадий:

1. Образование окрашенного комплекса индикатора с металлом. При добавлении индикатора к раствору, содержащему определяемый катион, образуется окрашенный комплекс металла с индикатором. Например, при определении магния образуется красно-фиолетового цвета комплекс с эриохромом чёрным Т:

Далее титруют раствором трилона Б до появления синего окрашивания.

2. Титрование раствором трилона Б свободных ионов магния. Индикатор добавляют в таком количестве, чтобы связать менее 0,01 (т.е. менее 1%) ионов металла. Следовательно, более 99,0% ионов металла находятся в свободном виде и в ходе титрования связываются комплексоном в бесцветный растворимый комплекс ЭДТА с магнием.

3. Разрушение комплекса металл-индикатор и образование более устойчивого комплекса металл-ЭДТА и свободного индикатора (конечная точка титрования). Конечная точка титрования достигается после того, как все ионы магния будут оттитрованы и добавлен избыток раствора трилона Б (1–2 капли) При этом красно-фиолетовая окраска раствора переходит в синюю:

Изменение окраски от красно-фиолетовой до синей свидетельствует о достижении момента эквивалентности.

Обратное титрование применяют в следующих случаях:

– при отсутствии подходящего индикатора для прямого титрования определяемого иона;

– при медленном протекании реакции иона определяемого металла с ЭДТА;

– в случае гидролиза ионов определяемого металла при оптимальной величине рН образования комплексоната. Обратное титрование применяют для определения катионов, образующих с ЭДТА очень устойчивые комплексы (например, Hg2+ – условная константа устойчивости ~ 20, Pb2+ – условная константа устойчивости ~18).

К анализируемому раствору, содержащему определяемый катион, добавляют избыток стандартного раствора ЭДТА (при оптимальном значении рH и в присутствии индикатора). Образуется комплекс определяемого катиона с ЭДТА, а избыток ЭДТА находят обратным титрованием стандартным раствором магния сульфата (или цинка сульфата) в присутствии индикатора (чаще всего кислотного хром чёрного специального).

Методом обратного титрования определяют Hg2+ и др.

Титрование по заместителю (вытеснительное титрование) используют наряду с методом обратного титрования, когда невозможно провести прямое титрование. При титровании по заместителю в анализируемый раствор вводят избыток ЭДТА в виде комплекса с магнием или цинком. Если катион определяемого металла образует с ЭДТА более устойчивый комплекс, чем магний или цинк, то протекает реакция замещения:

Выделившиеся ионы магния в количестве, эквивалентном содержанию определяемых ионов, находят прямым титрованием раствором ЭДТА:

ГФ XI принята общая фармакопейная статья «Комлексонометрическое титрование», в которой приведены методики определения катионов алюминия, висмута, кальция, свинца, магния и цинка, которые присутствуют в различных ЛС.

7. ОСНОВНЫЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

В АНАЛИЗЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ

Хроматографией называется процесс разделения, в котором определяемое соединение распределяется между подвижной (жидкой или газовой) и неподвижной (твердой или жидкой) фазами. При этом происходит концентрирование разделяемых веществ. Хроматографические методы широко используются в анализе ЛВ благодаря своей универсальности, высокой избирательности и чувствительности аналитических определений. Среди различных вариантов хроматографии в фармацевтическом анализе широко применяются высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), газожидкостная (ГЖХ) и планарная хроматография.

7.1.1. Высокоэффективная жидкостная хроматография В жидкостной хроматографии подвижной фазой является жидкость. Метод ВЭЖХ характеризуется более широким кругом анализируемых объектов, по сравнению с газовой хроматографией, поскольку большинство веществ не обладает достаточной летучестью, многие из них неустойчивы при высоких температурах и при переведении в газообразное состояние разлагаются.

Особенности различных вариантов жидкостной хроматографии обусловлены физикохимическими свойствами жидкой подвижной фазы. При этом селективность определяется природой подвижной (элюент) и неподвижной (адсорбент или жидкость) фаз. Большой выбор элюентов позволяет в широком диапазоне варьировать параметры удерживания и селективность хроматографической системы. Некоторые жидкостные хроматографы предусматривают применение градиентного элюирования.

В настоящее время применение сорбентов с размерами зерен 10–30 мкм, поверхностнои объемно-пористых сорбентов с размерами частиц 5–10 мкм, нагнетательных насосов и высокочувствительных детекторов обусловило переход к ВЭЖХ.

Широкое применение ВЭЖХ в аналитической практике привело к дальнейшему развитию хроматографических методов анализа. Быстрый массоперенос при высокой эффективности разделения позволяет использовать ВЭЖХ для разделения и определения веществ, содержащих нейтральные молекулы (адсорбционная и распределительная хроматография), ионов (ион-парная хроматография), а также высокомолекулярных соединений по фракциям (эксклюзионная хроматография). Методами аффинной и лигандообменной хроматографии разделяют биологически активные вещества и оптические изомеры.

В адсорбционном варианте ВЭЖХ в зависимости от полярности неподвижной и подвижной фаз различают нормально-фазовую (НФ) и обращенно-фазовую (ОФ) хроматографию. В НФ ВЭЖХ применяют полярный адсорбент и неполярные подвижные фазы, в ОФ ВЭЖХ – неполярный адсорбент и полярные подвижные фазы. В обоих вариантах принципиальное значение имеет выбор подвижной фазы. Неподвижная фаза удерживает разделяемые вещества, подвижная фаза (растворитель или смесь растворителей) обеспечивает различную емкость колонки и эффективное разделение компонентов смеси.

Адсорбенты различных типов (полярные и неполярные) характеризуются неодинаковой селективностью по отношению к разделяемым соединениям. В качестве адсорбентов применяются тонкодисперсные пористые материалы с удельной поверхностью более м2/г.

Полярные адсорбенты (оксиды кремния и алюминия, флорисил и др.) содержат на поверхности слабокислотные ОН-группы, способные удерживать вещества с основными свойствами. Эти адсорбенты применяются в методе НФ ВЭЖХ для разделения соединений со средней полярностью.

Основной недостаток полярных адсорбентов – высокая чувствительность к содержанию воды в растворителе. Например, силоксановые группы Si–О–Si на поверхности оксида кремния в присутствии воды переходят в силанольные группы Si–ОН, при этом изменяются свойства поверхности и результаты становятся невоспроизводимыми (рис. 10).

