WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

Технология биологически активной добавки к пище на основе каротиноидов асцидии halocynthia aurantium

На правах рукописи

МОТОРЯ Екатерина Сергеевна

ТЕХНОЛОГИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ К ПИЩЕ

НА ОСНОВЕ КАРОТИНОИДОВ АСЦИДИИ

HALOCYNTHIA AURANTIUM

Специальности:

05.18.07 – биотехнология пищевых продуктов (биотехнология гидробионтов);

03.00.04 – биохимия — технические наук

и

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Владивосток – 2009 2

Работа выполнена в лаборатории биохимии гидробионтов Федерального государственного унитарного предприятия «Тихоокеанский научно-исследовательский рыбохозяйственный центр (ФГУП «ТИНРО-Центр»).

Научный руководитель — доктор биологических наук, старший научный сотрудник Пивненко Татьяна Николаевна

Официальные оппоненты — доктор технических наук, профессор Подкорытова Антонина Владимировна — кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Касьянов Сергей Павлович

Ведущая организация — Дальневосточный государственный университет

Защита диссертации состоится 25 декабря 2009 г. в 13 час 30 мин на заседании диссертационного совета Д 307.012.01 при ФГУП «Тихоокеанский научно-исследовательский рыбохозяйственный центр» по адресу:

690091, г. Владивосток, пер. Шевченко, 4, факс: (4232) 300- e-mail: pivnenko@tinro.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУП «ТИНРО-Центр».

Автореферат разослан «20» ноября 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук О.С. Темных

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Исследование химических компонентов, входящих в состав морских животных, в течение последних лет остается на пике интересов биохимиков, фармакологов и исследователей смежных специальностей. Обнаружение компонентов с новыми качественными характеристиками, изучение их структуры и биологической активности позволяет выявить новые виды природных соединений, оценить их физиологическую активность (Еляков и др.
, 1992; Еляков, Стоник, 2003; Пивненко, 2006; Суховеева, Подкорытова, 2006; Стоник, Толстиков, 2008). Гидробионты, особенно беспозвоночные животные, отличаются от наземных организмов значительным разнообразием вторичных метаболитов, среди которых доминирующая часть представлена функциональными соединениями. К соединениям такого типа относятся каротиноиды, которые проявляют широкий спектр биологической активности (Cantrell et al., 2003; Chew, Park, 2004; Konishi et al., 2006; Santocono et al., 2007; McNulty et al., 2008). Анализ литературных источников показывает, что каротиноиды морских организмов изучены недостаточно. В настоящее время исследования каротиноидов ведутся по нескольким направлениям. Прежде всего, это исследования состава и метаболизма, а также антиоксидантных свойств (Young et al., 2004; Stahl, Sies, 2005; Wolf et al., 2009), в основе которых лежат окислительно-восстановительные характеристики этих веществ с их уникальной системой сопряженных связей (Carotenoids 1A, 1B, 1995). На примере астаксантина морских животных показано, что его активность в десять раз превышает аналогичные свойства -каротина (Miki, 1991). Также проводятся исследования иммуномодулирующей, противоопухолевой активностей, способности модулировать экспрессию генов, обеспечивая защиту от воспалительных повреждений и неопластических трансформаций (Nishino et al., 1992; Hix et al., 2004; Hughes, 2004; Ishikawa et al., 2008).

В настоящее время в нашей стране происходят существенные изменения в структуре промысла, наблюдается расширение списка объектов за счет видов ранее считавшихся не пригодными для пищевого использования. К ним относятся многие виды моллюсков, иглокожих, ракообразных. В странах АТР ассортимент привлекаемых к пищевому использованию гидробионтов значительно шире, он включает также асцидий — животных, принадлежащих к типу хордовых (Chordata), подтипу оболочников (Tunicata). Наибольшее количество их видов принадлежит к классу асцидий (Ascidiacea), химический состав которых характеризуется наличием специфических компонентов из разряда пептидов (Lee et al., 2001; Jang et al., 2002), каротиноидов (Ookubo, Matsuno, 1985; Choi et al., 1994a; Белорукова и др., 2006), алкалоидов (Еляков, Стоник, 2003; Agrawal et al., 2004; Issa et al., 2004), углеводов (Anno et al., 1974; Lee et al., 1998a; Усов и др., 2002).

В дальневосточных и арктических морях России широко распространена асцидия Halocynthia aurantium, содержащая в своих тканях каротиноиды в высоких концентрациях. Она обитает преимущественно на глубине от 1 до 65 м, и ее запасы позволяют производить промышленный вылов. Ранее предпринимались попытки обоснования пищевого использования этого вида асцидий, не получившие дальнейшего развития (Савватеева, 1990), поэтому биотехнологический и биогенный потенциал данного вида сырья не имеет объективной оценки.

Известны работы по использованию туники H. aurantium для получения БАД «Хаурантин», обладающей стресс-протекторной активностью (Кушнерова и др., 2000; Добряков, 2004). Однако предлагаемая технология обеспечивает выход каротиноидов, не превышающий 1 % их суммарного количества в исходном сырье.

Таким образом, широкий спектр биологической активности каротиноидов морских организмов свидетельствует о целесообразности их выделения и использования в лечебных и профилактических целях. Обоснование использования асцидии пурпурной в качестве источника каротиноидов позволит не только расширить сырьевую базу биопрепаратов, но и выявить особенности их состава и биологической активности, предложить новые рациональные технологии переработки.

Цель работы — исследование распределения и свойств биологически активных компонентов асцидии пурпурной как перспективного промыслового объекта, разработка эффективных технологий концентратов каротиноидов и определение их биологической активности.

Задачи исследования:

- исследовать технохимический состав тканей и органов асцидии пурпурной как основу для рекомендаций по ее переработке для производства БАД и пищевых продуктов;

- исследовать состав биологически активных компонентов в тканях асцидии для обоснования направлений их применения;

- исследовать качественный и количественный состав каротиноидов в тканях асцидии;

- определить структуру преобладающих каротиноидов, входящих в состав сырья и препаратов;

- определить рациональные параметры процесса экстракции и концентрирования каротиноидов;

- обосновать и разработать технологию масляных экстрактов каротиноидов в качестве БАД к пище;

- провести оценку безопасности и биологической активности БАД к пище, исследовать антиоксидантные и мембранотропные свойства препаратов;

Научная новизна. На основе новых инструментальных методов пересмотрены данные по составу биологически активных соединений в различных органах и тканях асцидии пурпурной H. aurantium, дана сравнительная характеристика качественного и количественного содержания азотистых соединений (свободных аминокислот, дипептидов, аминосахаров). Впервые проведен анализ компонентного состава каротиноидов тканей и органов асцидии и показано наличие 8 индивидуальных соединений в тунике методом ВЭЖХ. Выявлено значительное преобладание кислородсодержащих форм (ксантофиллов).