1 – связанные водородной связью силанольные группы, 2 –свободные силанольные Si–OH, 3 – силоксановые Si–O–Si В методе ВЭЖХ применяют полярные сорбенты с привитыми полярными группами (амины, диолы), что позволяет изменять селективность определения подбором соответствующего элюента (рис. 11). Неполярные адсорбенты проявляют селективность к полярным соединениям. Применимы также сорбенты с привитыми неполярными фазами, например силикагель с алкилсилильными группами. Экранирование силанольных ОН-групп силикагеля проводится с помощью алифатических углеводородов С3 и С4, однако получить относительно большие емкости колонки и объемы удерживания удается только при введении более длинных алкильных цепочек, например С18. Кроме перечисленных неподвижных фаз, применение находят поверхностно-пористые носители. Это жесткие непористые носители (например, стеклянные шарики), покрытые тонким пористым слоем активного полярного или неполярного сорбента. Поверхностно-пористые носители оказывают малое сопротивление потоку, вследствие чего возрастает скорость анализа.

Эффективность колонки тем выше, чем у е получается пик при том же времени удерживания. Эффективность колонки измеряется числом теоретических тарелок (ЧТТ) N: чем выше эффективность, тем больше ЧТТ, тем меньше расширение пика по мере его прохождения через колонку, тем уже пик на выходе из колонки. ЧТТ легко определить их хроматограммы по следующей формуле:

Селективность колонки определяется отношением приведенных времен удерживания двух пиков. Временем удерживания пика называют время между нанесением пробы на колонку и выходом из нее пика, соответствующего компонента разделяемой смеси где t0 – время удерживания несорбируемого компонента; tR1 и tR2 – времена удерживания компонентов 1 и 2 соответственно.

Селективность колонки зависит от многих факторов. Искусство экспериментатора в большей мере определяется умением воздействовать на селективность разделения правильным выбором химической природы сорбента, состава растворителя и учета химической структуры разделяемых компонентов. Иногда заметное влияние на селективность оказывает изменение температуры колонки, в результате чего меняются коэффициенты распределения веществ между подвижной и неподвижной фазами.

При оценке разделения двух компонентов на хроматограмме важным параметром является разрешение RS, которое связывает время выхода и ширину пиков обоих разделяемых компонентов:

Разрешение увеличивается по мере возрастания селективности, ключевую роль в этом играет коэффициент разделения, который необходимо предельно повысить при помощи соответствующего выбора подвижной и неподвижной фаз и условий разделения.

Важным параметром удерживания в жидкостной хроматографии является коэффициент емкости k, определяемый как частное от деления массы вещества в неподвижной фазе на массу вещества в подвижной фазе:

Для того чтобы анализируемые вещества разделялись на колонке, коэффициент емкости должен быть больше нуля, т.е. вещества должны удерживаться неподвижной фазой, сорбентом. Однако коэффициент емкости не должен быть слишком большим, чтобы получить приемлемое время элюирования. Если для данной смеси веществ выбрана неподвижная фаза, которая их удерживает, то дальнейшая работа по разработке методики анализа заключается в выборе такого растворителя, который обеспечил бы в идеальном случае различные для всех компонентов, но не очень большие по значению коэффициенты k.

Этого добиваются, изменяя элюирующую силу растворителя (полярность). Полярность растворителя определяется суммарным эффектом всех типов межмолекулярного взаимодействия (дисперсионного, индукционного, донорно-акцепторного и диэлектрического) между растворителем и растворенным веществом.

Большое внимание уделяется выбору подвижной фазы (элюента), поскольку она оказывает решающее влияние на селективность разделения компонентов, эффективность колонки и продолжительность анализа. Подвижная фаза должна растворять анализируемую пробу, характеризоваться малой вязкостью (коэффициенты диффузии компонентов анализируемой пробы должны быть достаточно большими), компоненты пробы не должны разрушаться в ходе анализа. Растворители, входящие в состав подвижной фазы, должны быть инертными к материалам всех узлов хроматографа, безопасными для человека, адаптированными к данному детектору и доступными.

Элюирующая эффективность подвижной фазы определяется полярностью растворителя. В НФ хроматографии с увеличением полярности растворителя его элюирующая эффективность возрастает, в ОФ варианте – снижается. Растворители, расположенные в порядке возрастания их элюирующей эффективности, составляют элюотропный ряд. В жидкостной адсорбционной хроматографии предложен элюотропный ряд Снайдера (в скобках тан (0) н-гексан и н-гептан (0,01) циклогексан (0,04) тетрахлорметан (0,18) бензол (0,32) хлороформ (0,38) ацетон (0,51) этанол (0,88) вода (1).

Для решения практических задач применяют не индивидуальные растворители, а их смеси. Незначительные добавки второго растворителя, особенно воды, существенно увеличивают элюирующую эффективность подвижной фазы; это характерно, например, для смесей воды с ацетонитрилом.

В случае адсорбционной хроматографии на силикагеле или оксиде алюминия, как правило, силу двухкомпонентного растворителя (например, гексана с добавкой изопропанола) увеличивают, повышая содержание в нем полярного компонента (изопропанола), или же уменьшают, снижая содержание изопропанола. Если содержание полярного компонента становится слишком малым (0,1%), следует заменить его более слабым по элюирующей силе. Так же подбирают растворитель в случае использования привитых полярных фаз (нитрильной, амино-, диол-, нитро- и др.), учитывая возможные химические реакции и исключая опасные для фазы растворители (альдегиды и кетоны для аминофазы).

В случае обращенно-фазной хроматографии силу растворителя увеличивают, повышая содержание в элюенте органической составляющей (метанола, ацетонитрила), и уменьшают, добавляя больше воды. Если не удается добиться желаемой селективности, используют другую органическую составляющую или пытаются изменить ее с помощью разных добавок (кислот, ион-парных реагентов и др.).

При разделении сложных биологических смесей часто не удается подобрать силу растворителя таким образом, чтобы все компоненты разделялись и элюировались за короткий срок. Тогда приходится прибегать к градиентному элюированию, т.е. использовать растворитель, элюирующая сила которого в процессе анализа изменяется – постоянно увеличивается по заранее заданной программе.

Для идентификации компонентов анализируемой смеси необходимо точное фиксирование параметров удерживания веществ, выходящих из колонки; как правило, для этого измеряют объем или время удерживания.

Количественная жидкостная хроматография является хорошо разработанным аналитическим методом, не уступающим по точности количественной газовой хроматографии, значительно превышающим точность тонкослойной хроматографии и электрофореза.

Количественный анализ состоит из следующих стадий:

– хроматографическое разделение;

– измерение площадей или высот пиков;

– расчет количественного состава смеси на основании хроматографических данных;

– интерпретация полученных результатов (статистическая обработка).

При проведении анализа (особенно неустойчивых веществ) необходимо свести к минимуму ошибки, которые могут быть допущены при отборе проб, экстракции, выделении, очистке и др.

Образцы должны быть полностью растворены, а их растворы приготовлены с точностью ±0,1%. Растворять образец желательно в подвижной фазе, что исключит возможность осаждения его в колонке. Если растворение в подвижной фазе невозможно, следует применять растворитель, смешивающийся с ней.

В хроматографическом разделении веществ также могут возникнуть осложнения (при неправильном выборе условий хроматографии), что приведет к разложению или превращению веществ во время анализа, или необратимой адсорбции вещества на данной колонке. Важно убедиться в отсутствие этих нежелательных явлений и при необходимости провести регенерацию колонки или заменять ее.

В настоящее время для обработки хроматограмм используются методы с различными интeграторами и ЭВМ. Подобные системы точны, экономят время, позволяют корректировать смещение базовой линии, учитывают время удерживания. Они выводят на печать полное сообщение, включая содержание, и находят широкое применение особенно при серийном анализе.

Для количественного хроматографического анализа используют различные методы калибровки.

Метод внешнего стандарта или абсолютной калибровки. В хроматограф вводят определенный объем каждого стандартного раствора и измеряют площадь или высоту пика.

Для каждого вещества строят график зависимости высоты или площади пика от концентрации или массы вещества. Если калибровочный график линеен и проходит через начало координат, то калибровочный коэффициент S (отношение высоты при площади пика к концентрации или массе компонента) является тангенсом угла наклона калибровочного x (мкг) в пробе определяют из соотношения где hx – высота пика интересующего компонента, мм.

Метод нормировки – это метод калибровки по размерам пиков, широко применяемый в ГЖХ, в ВЭЖХ используют реже. Метод основан на измерении площади или высоты каждого пика в хроматограмме и вычислении содержания каждого компонента, которое пропорционально площади или высоте. Содержание всех компонентов принимают равным 100%. Метод нормировки применим в том случае, когда нужно определить процентное содержание всех компонентов смеси, что затруднительно при использовании метода абсолютной калибровки.

Метод внутреннего стандарта называют методом относительной или косвенной калибровки. Метод основан на добавлении внутреннего стандарта – вещества с известной концентрацией, не присутствующего в первоначальной смеси, в неизвестный образец для получения отдельного пика на хроматограмме и компенсации различных аналитических ошибок. Внутренний стандарт должен быть химически инертным, полностью отделяться от других компонентов смеси, концентрация его должна быть близка к концентрации определяемых веществ.

Калибровку с использованием внутреннего стандарта проводят при хроматографировании смесей, содержащих внутренний стандарт в постоянной концентрации, а интересующий компонент в разных концентрациях. Измерив площади или высоты определяемых соединений, строят график их отношений к площади или высоте внутреннего стандарта в зависимости от концентрации интересующего компонента. Внутренний стандарт должен вноситься в такой концентрации, чтобы отношение высот h или площадей S пиков стандартов и компонентов было равно 1.

К основным узлам жидкостного хроматографа относятся насос для подачи элюента, дозатор или пробоотборник, хроматографическая колонка, детектор и регистрирующее устройство (самописец или дисплей). Кроме того, жидкостные хроматографы имеют различные вспомогательные блоки и системы, например, систему термостатирования и др.

Система подачи элюента включает дополнительные узлы: блок дегазации, устройство для проведения градиентного элюирования, насосы, систему поддержания и измерения давления. Насосы обеспечивают постоянную скорость потока элюента от 0,1 до 10 см3/мин при давлении ~ 4–40 МПа. Тщательное удаление газов из применяемых растворителей необходимо для устранения пузырьков из магистралей перемещения жидкой фазы. Современный жидкостной хроматограф имеет достаточно сложное устройство, обеспечивающее отбор элюентов из 2–3 емкостей в смеситель, затем в колонку, а также снабжен дозаторами, работающими при высоких давлениях.

Для ввода пробы исследуемой смеси применяются петлевые дозаторы или специальные микрошприцы. Часто используют дозатор с остановкой потока.

Хроматографические колонки изготавливают из стекла или нержавеющей стали. Колонки должны быть механически прочными и химически стойкими к действию элюента, хроматографируемых компонентов и соединений, применяемых при пробоподготовке.

Зерна твердого носителя должны иметь определенный гранулометрический состав и форму, близкую к сферической. Для приготовления элюентов и десорбентов применяются бидистиллят и специально очищенные органические растворители. При перемещении элюента через слой неподвижной фазы вдоль колонки компоненты разделяемой смеси должны фиксироваться детектором в виде четких неразмытых пиков.

В методе ВЭЖХ применяются стандартные прямые колонки длиной 10, 15 и 25 см с внутренним диаметром 4,0–5,5 мм. Объемы соединительных трубок, колонок, ячеек детектора, пробоотборника должны быть как можно меньшими, это устраняет размывание хроматографических пиков.

Детекторы служат для преобразования физического или физико-химического параметра в электрический сигнал, они регистрируют во времени содержание хроматографируемого компонента в подвижной фазе на выходе из колонки. Детекторы метода ЖХ подразделяют на оптические (фотометрические, флуориметрические, хемолюминесцентные, рефрактометрические) и электрохимические (кондуктометрические, кулонометрические, амперометрические, полярографические). Наибольшее применение получили спектрофотометрические детекторы, работа которых основана на измерении светопоглощения в ультрафиолетовой (190–380 нм) или видимой (380–800 нм) областях спектра. Такие детекторы характеризуются высокой чувствительностью к органическим соединениям различных классов, широким линейным динамическим диапазоном, малым рабочим объемом ячейки (10–6 дм3), небольшим расширением пиков, высокой воспроизводимостью показаний. Они не разрушают определяемые соединения, малочувствительны к изменениям скорости потока подвижной фазы и температуры. В настоящее время получили широкое распространение высокоскоростные диодно-матричные спектрофотометрические детекторы, регистрирующие спектр в течение 0,01–0,05 с. Современные жидкостные хроматографы снабжены компьютерной системой обработки результатов измерений. В блоке памяти такой системы хранится информация о спектрах поглощения большого числа органических веществ.

Работа электрохимических детекторов основана на электрохимических свойствах определяемых соединений, находящихся в потоке элюента. Различают детекторы, которые реагируют на изменение свойств элюента (кондуктометрические) или конкретный сорбат (амперометрические). Большинство электрохимических детекторов работает в амперометрическом режиме, при котором поддерживается постоянное напряжение между двумя электродами, погруженными в поток элюента, и сила тока регистрируется в зависимости от времени. Преимуществом таких детекторов являются простота конструкции, низкие пределы обнаружения, возможность регулирования селективности путем смены режимов работы детекторов, замены или модификации электродов.