Значения молекулярных масс (с точностью до третьего знака), полученные массспектрометрией высокого разрешения, и характеры электронных спектров поглощения использованы для идентификации каротиноидов и построения структурных формул 5 преобладающих компонентов.

На основе сравнительного анализа способности каротиноидов асцидии к экстракции и реэкстракции в различных системах растворителей впервые разработан способ получения масляных концентратов, показано влияние органических кислот на процесс разрушения каротинопротеиновых комплексов асцидии. Показана зависимость процесса реэкстракции от липидного состава растительных масел и жиров морских организмов.

Разработана и научно обоснована технология БАД к пище «Экстракт асцидии масляный» из туники H. aurantium. Показателем подлинности сырья и продуктов на его основе может служить количественное содержание каротиноида галоцинтиаксантина.

Впервые исследовано влияние каротиноидов H. aurantium на текучесть мембран в модельных экспериментах. Показано, что каротиноиды из туники асцидии обеспечивают увеличение структурной стабильности, уменьшение текучести и повышение термостабильности мембраны в жидкокристаллическом состоянии. Установлены антиоксидантная и иммунотропная активности БАД к пище «Экстракт асцидии масляный».

Практическая значимость состоит в обосновании способов утилизации ранее не используемого вида морских организмов; разработке рекомендаций по комплексной безотходной переработке асцидии пурпурной, включающей создание БАД направленного типа действия; разработке технологии концентрированных масляных экстрактов каротиноидов.

Разработана и утверждена нормативная документация на «Асцидию пурпурную — сырец» ТУ 9253-308-00472012-06, «Асцидию пурпурную мороженую» ТУ 9265-311БАД к пище «Экстракт асцидии масляный» ТУ 9283-315-00472012-07.

По результатам экспертной оценки и санитарно-гигиенических исследований в Федеральном центре Госсанэпиднадзора РФ «Экстракт асцидии масляный» соответствует требованиям СанПиН и зарегистрирован как БАД к пище (санитарно-эпидемиологическое заключение № 77.99.13.003.Т.002367 от 31.10.2007).

Реализация результатов исследования. В настоящее время промышленный выпуск БАД к пище «Экстракт асцидии масляный» (субстанция) осуществляется на экспериментальном участке ФГУП «ТИНРО-Центр», конечная форма производится в ООО «Биополимеры». Установлена экономическая эффективность производства БАД.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы были представлены на «XII Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации» (Таиланд, 2007); на конференции «Современное состояние водных биоресурсов», посвященной 70-летию С.М. Коновалова (Владивосток, 2008); на 9-й Тихоокеанской международной научно-практической конференции студентов и молодых ученых «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины» (Владивосток, 2008); на научной конференции «Иммуномодуляторы природного происхождения» (Владивосток, 2009).

Основные положения, выносимые на защиту По совокупным признакам (распространению, химическому составу и составу БАВ) асцидия пурпурная Halocynthia aurantium является наиболее перспективным видом асцидий Дальневосточного региона России для использования в пищевой промышленности.

Исследование каротиноидов асцидии H. aurantium методами ВЭЖХ и массспектрометрии позволяет выделить и идентифицировать преобладающие компоненты. В качестве показателя подлинности сырья и продуктов на его основе может быть использован галоцинтиаксантин.

Технология масляного экстракта асцидии H. aurantium позволяет получать кислородсодержащие каротиноиды (ксантофиллы) в виде концентрированных препаратов, обладающих широким спектром биологической активности.

Публикации. По результатам диссертационной работы опубликовано 6 печатных работ, в том числе 4 – в изданиях, рекомендованных ВАК и один патент на изобретение Структура и объем диссертации. Диссертация включает введение, обзор литературы, описания материалов и методов исследования, экспериментальную часть, выводы, список цитируемой литературы, содержащий 215 источников, в том числе 140 зарубежных. Работа изложена на 141 странице, содержит 31 таблицу, 30 рисунков и 8 приложений.

Благодарности. Я искренне благодарна своему научному руководителю Т.Н. Пивненко за помощь и наставления при написании диссертации, а также выражаю признательность П.А. Задорожному, В.Г. Рыбину, Н.М. Саниной за помощь в работе и полезные советы, Н.М. Купиной за ценные замечания по улучшению структуры работы.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ

Введение. Обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, научная новизна и практическая значимость работы.

Глава 1. Обзор литературы. Проведен анализ отечественной и иностранной научной и патентной литературы о химическом составе асцидий, распространении каротиноидов и методах выделения их из природных источников. Показано, что асцидии рода Halocynthia характеризуются наличием высоких концентраций каротиноидов в тунике и мантии, которая в странах АТР является ценным пищевым сырьем. Показано, что каротиноиды проявляют ярко выраженный антиоксидантный эффект, являющийся основным механизмом их биологической активности. Каротиноиды обладают мембранотропной, иммуномодулирующей, противоопухолевой, противоатеросклеротической и противоишемической активностями, способны защищать ДНК от мутаций, воздействовать на экспрессию генов. Показаны существенные различия в биологической активности ксантофиллов (преобладающих в морских организмах) и каротинов (преобладающих в растениях). Проанализированы технологические подходы к получению препаратов каротиноидов. Показана необходимость учета особенностей химического состава объекта, подбора условий, обеспечивающих стабильность, высокий выход и адекватные экономические затраты.

Глава 2. Объекты, материалы и методы исследований. Объектами исследований являлись асцидии H. aurantium, выловленные в зал. Петра Великого (Японское море), а также Styela clava. Сбор H. aurantium проводили в марте, августе и ноябре 2006–2009 гг., S. clava – в июне 2006 г. Материалом исследований служили: ткани и органы асцидий; подсолнечное, льняное, рапсовое и оливковое масла; жиры морских организмов, полученные в лаборатории БАД и фармпрепаратов ФГУП «ТИНРО-Центр»; ДПФХ 99 %-ной чистоты (Sigma Chemical Co, США).

Массовую долю воды определяли по ГОСТу 7636-85. Содержание общего азота — по методу Кьельдаля на приборе «Kjeltec 2300» (Foss, Швеция). Содержание связанных аминокислот устанавливали после 24 ч гидролиза обезжиренной ацетоном ткани в 6 N HCl. Свободные аминокислоты экстрагировали 70 %-ным водным этанолом. Состав аминокислот определяли в стандартных условиях на аминокислотном анализаторе «L-8800» (Hitachi, Япония). Экстракцию липидов проводили по методу Фолча (Folch et al., 1957). Общее содержание фосфолипидов и их отдельных классов устанавливали по методу Васьковского и Костецкого (Vaskovsky et al., 1975). Жирные кислоты анализировали на газожидкостном хроматографе «GC-16А» (Shimadzu, Япония). Содержание углеводов определяли антроновым методом (Кочетков, 1967). Содержание гексозаминов и сульфат-ионов — спектрофотометрически согласно фармакопейной статье (ФС № 42-1286-99). Минеральный состав устанавливали в лаборатории прикладной экологии и токсикологии ТИНРО-Центра методом атомноабсорбционной спектроскопии на пламенно-эмиссионном спектрофотометре «АА-855» (Nippon Jarrel Ash, Япония). Количественное содержание каротиноидов определяли спектрофотометрическим методом (Карнаухов, 1988). Состав каротиноидов анализировали высокоэффективной жидкостной хроматографией на приборе «LC-6A» (Shimadzu, Япония). Исследование токсичных элементов, радионуклидов и микробиологических контаминантов осуществляли согласно СанПиН 2.3.2.1078-01. Согласно известным методам определяли фагоцитарную и бактерицидную активности нейтрофилов (Лебедев, 1990; Хаитов, 1995) и антиокислительную активность крови (Бородин, Арчаков, 1987; Чумак и др., 1992). Мембранотропную активность каротиноидов определяли методом дифференциальной сканирующей калориметрии на приборе «ДСМ-2M» (НПО «Биоприбор», Пущино, Россия).

Глава 3. Результаты и обсуждение. Технохимическая характеристика асцидий.

Показано, что размерно-массовый состав асцидии H. aurantium значительно варьирует в зависимости от сезона. Наибольшая предельная масса животного зафиксирована в августе (398 г), наименьшая – в марте (25 г), на долю гемолимфы приходится 40–49 %, желудка с содержимым – 15–32 %, туники – 10–20 %, подошвы – 6–9 %, мантии – 6–7 %, пищеварительной железы – 1,4–1,9 %, гонад – 1,2–1,8 % общей массы.

В результате исследования химического состава асцидии H. aurantium показано (табл.

1), что ткани и органы животного значительно обводнены (85–90 %) и только жестко структурированная внешняя оболочка — туника — содержит до 80 % воды. Все ткани H. aurantium отличаются низкой концентрацией белка: в мантии содержится 10 % общей массы, в гонадах – 9 %, в тунике – 8 %, в пищеварительной железе – 5 %.

Общий химический состав асцидии H. aurantium, % от общей массы, среднее ± Примечание. Прочерк – нами не определено.

При исследовании аминокислотного состава асцидий установлено, что преобладающими протеиногенными кислотами являются глутаминовая (11–16 %), аспарагиновая кислоты (10–13 %), лизин, лейцин, аргинин. Содержание незаменимых аминокислот в белках тканей асцидии H. aurantium составляет 35–37 % общей суммы кислот, в тунике их количество значительно ниже. По сравнению с идеальным белком наблюдается дефицит лейцина, изолейцина, фенилаланина и некоторых других.

Ткани асцидий также содержат значительное количество свободных аминокислот (САК). Содержание САК уменьшается в ряду пищеварительная железа туника мантия.

Во всех тканях преобладает аминосульфокислота таурин (33–47 % общего количества аминокислот), что типично для морских организмов. Для гонад асцидии наблюдается значительная сезонная изменчивость количества САК. Относительно высокое содержание таурина, глицина и пролина определяется осморегулятивными функциями этих аминокислот, их соотношение отличает этот класс животных как от беспозвоночных, так и от позвоночных. Отдельно рассмотрен состав протеиногенных и свободных аминокислот в гемолимфе, суммарное содержание САК и таурина в пересчете на сухую массу в этой ткани наиболее высоко и превышает таковое в тунике, мантии и внутренних органах в 8–25 раз.

Количество липидов асцидии пурпурной в мантии, тунике, пищеварительной железе не превышает 1 % общей массы, только в гонадах их содержание около 2 %. На долю фосфатидилхолина приходится 44–54 % суммы фосфолипидов. Содержание полиеновых жирных кислот 25–48 % суммы кислот в зависимости от органа. Количество углеводных компонентов в асцидии невелико – около 1 %, только туника содержит углеводы (предположительно сульфатированный хитин «туницин» (Anno et al., 1974)) в значимых количествах — 12 %.

Для сравнения и определения возможности использования был исследован химический состав другого массового вида асцидий – S. clava, которая значительно меньше по размеру: масса одной особи не превышает 20 г. Доля белковых соединений S. clava также невелика и составляет 5,5 % в тунике и 7,5 % общей массы в остальных органах. Количество аминокислот, образующих белок, в асцидии S. clava ниже, чем в H. aurantium, а распределение САК подобно: во внешней оболочке содержание таурина – 33 %, во внутренних органах – 29 %.

Проведено сравнение содержания каротиноидов в различных видах асцидий и показано, что только H. roretzi (туника) и H. aurantium (туника и мантия) содержат значительное количество каротиноидов (табл. 2). Обнаружена сезонная изменчивость содержания каротиноидов в тунике: наибольшая концентрация наблюдается в марте. Для других органов заметных сезонных различий не наблюдали. В целом, содержание каротиноидов асцидий уменьшается в ряду туника мантия пищеварительная железа гонады.

В тканях и органах асцидии пурпурной содержится ряд физиологически важных минеральных элементов: K, Ca, Mg, Zn, Fe, Mn, Cu. Установлено, что гемолимфа асцидии включает большое количество ванадия — 220 мкг/г сухого веса, что предполагает возможность рассмотрения ее в качестве перспективного источника для получения препаратов, обогащенных этим элементом.

Содержание каротиноидов в некоторых видах асцидий, мг/100 г сырой ткани Halocynthia Halocynthia Styela plicata Bothryllus schlosseri Bothryllus violaceus Amoroucium plicif Ciona intestinalis Ascidia zara Didemnum moseleyi Polycitor proliferus * Вместе с содержимым желудка.

Санитарно-эпидемиологическая оценка содержания токсичных элементов (ртути, свинца, мышьяка и кадмия), а также радионуклидов показала, что в тканях асцидии данные элементы не достигали предельно допустимых уровней, определяемых СанПиН 2.3.2.1078.

По микробиологическим показателям, включающим определение парагемолитических вибрионов – возбудителей пищевых токсикоинфекций, асцидия пурпурная также соответствует требованиям СанПиН 2.3.2.1078.