Метод ВЭЖХ применяется для определения различных ЛВ и примесей в субстанциях и ЛФ, биологически активных соединений (например, витаминов). Подбор элюента и использование градиентного элюирования позволяет анализировать лекарственные смеси с близкими свойствами компонентов. На рис. 12 представлена хроматограмма смеси компонентов лекарственного препарата «Антигриппин», имеющего сложный состав.

560, 457, 355, 252, 149, Рис. 12. Хроматограмма компонентов лекарственного препарата «Антигриппин»: 1 – кислота аскорбиновая; 2 – 4-аминофенол;

Несмотря на известные технические проблемы, широкое практическое применение метода ВЭЖХ обусловлено такими достоинствами, как универсальность, возможность автоматизации разделения и анализа сложных смесей органических и неорганических веществ, высокая эффективность и низкие пределы обнаружения компонентов, экспрессность. Метод адсорбционной ВЭЖХ, как и метод газовой хроматографии, предназначен для серийного разделения ЛВ органической природы различных классов.

Газовая хроматография (ГХ) – метод разделения и определения летучих соединений.

Компоненты анализируемой смеси распределяются между неподвижной фазой (твердое вещество или жидкость) и газом-носителем – подвижной фазой.

Жидкая неподвижная фаза применяется в газожидкостной хроматографии (ГЖХ) и распределяется в виде тонкой пленки на поверхности инертного твердого носителя. Большой выбор жидких фаз, позволяющий работать в широком температурном диапазоне (20– 400°С), делает ГЖХ наиболее селективным хроматографическим методом разделения. Низкие пределы обнаружения, экспрессность, точность и простота операций обеспечили методу ГЖХ широкое применение для анализа сложных объектов.

В результате движения вдоль неподвижной фазы компоненты, находящиеся в парообразном состоянии, контактируют с адсорбентом или жидкостью. Происходит многократный переход вещества из одной фазы в другую (цикл сорбция-десорбция). Этот процесс обусловлен физико-химическими свойствами подвижной и неподвижной фаз, а также кинетическими параметрами установления межфазного равновесия.

Разделение смеси происходит в колонке – главной составной части хроматографа.

Обычно колонки заполняют твердым инертным носителем, на который в виде тонкой пленки наносят нелетучую жидкость. Колонки изготавливают из стали, стекла или полимерного материала, их скручивают в спираль в соответствии с размерами термостата хроматографа. Применяются также капиллярные колонки – трубки малого диаметра, на стенки которых наносят тонкую пленку жидкости или адсорбента.

Твердый носитель, характер и количество жидкой фазы, длина и температура колонки – важные факторы, обусловливающие разделение смесей.

Твердый носитель предназначен для удерживания тонкой равномерной пленки жидкой фазы. Требования к носителю:

– большая удельная поверхность (от 1 до 20 м2/г);

– малый и одинаковый диаметр пор;

– инертность (минимальные химические и адсорбционные взаимодействия с пробой);

– механическая прочность (носитель не должен измельчаться при заполнении и эксплуатации колонки).

5–15% от количества твердого носителя.

Выбор жидкой фазы в методе ГЖХ зависит от состава анализируемой смеси и осуществляется с учетом следующих требований:

– хорошая растворяющая способность компонентов смеси (при малой растворимости компоненты выходят из колонки быстро, разделение неудовлетворительное);

– избирательное растворение компонентов смеси;

– малая летучесть и химическая инертность при заданной температуре колонки.

Полнота информации о пробе (предполагаемые компоненты и их строение, диапазон температур кипения) облегчает выбор неподвижной жидкой фазы колонки и условий хроматографирования.

Для достижения эффективного разделения жидкая фаза по химическому строению должна быть аналогом компонентов анализируемой смеси. Так, полярные соединения (например, спирты) лучше разделяются на полярной жидкой фазе. При этом компоненты одной и той же природы выходят из колонки в последовательности, соответствующей возрастанию их температур кипения.

Выбор газа-носителя обусловлен эффективностью колонки, чувствительностью и принципом действия детектора. Обычно в качестве газа-носителя применяют гелий и азот.

Газ-носитель должен удовлетворять следующим требованиям:

– инертность, исключающая возможность взаимодействия с пробой или неподвижной фазой;

– обеспечение необходимых диффузионных характеристик, определяющих эффективность колонки;

– отсутствие влияния на показания детектора;

– чистота;

– доступность.

Газ-носитель, как правило, поступает в колонку хроматографа из баллона со сжатым газом. При изотермическом хроматографировании сопротивление колонки не меняется во время анализа. Для поддержания постоянного давления на входе в колонку и, следовательно, для сохранения неизменной скорости газа-носителя применяется регулятор давления. При данной температуре неизменная скорость газа-носителя обеспечивает постоянство времени удерживания анализируемых веществ. Оптимальную скорость газа-носителя обычно устанавливают экспериментально, она возрастает с увеличением длины и внутреннего диаметра колонки.

Интенсивность разделения смеси зависит от температуры. Обычно повышение температуры на 30°С вдвое увеличивает скорость перемещения компонентов смеси, результатом повышения температуры является сокращение продолжительности анализа.

Как правило, при снижении температуры достигается более полное разделение. Оптимальная температура должна быть не очень высокой (при этом ухудшается разделение) и не слишком низкой (это способствует увеличению времени удерживания). Температуру устанавливают примерно на уровне, равном средней температуре кипения смеси.

При выборе температуры колонки учитываются также физико-химические свойства жидкой фазы (температуры кипения, плавления и деструкции). Хроматографирование при постоянной по всей длине колонки температуре представляет собой изотермический процесс.

В изотермическом режиме разделение сложных смесей затруднено. Особенно это относится к смесям гомологов, температуры кипения которых значительно различаются.

Для улучшения разделения таких смесей изменяют температуру колонки во времени по определенной программе (газовая хроматография с программированием температуры).

С увеличением длины колонки разделение улучшается, однако при этом хроматографические пики размываются. Длина насадочных колонок составляет от 1 до 4 м; длина капиллярных колонок достигает 15–20 м.

Количество вводимой в хроматограф пробы обусловлено производительностью и эффективностью колонки, а также чувствительностью детектора. Объем пробы не должен приводить к перегрузке колонки и ухудшать разделение смеси. Обычно объем вводимой пробы составляет 0,0005–0,1 см3.

Наибольшее распространение в ГЖХ получили детекторы дифференциального типа, их сигнал пропорционален концентрации или скорости потока определяемого компонента. Примером детектора, реагирующего на концентрацию, является детектор по теплопроводности (катарометр). Действие такого детектора основано на том, что нагретое тело теряет тепло со скоростью, зависящей от состава окружающего газа. Ячейка детектора по теплопроводности представляет собой металлический блок с двумя каналами, через которые протянута электрообогреваемая платиновая или вольфрамовая проволока. Сопротивление проволоки является функцией температуры, зависящей от теплопроводности газовой смеси. При сравнении теплопроводности двух проволок, находящихся в каналах, через которые проходят соответственно чистый газ-носитель и его смесь с определяемым компонентом, получают величину, пропорциональную концентрации детектируемого вещества. Теплопроводность водорода или гелия значительно выше, чем теплопроводность большинства газов, поэтому такие измерительные ячейки характеризуются большой чувствительностью. Вследствие простоты и универсальности катарометры находят широкое применение, ограничение связано с невозможностью определения следовых количеств веществ.

Пламенно-ионизационный детектор (ПИД) реагирует на массовую скорость потока определяемого компонента (потоковый детектор). Действие ПИД основано на том, что при горении чистого водорода почти не образуются ионы (слабый ионный ток). При внесении в пламя водорода органических соединений, содержащих СН-группу, сила ионного тока возрастает. Детектор состоит из сопла для подачи смеси газа-носителя, водорода и воздуха, при горении которых образуется небольшое пламя. Над соплом расположен электрод-коллектор, вторым электродом является сопло. Возникающий ионный ток усиливают и измеряют. ПИД на два порядка превосходит по чувствительности катарометр и пригоден для определения следовых количеств веществ. Обслуживание и работа ПИД требуют больших производственных затрат, чем при использовании детектора по теплопроводности, поскольку необходимо применять усилитель и три вида газов (газ-носитель, водород и воздух), скорость которых регулируют одновременно.

Наряду с катарометрами и ПИД выпускаются детекторы других типов:

– детектор по измерению плотности газов;

– пламенно-фотометрический, основанный на измерении интенсивности излучения некоторых элементов пробы в пламени;

– электронозахватный (или детектор по постоянству рекомбинации), основанный на поглощении определяемым веществом -излучения радиоактивного никеля и некоторых других изотопов;

– фотоионизационный, основанный на измерении тока (определяемое соединение ионизируется с помощью рентгеновских лучей).

Время удерживания служит основой идентификации, поскольку определяется свойствами системы сорбент – сорбат. Количественный анализ основан на измерении площадей пиков или их высот при условии симметричности пиков.

В качестве примера использования метода ГЖХ в фармацевтическом анализе можно привести определение летучих фенолов (фенол, крезолы, тимол и др.) – широко распространенных дезинфицирующих средств. Метод ГЖХ широко используется для идентификации этилового спирта в различных ЛФ (настойки, экстракты и т.д.) и анализе этилового спирта. Газохроматографическим методом идентифицируют 18–20 компонентов (спирты, эфиры, альдегиды, кетоны) спиртовой фракции, полученной при обезвоживании продукта.

Достоинством метода является возможность определения примеси воды в спиртсодержащих ЛФ. При нарушении технологических режимов ректификации содержание воды в спирте возрастает, одновременно повышается концентрация примесей летучих органических соединений. Увеличение содержания воды в спирте крайне нежелательно, поскольку является нормируемым стандартом показателем качества готовой продукции. Газохроматографический анализ спирта-ректификата выполняют с применением детектора по теплопроводности, содержание воды в спирте находят методом абсолютной градуировки. Предварительная пробоподготовка при этом не требуется.

Планарная хроматография – способ хроматографического анализа, в котором процессы разделения смеси веществ осуществляются в плоском слое сорбента (неподвижной фазе). Планарная хроматография подразделяется на бумажную и тонкослойную. В первой в качестве сорбента используется специальная бумага. Во второй процессы разделения происходят в тонких слоях сорбента, нанесенного на инертную твердую подложку, или в пленках пористого полимерного материала. Бумажная и тонкослойная хроматографии сходны по технике выполнения анализа.

Хроматография в тонком слое (ТСХ) – один из простейших методов хроматографического анализа, разделение компонентов происходит при перемещении подвижной фазы через нанесенный на подложку (пластинку) тонкий слой сорбента. Продвижение элюента (подвижная фаза) через сорбент (неподвижная фаза) обеспечивается капиллярными силами. Метод ТСХ сочетает преимущества хроматографии на бумаге и колоночной хроматографии, а именно легкость обнаружения отдельных компонентов при опрыскивании пластинок различными реактивами и широкий выбор адсорбентов, применяемых в колоночной хроматографии. Разделение происходит быстро, как правило, в течение 30 мин. Метод позволяет достаточно легко подбирать элюент и сорбент для решения конкретной аналитической задачи. В качестве проявляющих реактивов применяются более агрессивные жидкости и растворы, чем в хроматографии на бумаге. ТСХ относится к микрохимическим методам анализа и позволяет использовать для определений минимальные объемы пробы.

В методе хроматографии на бумаге в качестве носителя (сорбента) применяется специально подготовленная бумага. Неподвижная фаза – это не только волокна целлюлозы, но и жидкость, адсорбированная на их поверхности. В зависимости от условий хроматографирования различают адсорбционную и распределительную хроматографию на бумаге. В методе адсорбционной хроматографии разделение компонентов осуществляется непосредственно на поверхности бумаги, в методе распределительной хроматографии – с помощью неподвижной фазы, удерживающейся в порах бумаги. Выбор механизма разделения компонентов зависит от конкретной аналитической задачи.

Для разделения ионов и нейтральных молекул применяется электрофорез. Хроматографическую бумагу пропитывают специальным фоновым электролитом, сравнительно хорошо пропускающим электрический ток. После нанесения на линию старта анализируемой и стандартной смесей вдоль бумаги пропускают постоянный электрический ток.

Ионизированные частицы под действием тока перемещаются по хроматограмме в направлении к электродам в соответствии с величиной и знаком их зарядов. Разделение компонентов происходит за счет внешнего электрического поля (электроды подключают от специального стабилизированного выпрямителя).

В методе ТСХ применяются выпускаемые промышленностью пластинки с закрепленным слоем сорбента – силикагелем или оксидом алюминия.

Состав тонкого слоя выбирают с учетом анализируемой пробы. Компоненты смеси должны разделяться достаточно полно, отдельные зоны не должны перекрываться. При выборе состава неподвижной фазы следует учитывать полярности сорбента и разделяемых веществ.