Полученные результаты позволяют предложить следующие направления для переработки тканей и органов асцидии пурпурной:

1. Пищевое использование — мантия асцидии целиком;

2. БАД к пище и лекарственные препараты: экстракты туники и мантии – источники каротиноидов; гидролизаты мантии и гонад в качестве источника аминокислот, белков и каротиноидов; гемолимфа асцидии – в качестве источника свободных аминокислот и ванадия.

Из перечисленных направлений для дальнейшей работы были выбраны исследования каротиноидов, их состава, свойств и методов выделения.

Разработка технологии заготовки сырья. Показаны и обоснованы условия заготовки, транспортировки и хранения асцидии-сырца и асцидии мороженой. Предложено выпускать мороженую асцидию в неразделанном виде (целиком) и с разделкой на органы (мантия, туника). При разработке технологии мороженой продукции исследованы изменения концентрации каротиноидов в тунике и мантии в целой и разделанной асцидии. Установлено, что за 6 мес холодильного хранения при температуре минус 18 °С асцидии разделанной и за 4 мес — неразделанной сохраняется качество сырья, необходимое для создания БАД к пище на основе каротиноидов асцидии пурпурной.

Сравнительная характеристика способов выделения каротиноидов. Исследованы различные способы и условия экстракции каротиноидов для обоснования рационального сочетания таких показателей, как выход и стабильность каротиноидов. Показано, что для каротиноидов, находящихся в нативных тканях в ассоциации с белками и липидами, наиболее эффективным способом извлечения является первоначальная экстракция этанолом с последующей реэкстракцией растительным маслом. Использование системы этанол-гексан дает наилучший количественный выход, однако использование гексана не приемлемо в пищевых продуктах. Эффективности систем ацетон-масло и этанол-масло сравнимы. Однако в случае туники система этанол-масло показала лучший результат. При использовании такой двухступенчатой методики выход каротиноидов составляет 82,5 % по отношению к содержанию в исходной ткани (табл. 3). Результаты проведенных исследований защищены патентом № 2339387 «Способ получения биологически активной добавки из асцидии».

Выход каротиноидов при использовании различных способов экстракции, % Пищеварительная Примечание. За 100 % принято количество каротиноидов, извлекаемое системой ацетонгексан (Schiedt, Liaaen-Jensen, 1995) при следующих соотношениях: сырье : экстрагент (M/V) – 1 :

10; экстракт : реэкстрагент (V/V) – 5 : 1.

Для исследования влияния состава реэкстрагентов на эффективность перехода каротиноидов в жировую фракцию и получения препаратов, обогащенных каротиноидами, были использованы различные растительные масла (подсолнечное, рапсовое, оливковое и льняное) и жиры морских организмов (жир из печени сельдевой акулы, рыбный жир, подкожный жир кольчатой нерпы, жир из печени командорского кальмара) (рис. 1).

Рис. 1. Способность растительных масел и жиров морских организмов различного состава реэкстрагировать каротиноиды из этанольного раствора, при концентрации последних 0,04 мг/мл:

1 — подсолнечное, 2 – льняное, 3 – рапсовое, 4 – оливковое, 5 — жир из печени сельдевой акулы, 6 — рыбный жир, 7 — жир из подкожного сала нерпы кольчатой, 8 — жир из печени командорского кальмара. Соотношение этанольный экстракт : реэкстрагент – 5 : 1. Температура реэкстракции 38±2 °С По способности к реэкстракции каротиноидов наилучшие результаты показаны для подсолнечного и льняного масел, значительно меньше каротиноидов переходит в рапсовое и оливковое масла. Используя масла различного состава, можно получать варианты продуктов, различающиеся составом компонентов (прежде всего ПЖК) и биологической активностью, а также стоимостью. Морские жиры обладают более слабой способностью по сравнению с растительными маслами реэкстрагировать каротиноиды из этанольных растворов. Для создания новых продуктов, обеспечивающих стабилизацию рыбных жиров и синергетический эффект БАВ, в данном случае рекомендовано простое смешивание компонентов. При наиболее высоком содержании триглицеридов в подсолнечном масле (99%) и их самом низком содержании (40%) в жире из печени командорского кальмара зафиксированы максимальная (0,2 мг/мл) и минимальная (0,005 мг/мл) концентрации каротиноидов в экстрактах.

Исследование состава каротиноидов асцидии пурпурной. Для спектрофотометрического анализа каротиноиды из тканей и органов асцидии пурпурной выделяли по общепринятой методике (Schiedt, Liaaen-Jensen, 1995). Полученные экстракты имели окраску от желто-оранжевой до красной и типичный для каротиноидов трехпиковый спектр поглощения с четко выраженными главными максимумами 452–456 нм (рис. 2). Величина оптической плотности отражала концентрацию каротиноидов.

Учитывая сложный состав каротиноидов асцидии пурпурной и близкие значения Rf хроматографических зон при разделении методом ТСХ, нами был проведен качественный анализ пигментов туники обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ) с детектором на диодной матрице.

Рис. 2. Спектры поглощения гексановых экстрактов асцидии H. aurantium: 1 – гонады, 2 – пищеварительная железа, 3 – мантия, 4 – туника При подборе условий для разделения каротиноидов туники халоцинтии использовали элюенты метанол или ацетонитрил в градиенте концентрации. Однако, несмотря на большую элюирующую силу последнего (Энгельгардт, 1980), эффективность разделения смеси данных пигментов выше в водно-метанольной системе (рис. 3).

Рис. 3. Хроматограмма этанольного экстракта каротиноидов туники асцидии пурпурной (ChromSep (2x20 мм, 3 мкм), скорость элюирования 0,5 мл/мин, градиент – 0–20 мин 60–80 %, 20– мин 80–100 %, 30–45 100 %, температура колонки — 55 °С). Элюент метанол (А), ацетонитрил (Б).

Обозначенные пики соответствуют веществам, характеризующимся спектрами поглощения каротиноидов Были идентифицированы четыре превалирующих каротиноида туники асцидии пурпурной: астаксантин (3,3'-дигидрокси-,-каротин-4,4'-дион), аллоксантин (7,8,7',8'тетрадегидро-3,3'-дигидрокси-,-каротин),,-каротин-2,2'-дион и гидроксиэхиненон (4'гидрокси-,-каротин-4-он). Критериями идентификации и построения структурных формул каротиноидов служили значения их молекулярных масс, определенные с точностью до третьего знака, полученные масс-спектрометрией высокого разрешения и характеры электронных спектров поглощения (табл. 4, рис. 4).