На приготовленные хроматографические пластинки наносят линии старта и финиша (рис. 13). На линии старта выбирают точки для каждой пробы или стандартного вещества на расстоянии 1,5 см от ее нижнего края. При нанесении линии финиша слой адсорбента прорезают до подложки так, чтобы при этом образовался заметный промежуток (0,5– мм). Таким образом, когда растворитель достигает финишной линии, перемещение подвижной фазы и разделение компонентов пробы прекращается.

Анализируемый раствор градуированным микрошприцем или микропипеткой наносят на пластинку в любую точку на линии старта. Как правило, наносимый объем составляет 1–5 мм3. Пробу растворяют в легко испаряющемся растворителе, при этом размер пятна на пластине получается минимальным. Применяют концентрированные пробы, поскольку для проявления пятно должно содержать 0,5–10 мкг определяемого вещества.

хроматограмма:

а-линия старта;

b- линия фронта;

х-длина пробега;

у-высота подъема элюента X После удаления избытка растворителя пластинку помещают в камеру для хроматографирования – плотно закрывающийся стеклянный сосуд с плоскими стенками. Для получения воспроизводимых результатов хроматографирования атмосферу камеры насыщают парами растворителя (подвижная фаза) – восходящий вариант ТСХ. Создание насыщенной атмосферы необходимо для устранения перемещения пятен, находящихся по краям пластинки, со скоростью, заметно отличающейся от скорости перемещения пятен, нанесенных в середину пластинки.

Известно несколько вариантов ТСХ, различающихся способом введения растворителя, наиболее распространенный вариант – восходящее элюирование. Растворитель помещают на дно хроматографической камеры, нижний край пластинки с нанесенными пробами медленно пропитывается подвижной фазой. Фронт хроматографирования перемещается снизу вверх.

Нисходящее элюирование применяется при анализе проб, компоненты которых медленно перемещаются по слою. Растворитель подают на пластинку из специального устройства сверху, т.е. к капиллярным силам добавляется сила гравитации. Таким способом достигается лучшее разделение компонентов смеси, чем при восходящем элюировании.

Для решения задач, связанных с разделением сложных смесей, применяется двухмерная хроматография. Анализируемую смесь разделяют одним растворителем, затем полученные зоны отдельных компонентов обрабатывают другим растворителем, подавая его в направлении, перпендикулярном к первоначальному. В результате действия двух различных элюентов происходит значительно более полное разделение смеси.

При выборе элюента руководствуются элюотропным рядом, в котором растворители расположены по возрастанию элюирующей эффективности, а также данными о свойствах разделяемых веществ и их способности взаимодействовать с подвижной и неподвижной фазами. Выбор растворителя аналогичен выбору состава элюента в колоночной хроматографии. Не рекомендуется применение многокомпонентных смесей; использование одноили двухкомпонентных элюентов улучшает воспроизводимость получаемых данных.

После разделения компонентов хроматографическую пластинку извлекают из камеры, просушивают для удаления избытка подвижной фазы, затем хроматограмму проявляют.

Окрашенные компоненты смеси четко видны на пластинке после разделения. Неокрашенные соединения обнаруживают различными способами. Если хроматограмму поместить в йодную камеру (сосуд с кристаллами иода), то компоненты смеси обнаруживаются в виде коричневых пятен. Хроматограмму проявляют опрыскиванием специфическими реактивами, образующими с компонентами смеси окрашенные соединения (рис. 14). Состав тонкого слоя готовых пластинок иногда включает люминофоры. При облучении такой пластинки светом с длиной волны 254 нм сорбент флуоресцирует, разделяемые компоненты проявляются в виде темных пятен.

Рис. 14. Хроматограмма аминосоединений, проявитель – 4-хлор-5,7-динитробензофуразан: 1– диметиланилин; 2 – анилин; 3 – 2,2,4-триметилдигидрохинолин; 4 – дифениламин; 5 – фенил--нафтиламин;

6 – -нафтиламин; 7 – гидразид салициловой кислоты; 8 – гидразин солянокислый; 9 – гидразин; 10 – изониазид; 11 – фосфабензид [10] При разделении некоторых сложных смесей применяется радиальная (круговая) хроматография, например при обнаружении легирующих компонентов в сталях и сплавах.

Хроматографическую бумагу вырезают в виде круга, анализируемый раствор помещают в центр хроматограммы и туда же по каплям наносят подвижную фазу. Диффундируя под действием капиллярных сил, подвижная фаза захватывает анализируемую смесь, компоненты которой при движении по бумаге распределяются концентрическими кругами. Полученную радиальную хроматограмму разрезают на отдельные секторы, каждый из которых проявляют различными реактивами (опрыскивают из пульверизатора). Применение радиальной хроматографии повышает возможности идентификации отдельных компонентов сложных смесей, однако при этом необходимо обеспечить равномерное продвижение фронта подвижной фазы.

Для оценки степени удерживания применяется коэффициент Rf, равный отношению расстояния X, пройденного веществом от линии старта до центра зоны распространения соответствующего вещества, к расстоянию Y, пройденному растворителем от линии старта до границы (фронта) распространения растворителя:

Этот параметр аналогичен относительным параметрам удерживания в методах газовой хроматографии и ВЭЖХ.

Сопоставляя величины Rf анализируемых и стандартных соединений, а также окраску пятен, делают вывод о качественном составе анализируемой пробы. Коэффициенты Rf имеют стабильные значения только в определенных условиях, зависящих от состава и структуры тонкого слоя, физико-химических свойств подвижной фазы и температуры.

Для получения однозначных и воспроизводимых результатов анализируемые и стандартные пробы хроматографируют в идентичных условиях.

Количественную оценку проводят по площади пятна и интенсивности его окраски или после перенесения пятна с пластинки в раствор. Во втором варианте количественное определение осуществляют после элюирования определяемого вещества с сорбента. Для измерения содержания компонента непосредственно на пластинке известно несколько способов. Наиболее простой прием состоит в измерении площади пятна. Предварительно строят градуировочный график где S – площадь пятна, т – масса определяемого или стандартного вещества.

При содержании компонентов в пределах 1–80 мкг эта зависимость линейна.

Распространен фотометрический способ количественного детектирования. Для определения содержания веществ в пятне измеряют интенсивность отраженного света с применением спектроденситометров, работающих в широкой области спектра ( = 190– нм). Интенсивность проходящего света измеряют микрофотометрами. Пластинку помещают на специальную площадку, продвигающуюся с постоянной скоростью относительно детектирующего устройства. Сигнал устройства пропорционален количеству вещества в зоне пятна и фиксируется в виде хроматографических пиков.

Для снижения относительной погрешности определения анализируемые соединения соскабливают с пластинки вместе с адсорбентом (неподвижной фазой) и определяют, как правило, фотометрически. При этом относительная погрешность не превышает 20–25%.