Характеристики превалирующих каротиноидов туники асцидии пурпурной Рис. 4. Спектры электронного поглощения в видимой области в метаноле и структурные формулы идентифицированных каротиноидов туники асцидии H. aurantium Идентифицированные каротиноиды имеют в своем составе кислородсодержащие функциональные группы, которые определяют их высокую биологическую активность (Nishino, 1998; Ishikawa et al., 2008; Konishi et al., 2008; Hashimoto et al., 2009; Shen et al., 2009).

Критерий подлинности сырья и продуктов на его основе (выделение и характеристика галоцинтиаксантина). Для идентификации сырья и продуктов на его основе предложили использовать каротиноид галоцинтиаксантин (5,6-эпокси-3,3-дигидрокси-7,8дидегидро-5,6,7,8-тетрагидро-,-каротин-8-он) (рис. 5), который присутствует в значимых количествах только в асцидиях. Содержание его в сырье и экстрактах составляет около 6,5 % общего количества каротиноидов. Наличие галоцинтиаксантина в БАД и пищевых продуктах из асцидий свидетельствует об их подлинности. Особенность структуры этого каротиноида заключается в высоком содержании кислородсодержащих функциональных групп, что позволяет легко отделить его от остальных пигментов при разделении на прямой фазе ВЭЖХ.

Вещество, имеющее время удерживания 12,8-13,0 мин (рис. 5) и спектр поглощения в элюенте с максимумом 449 нм (рис. 6), представляет собой галоцинтиаксантин. В результате последующего анализа ВЭЖХ на обращенной фазе с масс-спектрометрическим детектированием в условиях химической ионизации положительными ионами было получено значение молекулярной массы этого каротиноида 598,854 а.е.м., что соответствует молекулярной массе галоцинтиаксантина.

Max= 449(nm) Рис. 6. Спектр поглощения в видимой области в элюенте (гексан-ацетон 7 : 3) и структурная формула галоцинтиаксантина Определение рациональных условий выделения каротиноидов из асцидии пурпурной. Обоснованы следующие рациональные условия и параметры ступенчатой этанольно-масляной экстракции каротиноидов: соотношение сырая туника : этанол (95 %) – 1 : 5;

температура экстракции – 20±2 °С; продолжительность экстракции – 24 ч; соотношение этанольный экстракт : масло : вода – 5 : 1 : 10; температура реэкстракции – 38±2 °С; продолжительность реэкстракции – 16 ч (рис. 7–12).

Рис. 7. Зависимость выхода каротиноидов Рис. 8. Зависимость выхода каротиноииз туники асцидии от массово-объемного соот- дов из туники асцидии от температуры эксношения туника : этанол тракции этанолом мг/100 г Рис. 9. Зависимость выхода каротиноидов Рис. 10. Влияние соотношения объемов из туники асцидии от продолжительности экс- этанольного экстракта и масла на концентритракции этанолом рование каротиноидов мг/мл Рис. 11 Зависимость реэкстракции каро- Рис. 12. Зависимость реэкстракции катиноидов маслом из этанольного раствора от тем- ротиноидов маслом из этанольного раствора от Результаты проведенных исследований были положены в основу технологии БАД к пище. На изготовление «Экстракта асцидии масляного. Биологически активной добавки к пище» разработана нормативно-техническая документация (ТИ № 36-317-07 к ТУ 9283-315Была исследована возможность использования сушеных тканей асцидии для получения каротиноидов вследствие ограниченного срока хранения мороженого сырья. Тунику и мантию асцидии сушили лиофильно при температуре конечного продукта 38±2 °С. Исходное содержание влаги в мантии составляло 85 %, в тунике – 80 %. После лиофилизации остаточная влажность в обоих случаях составляла 7,5 %. Установлено, что сушка тканей уменьшает экстракцию каротиноидов на 26 и 48 % соответственно для туники и мантии (рис. 13).

Рис. 13. Зависимость выхода каротиноидов при использовании тканей асцидии до и после сублимации. Массово-объемное соотношение ткань : этанол – 1 : 5. 1 – сырая туника, 1* — сублимированная туника, 2 – сырая мантия, 2* — сублимированная мантия.

Присутствующие в тунике асцидии каротиноиды находятся в ассоциации с белками и образуют стабильные комплексы. Известно, что органические и неорганические кислоты способствуют разрушению каротинопротеиновых комплексов (Ni et al., 2008). Эффективность их влияния объясняется кислотной силой и длиной углеродной цепи. В ряду кислот соляная – уксусная – молочная (CH3CH(OH)COOH) наиболее эффективное влияние оказывала последняя. Влияние на сырую и сушеную ткани было различным, в случае сублимированной туники использование молочной кислоты позволило увеличить выход каротиноидов в масляном экстракте на 15 % (табл. 5).

Влияние предварительной обработки сырья молочной кислотой сублимированная Разработка технологии БАД к пище «Экстракт асцидии масляный». Схема предлагаемого технологического процесса включает следующие стадии:

При использовании асцидии-сырца или мороженой неразделанной асцидии для получения туники и мантии обрезали подошву и ротовой сифон с продольным разрезом туловища, отгибали края туловища, удаляли внутренности, зачищали и промывали брюшную полость, отделяли тунику и мантию. К промытой и измельченной тунике добавляли 95 %-ный этиловый спирт в массово-объемном соотношение туника : этиловый спирт – 1 : 5 и выдерживали смесь в течение 24 ч при 20±2 °С. Этанольный экстракт, содержащий каротиноиды, отделяли от осадка фильтрованием, сливали в делительную воронку и добавляли растительное масло и дистиллированную воду, которая способствует расслоению образовавшейся при этом эмульсии на два отчетливых слоя. Смесь выдерживали в темном месте при постоянном перемешивании в течение 8 ч при 38±2 °С. В результате отстаивания наблюдали разделение фаз эмульсии и образование двух фракций – масляной и водно-этанольной. После отделения масляной фракции водно-этанольный слой направляли на регенерацию спирта. Выход конечного продукта составлял 1,0 ± 0,05 л на 1,0 кг сырья при концентрации каротиноидов в масляном экстракте 0,25±0,05 мг/мл из расчета содержания каротиноидов в исходной ткани 36,8±2,0 мг/100 г и выходе 82,5 %.

Одними из основных нормируемых параметров полученного продукта являются показатели: общее содержание каротиноидов и доля галоцинтиаксантина, наличие которого свидетельствует о подлинности продукта (табл. 6).

Физические и химические показатели БАД к пище «Экстракт асцидии масляный»

Доля галоцинтиаксантина от общего содержания каротиноидов, % 6,5 ± 0, При исследовании состава липидов в предлагаемом продукте было показано, что состав и содержание фосфолипидов, жирных кислот и других составляющих полностью соответствует компонентам используемого растительного масла, для контроля качества которого используют согласно СанПиН 2.3.2.1078-01 следующие показатели: содержание полихлорированных бифенилов, величины кислотного и перекисного чисел. При исследовании контролируемых показателей при хранении при температуре 8±2 °С свыше 12 мес наблюдали увеличение кислотного числа более допустимого, поэтому продолжительность хранения была ограничена этим сроком.

Предложения по использованию вторичного сырья, образующегося на различных этапах производства БАД к пище «Экстракт асцидии масляный». В процессе изготовления масляного экстракта на стадии разделения фракций отделяется водно-этанольный экстракт, который рекомендовано направлять на восстановление этанола, а водный остаток, содержащий свободные аминокислоты, – на получение пищевых или кормовых добавок.

На стадии фильтрования образуется осадок, составляющий до 20 % исходной ткани.

Проведено сравнительное исследование углеводных фрагментов и сульфат-ионов в проэкстрагированной этанолом тунике асцидии H. aurantium и сульфатированном полисахариде «туницине» из асцидии H. roretzi (табл. 7). Показано сходство в соотношении количества глюкозаминов и сульфат-ионов и различие в содержании галактозаминов. Наличие сульфатированного полисахарида в осадке после фильтрования позволяет рекомендовать использование этого вторичного ресурса для создания нового биопрепарата.

Содержание полисахаридных фрагментов в тунике асцидии H. aurantium * Данные из работы Anno et al. (1974).

Исследование биологической активности каротиноидов асцидии пурпурной. Для оценки биологического действия препаратов исследовали мембранотропную, антиоксидантную и иммуномодулирующую активности.

Для изучения способности каротиноидов асцидии встраиваться в фосфолипидный слой определяли температуру фазового перехода (Tmax) и энтальпию перехода чистого дипальмитоилфосфатидилхолина (ДПФХ) и комплекса ДПФХ-каротиноиды методом дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) (рис. 14).

ДПФХ – каротиноиды Рис. 14. ДСК-термограммы фазовых переходов гидратированного дипальмитоилфосфатидилхолина (ДПФХ), его смеси с 1,7 моль% каротиноидами туники H. aurantium (А) и растительным каротиноидом лютеином (Б) (Kostecka-Gugala et al., 2003). По оси ординат – теплопоглощение Добавление 1,7 моль% каротиноидов асцидии мало отражалось на Tmax, которая снижалась всего на 2 °С, но резко влияло на энтальпию фазового перехода, которая уменьшалась с 7,0 до 3,4 Дж/г. Одновременно с этим исчезал предпереход при 37 °С, который характерен для водной дисперсии ДПФХ. Добавление 5 моль% каротиноидов приводило к полному исчезновению калориметрического фазового перехода ДПФХ, в то время как лютеин (растительный каротиноид) оказывал подобный эффект при заметно больших концентрациях: при концентрации 5 моль% регистрировался отчетливый калориметрический переход ДПФХ (Kostecka-Gugala et al., 2003).

Функционирование иммунных клеток во многом зависит от межклеточных взаимодействий и мембраносвязанных рецепторов. Каротиноиды способны встраиваться и защищать мембраны клеток, сохраняя целостность иммунной клетки, уменьшая повреждения мембраны и ассоциированных рецепторов. Для оценки влияния каротиноидов асцидии на функциональную активность иммунных клеток исследовали фагоцитарную и бактерицидную активности нейтрофилов (по отношению к Staphylococcus aureus штамм 209) перитонеальной полости мышей, а также антиоксидантную активность (АОА) сыворотки крови мышей (табл.

8). При изучении эффектов были использованы дозировки, соответствующие адекватным суточным нормам и в 100 раз меньшие. Установлено выраженное иммуномодулирующее действие БАД к пище «Экстракт асцидии масляный». Данный препарат может быть рекомендован в качестве общеукрепляющего средства для снижения риска возникновения сердечно-сосудистых и воспалительных заболеваний.

Примечание. ОП – оптическая плотность; ФЧ – среднее число микроорганизмов, поглощенных одним фагоцитом; ФП – доля клеток, участвующих в фагоцитозе; АОА – антиокислительная активность крови; МДА – малоновый диальдегид.

Результаты токсикологической экспертизы показали, что образцы препаратов асцидии пурпурной не вызывали побочных реакций и гибели мышей. Препарат вводили внутригастарально в дозах, в 100 раз превышающих рекомендованные. Полученные данные позволили рекомендовать БАД «Экстракт асцидии масляный» для расширенных клинических испытаний.

В настоящее время промышленный выпуск БАД к пище «Экстракт асцидии масляный» осуществляется на экспериментальном участке ФГУП «ТИНРО-Центр» и ООО «Биополимеры». Определена экономическая эффективность производства. Выход конечного продукта (масляного экстракта) составляет 1,0 л из 1,0 кг сырья (туника), при концентрации каротиноидов в масляном экстракте 0,25±0,05 мг/мл. При выпуске продукции 100 л за 1 мес и рентабельности производства 30 % стоимость масляного экстракта составляет 982,29 руб.

за 1 л.

1. Научно обоснованы рекомендации по рациональному использованию органов и тканей асцидии пурпурной, технология БАД к пище на основе каротиноидов, обеспечивающая их концентрирование и сохранение биологической активности.

2. Среди наиболее распространенных видов асцидий, обитающих в российской зоне Японского моря, перспективной для использования в пищевой промышленности является асцидия пурпурная H. aurantium. Химический состав тканей (мантии, пищеварительной железы, гонад) характеризуется высоким содержанием воды (80–90 %), низким количеством азотистых соединений, включая белки (3,4–9,6 %) и свободные аминокислоты (0,1–3,3 %), малым содержанием липидов (0,2–0,6 %). Для внешней оболочки (туники) наиболее характерными соединениями являются каротиноиды и сульфатированные гексозамины.

3. Сравнительный анализ количественного содержания каротиноидов в различных органах асцидии H. aurantium показал, что концентрация каротиноидов уменьшается в ряду туника мантия пищеварительная железа гонады. В качестве их источника целесообразно использовать тунику (40 мг/100 г) и мантию (17 мг/ 100 г) 4. Каротиноиды H. aurantium представлены окисленными формами (ксантофиллами), состоящими из 8 основных компонентов, из которых 5 идентифицированы методами ВЭЖХ и масс-спектрометрией высокого разрешения: астаксантин, аллоксантин,,-каротин-2,2'дион, гидроксиэхиненон, галоцинтиаксантин. В качестве показателя подлинности сырья и продукции на основе асцидий может быть использован галоцинтиаксантин.