При фармацевтическом анализе важно контролировать не только ход технологических процессов, но и качество поступающего сырья растительного происхождения и готовой продукции. Метод ТСХ незаменим для оценки подлинности и доброкачественности ЛС.

Содержание вводимых в лекарственные препараты красителей строго нормируется, их определение методом ТСХ не требует применения проявителя. При анализе ЛФ необходимо определять содержание консервантов и других вспомогательных веществ.

Несмотря на доступность оборудования и необходимых реактивов, малую трудоемкость выполняемых операций, метод ТСХ характеризуется достаточно высокой эффективностью и низкими пределами обнаружения.

Гель-хроматография – метод разделения веществ, основанный на различии размеров их молекул. Метод известен под названиями гель-проникающая и эксклюзионная хроматорафия.

В качестве неподвижной фазы применяют гели, имеющие определенный размер пор;

подвижная фаза – водные или органические элюенты. Наиболее простое объяснение механизма разделения в гель-хроматографии состоит в том, что молекулы анализируемых веществ распределены между неподвижным растворителем в порах сорбента и элюентом, протекающим через слой неподвижной фазы. Молекулы с размером, позволяющим проникать в поры сорбента при движении вдоль колонки, задерживаются в порах. Молекулы, имеющие размеры большие, чем поры, не проникают в сорбент и вымываются из колонки со скоростью движения элюента. Молекулы, проникающие в поры всех размеров, движутся наиболее медленно. Снижение скорости движения компонентов вдоль колонки прямо связано с количеством пор, в которые способны диффундировать распределяемые частицы (рис. 15).

Таким образом, методом гель-хроматографии можно разделять смеси веществ в зависимости от размеров их молекул. Выход компонентов из колонки происходит в порядке снижения их молекулярных масс. Вытекающие из колонки растворы анализируют различными методами, например спектрофотометрическим, фотометрическим, титриметрическим (амперометрическое или потенциометрическое детектирование).

В гель-хроматографии применяются неподвижные фазы, способные к образованию геля с растворителями. Эти гели подразделяют на мягкие, полужесткие и жесткие. К мягким относятся гели, приготовленные на основе полисахаридов – крахмала, декстрина, целлюлозы. Наиболее широкое применение в лабораторной практике получил сефадекс – высокоочищенный и специально подготовленный препарат кукурузного крахмала. Мягкие гели применяются для разделения сравнительно низкомолекулярных соединений, они не устойчивы к повышенным давлениям и температурам и деформируются при относительно высоких скоростях движения элюента, что нарушает хроматографическое разделение.

Для достижения большей стабильности гелей при экспериментировании с мягкими и полужесткими гелями применяется колоночный вариант хроматографирования.

Мягкие гели готовят насыщением водой или элюентом в течение 5–20 ч соответствующего гелеобразователя (сефадекс, полиакриламид и др.). Продолжительность и температура насыщения указаны на упаковке препарата.



Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |
 


Похожие работы:

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования ОМСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ФАКУЛЬТЕТ КОМПЬЮТЕРНЫХ НАУК МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ВЫПОЛНЕНИЮ ДИПЛОМНОЙ РАБОТЫ Специальность 075200 - Компьютерная безопасность ОМСК - 2006 Методические указания по выполнению квалификационной работы, предназначенной для студентов дневной обучения. Общие положения 1.Организация выполнения дипломной работы 1.1 Оформление бланка задания на...»

«База нормативной документации: www.complexdoc.ru ОТКРЫТОЕ АКЦИОНЕРНОЕ ОБЩЕСТВО ГАЗПРОМ ФИЛИАЛ ООО КУБАНЬГАЗПРОМ НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКИЙ ЦЕНТР ИНФОРМАЦИОННО-РЕКЛАМНЫЙ ЦЕНТР ГАЗОВОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ (ИОО ИРЦ ГАЗПРОМ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО КОНТРОЛЮ ТЕХНИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ КРЕПИ СКВАЖИН (ВТОРАЯ РЕДАКЦИЯ) Москва 2002 В настоящей работе рассматриваются геофизические исследования для изучения технического состояния обсадных колонн и цементного камня, предопределяется необходимость проведения мониторинга...»

«РУКОВОДЯЩИЙ ДОКУМЕНТ ОТРАСЛИ СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ ЭЛЕКТРОСВЯЗИ Методические указания по поверке сетевых анализаторов типа ANT-20 РД 45.1 01-99. 1 Область применения Настоящий руководящий документ отрасли устанавливает порядок поверки сетевых анализаторов типа ANT-20 Требования руководящего документа обязательны для выполнения специалистами метрологической службы отрасли, занимающимися поверкой данного типа средств измерений Руководящий документ отрасли разработан с учетом положений РД 50-660, ОСТ...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ТАТАРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ГУМАНИТАРНО-ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ БЕЗОПАСНОСТЬ И ЗАЩИТА ЧЕЛОВЕКА В ЧРЕЗВЫЧАЙНЫХ СИТУАЦИЯХ УЧЕБНОЕ ПОСОБИЕ КАЗАНЬ 2011 Печатается по решению кафедры безопасности жизнедеятельности Факультета физкультурного образования Татарского государственного гуманитарно-педагогического университета и ГУ Научный центр безопасности жизнедеятельности детей УДК 614.8 Святова Н.В., Мисбахов А.А., Кабыш Е.Г., Мустаев Р.Ш., Галеев...»

«Федеральное агентство по образованию Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Тихоокеанский государственный университет ИЗГОТОВЛЕНИЕ КОМПОСТА ИЗ РАСТИТЕЛЬНЫХ ОТХОДОВ Методические указания к выполнению лабораторной работы по курсу Основы микробиологии и биотехнологии для студентов специальности 280201.65 Охрана окружающей среды и рациональное использование природных ресурсов Хабаровск Издательство ТОГУ 2010 УДК 573.6.086.83 Изготовление компоста из...»

«государственное бюджетное образовательное учреждение.Областное Среднего профессионального образования Томский индустриальный техникум Согласованно: Утверждаю: Председатель ЦК Зам. директора по УМР Терентьева Е.А. _ 2012г. 2012г. Методические указания и контрольные задания для студентов-заочников ОГОУ СПО ТомИнТех по дисциплине: Безопасность жизнедеятельности (БЖД). Заочное отделение Разработчик: Кутыгин Геннадий Леонтьевич Томск – 2012г. ОДОБРЕНА Составлена в соответствии Цикловой комиссией с...»