5. Обоснован выбор этанола в качестве экстрагента и растительного масла в качестве реэкстрагента для выделения и концентрирования каротиноидов с целью получения БАД к пище. Обоснованы рациональные режимы экстракции и реэкстракции каротиноидов: соотношение сырье-экстрагент 1 : 5, температура 20 °С, продолжительность экстракции 24 ч, соотношение масло-этанол – 1 : 5, температура 38 °С, продолжительность 8 ч.

6. Исследование экстракционной способности растительных масел различного происхождения показало, что наиболее высокий выход позволяет получить использование для реэкстракции подсолнечного и льняного масел. Установлено, что жиры морских животных обладают слабой способностью аккумулировать каротиноиды.

7. Мембраннотропная активность каротиноидов асцидии характеризуется снижением энтальпии фазового перехода ДПФХ с 7,0 Дж/г до 3,4 Дж/г и температуры фазового перехода на 2 °С, что свидетельствует о стабилизации мембран за счет уменьшения их текучести.

8. Каротиноиды H. aurantium проявляют значительный антиоксидантный эффект, а также обладают выраженным иммуномодулирующим действием, увеличивая бактерицидную и фагоцитарную активность нейтрофилов перитонеальной полости мышей 9. Технохимические решения производства БАД «Экстракт асцидии масляный» использованы при разработке нормативной документации: ТУ 9283-315-00472012-07, ТИ № 36-317-07 – и при внедрении препарата в промышленное производство. Новизна технических решений подтверждена патентом РФ № 2339387 «Способ получения биологически активной добавки из асцидии». Препарат внедрен в промышленное производство.

10. Результаты исследований безопасности и медико-биологической активности БАД «Экстракт асцидии масляный» явились научным обоснованием для использования препарата в качестве дополнительного источника каротиноидов (ксантофиллов), что подтверждено санитарно-эпидемиологическим заключением № 77.99.13.003.Т.002367 от 31.10.2007.

Основное содержание диссертации отражено в следующих публикациях:

Статьи, опубликованные в журналах, рекомендованных ВАК 1. Пивненко Т.Н., Моторя Е.С., Задорожный П.А., Запорожец Т.С. Новые природные каротиноиды из дальневосточной асцидии в качестве иммуностимуляторов и антиоксидантов // Аллергология и иммунология. 2007. Т. 8, № 3. С. 339.

2. Задорожный П.А., Моторя Е.С., Пивненко Т.Н., Дроздова Л.И. Технохимическая характеристика и перспективы применения дальневосточной асцидии Halocynthia aurantium // Хранение и переработка сельхозсырья. 2009. № 7. С. 34-37.

3. Моторя Е.С., Пивненко Т.Н., Гажа А.С. и др. Исследование иммуномодулирующей и мембранотропной активностей каротиноидов из туники асцидии Halocynthia aurantium // Тихоокеанский медицинский журнал. 2009. №3. С. 28-32.

4. Моторя Е.С., Пивненко Т.Н. Исследование условий экстракции каротиноидов из туники асцидии пурпурной с использованием органических кислот и жиров морских организмов // Изв. ТИНРО. 2009. Т. 158. С. 388–392.

5. Задорожный П.А., Эпштейн Л.М., Ковалев Н.Н., Пивненко Т.Н., Якуш Е.В., Белорукова А.А., Моторя Е.С. Способ получения биологически активной добавки из асцидии :

Патент России № 2339387. 2008. Бюл. № 33.

Материалы конференций 6. Моторя Е.С., Пивненко Т.Н., Задорожный П.А. Каротиноиды асцидии пурпурной.

Способы выделения и критерий идентификации // Материалы научной конференции, посвященной 70-летию С.М. Коновалова «Современное состояние водных биоресурсов». Владивосток : ТИНРО-Центр, 2008. С. 914–918.

Подписано в печать 11.11.2009 г. Формат 60х84/16. 1 уч.-изд. л.

Отпечатано в типографии издательского центра ФГУП «ТИНРО-Центр»





Похожие работы:

«ЗАРУБИН ЕВГЕНИЙ ПАВЛОВИЧ ПЕДАГОГИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ СОЦИАЛЬНО-ПРОФЕССИОНАЛЬНОЙ ОРИЕНТАЦИИ КУРСАНТОВ ВОЕННОГО ВУЗА 13.00.01 – общая педагогика, история педагогики и образования АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Кострома 2010 Работа выполнена на кафедре социальной педагогики ГОУ ВПО Костромской государственный университет имени Н.А.Некрасова Научный руководитель : доктор педагогических наук, профессор Басова Валентина Марковна...»

«Гуськова Ирина Алексеевна РАЗРАБОТКА И РАЗВИТИЕ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ РЕШЕНИЙ ПРОБЛЕМЫ ФОРМИРОВАНИЯ ОРГАНИЧЕСКИХ ОТЛОЖЕНИЙ В УСЛОВИЯХ ЭКСПЛУАТАЦИИ ТЕХНОГЕННО ИЗМЕНЁННЫХ ЗАЛЕЖЕЙ НЕФТИ Специальность 25.00.17 - Разработка и эксплуатация нефтяных и газовых месторождений АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук Бугульма 2011 Работа выполнена в Альметьевском государственном нефтяном институте Официальные оппоненты : Мусабиров Мунавир Хадеевич - доктор...»

«МЕЛЕШИНА АЛЕКСАНДРА ВИКТОРОВНА ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ МУЛЬТИПОТЕНТНЫХ МЕЗЕНХИМНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК С ОПУХОЛЯМИ МЕТОДАМИ ФЛУОРЕСЦЕНТНОГО ИМИДЖИНГА 04.01.12.-онкология (биологические наук и) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург, 2014 1 Работа выполнена на кафедре биомедицины Нижегородского государственного университета имени Н.И. Лобачевского Научный руководитель : доктор медицинских наук, Загайнова Елена...»

«ТИН МАУНГ ТВЕ Модифицированные материалы на основе полипропилена с улучшенной стойкостью к термоокислительной деструкции 05.17.06 – Технология и переработка полимеров и композитов 02.00.04 – Физическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук МОСКВА – 2007 Работа выполнена в РХТУ им. Д.И. Менделеева и ИБХФ РАН Научный руководитель : - кандидат химических наук, Горбунова Ирина Юрьевна - доктор химических наук Шибряева Людмила...»