«МИНИСТЕРСТВО ЭКОНОМИКИ МОСКОВСКОЙ ОБЛАСТИ РАСПОРЯЖЕНИЕ 27.04.2010 №26-РМ Московская область Об утверждении Методических рекомендаций по определению хозяйствующих субъектов, не выполняющих принятых обязательств при осуществлении своей деятельности на территории Московской области, и Перечня критериев распределения хозяйствующих субъектов, осуществляющих хозяйственную деятельность на территории Московской области, между центральными исполнительными органами государственной власти Московской...»

«ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗАЩИТЫ ПРАВ ПОТРЕБИТЕЛЕЙ И БЛАГОПОЛУЧИЯ ЧЕЛОВЕКА Федеральное казённое учреждение здравоохранения Иркутский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока Организация и проведение учебного процесса по подготовке специалистов в области биобезопасности и лабораторной диагностики возбудителей некоторых опасных инфекционных болезней (учебно-методическое пособие для врачей-бактериологов, эпидемиологов,...»

«Министерство образования и науки Российской Федерации Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Амурский государственный университет Кафедра безопасности жизнедеятельности УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКИЙ КОМПЛЕКС ДИСЦИПЛИНЫ ЭКОЛОГИЯ Основной образовательной программы по направлению: 100100.62 Сервис. Профиль: Сервис в индустрии моды Благовещенск 2012 УМКД разработан кандидатом биологических наук, доцентом Иваныкиной Татьяной Викторовной....»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РФ Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Томский государственный университет систем управления и радиоэлектроники (ТУСУР) Кафедра автоматизированных систем управления ИНФОРМАЦИОННАЯ БЕЗОПАСНОСТЬ Методические указания по самостоятельной и индивидуальной работе студентов по дисциплине Методы и средства защиты компьютерной информации специальности 230105 Программное обеспечение вычислительной техники...»

«КОНФЛИКТОЛОГ — ПРОФЕССИЯ XXI ВЕКА Учебное пособие по дисциплине Введение в специальность, направлению высшего профессионального образования Конфликтология ВЫПУСК 133 Санкт-Петербург 2014 ББК 65.291.66 + 67.405.117 К64 Научный редактор Г. М. Бирженюк, заведующий кафедрой конфликтологии СПбГУП, доктор культурологии, профессор, заслуженный работник высшей школы РФ Рекомендовано к публикации редакционно-издательским советом СПбГУП Конфликтолог — профессия XXI века : сб. / Г. В. Осипов К64 [и др.]....»

«ОЦЕНКА ХИМИЧЕСКОЙ ОБСТАНОВКИ ПРИ РАЗРУШЕНИИ (АВАРИИ) ХИМИЧЕСКИ ОПАСНЫХ ОБЪЕКТОВ Методические указания выполнения практической работы №1 по дисциплине Безопасность жизнедеятельности Омск 2013 Министерство образования и науки Российской Федерации Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Сибирская государственная автомобильно-дорожная академия (СибАДИ) Кафедра Техносферная безопасность ОЦЕНКА ХИМИЧЕСКОЙ ОБСТАНОВКИ ПРИ РАЗРУШЕНИИ...»

«2.6.1. Ионизирующее излучение. Радиационная безопасность Методические рекомендации МР 2.6.1.0064-12 Радиационный контроль питьевой воды методами радиохимического анализа (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 9 июня 2012 г.) Введены в действие с момента утверждения Введены впервые Список сокращений, принятых в настоящих методических рекомендациях НКДАР ООН - научный комитет по действию атомной радиации при организации объединенных наций; ВОЗ - всемирная организация здравоохранения;...»

«Федеральное агентство по образованию Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования ИВАНОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ТЕКСТИЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ (ИГТА) Кафедра безопасности жизнедеятельности МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К КОНТРОЛЬНОЙ РАБОТЕ ПО КУРСУ ЗАЩИТА НАСЕЛЕНИЯ И ТЕРРИТОРИЙ В ЧРЕЗВЫЧАЙНЫХ СИТУАЦИЯХ для студентов всех специальностей заочной формы обучения Иваново 2004 Методические указания предназначены для студентов заочной формы обучения, изучающих дисциплину Защита...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования ИВАНОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ТЕКСТИЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ (ИГТА) Кафедра безопасности жизнедеятельности Методические указания к выполнению расчетной части БЖД дипломных проектов студентов специальности 170700 (все формы обучения) Иваново 2005 Методические указания предназначены для студентов всех форм обучения специальности 170700, выполняющих раздел Безопасность и экологичность дипломных...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Сибирский федеральный университет КРИПТОГРАФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ЗАЩИТЫ ИНФОРМАЦИИ Методические указания к лабораторным работам Красноярск 2008 2 Криптографические методы защиты информации: Методические указания к лабораторным работам по освоению дисциплины Криптографические методы защиты информации для студентов направления подготовки 075200 - 075400 – Информационная...»

«ПРАВОВОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ ИНФОРМАЦИОННОЙ БЕЗОПАСНОСТИ Тамбов ИЗДАТЕЛЬСТВО ГОУ ВПО ТГТУ 2010 Министерство образования и науки Российской Федерации Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Тамбовский государственный технический университет ПРАВОВОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ ИНФОРМАЦИОННОЙ БЕЗОПАСНОСТИ Методические указания для студентов 4 курса специальностей 075500 (090105), 010502 (080801), 071900 (230201), 030501 всех форм обучения Тамбов Издательство ГОУ ВПО ТГТУ УДК...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ САМАРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ Кафедра Электроснабжение промышленных предприятий Ю. Ф. ЛЫКОВ СИСТЕМЫ ЭЛЕКТРОСНАБЖЕНИЯ Учебное пособие Самара Самарский государственный технический университет 2009 Введение Рационально спроектированная система электроснабжения промышленного предприятия должна удовлетворять ряду требований: высокой надежности и экономичности,...»

«Министерство образования и науки Российской Федерации Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Уфимский государственный нефтяной технический университет Кафедра Промышленная безопасность и охрана труда Учебно-методическое пособие к выполнению раздела дипломного проекта (работы) Безопасность и экологичность проекта Уфа 2011 2 В методическом пособии изложены основные требования к содержанию и оформлению раздела выпускного квалификационного проекта (работы,...»

«Министерство образования и науки Российской Федерации Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Амурский государственный университет Кафедра безопасности жизнедеятельности УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКИЙ КОМПЛЕКС ДИСЦИПЛИНЫ ИНФОРМАЦИОННЫЕ СИСТЕМЫ ПОДДЕРЖКИ ПРИНЯТИЯ РЕШЕНИЙ Основной образовательной программы по специальности: 280101.65 Благовещенск 2012 г. Печатается по решению редакционно-издательского совета инженерно-физического факультета...»








 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.