«Семенычева Людмила Леонидовна КОНТРОЛИРУЕМЫЙ СИНТЕЗ ПОЛИМЕРОВ НА ОСНОВЕ ВИНИЛОВЫХ МОНОМЕРОВ В ПРИСУТСТВИИ ДОБАВОК, ОБРАЗУЮЩИХ СТАБИЛЬНЫЕ РАДИКАЛЫ НЕПОСРЕДСТВЕННО В ПОЛИМЕРИЗУЮЩЕЙСЯ МАССЕ 02.00.06 –высокомолекулярные соединения 02.00.03 –органическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук Нижний Новгород -2008 www.sp-department.ru Работа выполнена в Научно-исследовательском институте химии государственного образовательного учреждения...»

«ГЛАДИЙ ЕВГЕНИЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ ВТОРИЧНЫЕ ПРОДУКТЫ ПРОИЗВОДСТВА ИЗОПРЕНА В КАЧЕСТВЕ МОДИФИКАТОРОВ БИТУМНЫХ ЭМУЛЬСИЙ 02.00.13 – Нефтехимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Казань – 2009 Работа выполнена в ГОУ ВПО Казанский государственный технологический университет Научный руководитель : доктор технических наук, профессор Кемалов Алим Фейзрахманович Официальные оппоненты : доктор технических наук, профессор Зиятдинов Азат Шаймуллович...»

«НА ПРАВАХ РУКОПИСИ ТИТОВ ДЕНИС НИКОЛАЕВИЧ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ФОРМИРОВАНИЯ И МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ КАТАЛИЗАТОРА НИЗКОТЕМПЕРАТУРНОГО ОКИСЛЕНИЯ ОКСИДА УГЛЕРОДА(II) В СИСТЕМЕ PdCl2 - CuCl2/-Al2O3 специальность 02.00.04. – Физическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва 2010 Работа выполнена на кафедре Общей химической технологии Московской государственной академии тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова Научный руководитель: доктор...»

«Хисаметдинов Марат Ракипович ПОВЫШЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ВЫРАВНИВАНИЯ ПРОФИЛЯ ПРИЕМИСТОСТИ И ОГРАНИЧЕНИЯ ПРИТОКА ВОД НА ОСНОВЕ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ СВОЙСТВ ЭКЗОПОЛИСАХАРИДА КСАНТАНА Специальности: 25.00.17 – Разработка и эксплуатация нефтяных и газовых месторождений 03.00.23 – Биотехнология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Бугульма – 2009 Работа выполнена в Татарском научно-исследовательском и проектном институте нефти (ТатНИПИнефть) ОАО...»

«Заикина Анна Викторовна РАДИКАЛЬНАЯ ПОЛИМЕРИЗАЦИЯ МЕТИЛМЕТАКРИЛАТА В ПРИСУТСТВИИ СОЕДИНЕНИЯ, СОДЕРЖАЩЕГО ФЕРРОЦЕНИЛЬНУЮ И АМИННУЮ ГРУППЫ 02.00.06 – Высокомолекулярные соединения АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Уфа - 2006 www.sp-department.ru 2 Работа выполнена в Институте органической химии Уфимского научного центра Российской академии наук. Научный руководитель : доктор химических наук, профессор Пузин Ю.И. Официальные оппоненты...»

«ГОЛОВИНА Анастасия Владимировна ОЦЕНКА СОВРЕМЕННОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ СТОКА Р.БЕЛАЯ (РЕСПУБЛИКА БАШКОРТОСТАН) ПОД ВЛИЯНИЕМ ПРИРОДНЫХ И АНТРОПОГЕННЫХ ФАКТОРОВ Специальность 25.00.36 – геоэкология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата географических наук Казань - 2012 Работа выполнена на кафедре Безопасность производства и промышленная экология ФГБОУ ВПО Уфимского государственного авиационного технического университета (УГАТУ) доктор технических наук,...»

«НАУМОВ АЛЕКСАНДР ВИКТОРОВИЧ МЕЖМОЛЕКУЛЯРНЫЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ В МЕТАЛЛСОДЕРЖАЩИХ ПОЛИИЗОЦИАНАТАХ И ПОЛИУРЕТАНАХ 02.00.06–Высокомолекулярные соединения АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Казань-2009 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Казанский государственный технологический университет (ГОУ ВПО КГТУ) доктор химических наук, профессор Научный руководитель : Давлетбаева...»

«Строков Олег Витальевич CОЗДАНИЕ СТАЛЕАЛЮМИНИЕВЫХ КОМПОЗИЦИОННЫХ МАТЕРИАЛОВ ПОВЫШЕННОЙ ТЕРМОСТАБИЛЬНОСТИ НА ОСНОВЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ХАРАКТЕРА ПЛАСТИЧЕСКОЙ ДЕФОРМАЦИИ МЕТАЛЛА В ОКОЛОШОВНОЙ ЗОНЕ ПРИ СВАРКЕ ВЗРЫВОМ Специальность 05.02.10 Cварка, родственные процессы и технологии АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Волгоград – 2010 Работа выполнена на кафедре Оборудование и технология сварочного производства в Волгоградском государственном...»

«КАШЛЕВ Сергей Юрьевич БЫСТРООТВЕРЖДАЕМЫЕ ОЛИГОМЕРНЫЕ КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ ОЛИГОЭФИРУРЕТАНАКРИЛАТОВ Специальность химия высокомолекулярных 02.00.06 соединений Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук www.sp-department.ru Нижний Новгород нww планам НИР АН СССР по...»

«Татауров Кирилл Александрович Каталитическое облагораживание нефтяного сырья с помощью гидроксилапатита 05.17.07. Химия и технология топлив и специальных продуктов АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва - 2007 год 1 Работа выполнена в Российском химико-технологическом университете им. Д.И.Менделеева. Научный руководитель : - кандидат химических наук, Синицин Сергей Александрович Официальные оппоненты : - доктор технических наук,...»

«ГАФИУЛЛИНА ЛИЛИЯ ИЛЬДАРОВНА МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ДИЗАЙН, СИНТЕЗ И КОМПЛЕКСООБРАЗУЮЩИЕ СВОЙСТВА МАКРОЦИКЛИЧЕСКИХ РЕЦЕПТОРОВ НА ОСНОВЕ ФУНКЦИОНАЛИЗИРОВАННЫХ КАЛИКС[4]АРЕНОВ 02.00.03 - Органическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Казань – 2005 Работа выполнена на кафедре органической химии Химического института им. А.М.Бутлерова Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования “Казанский...»

«Горн Эдуард Петрович ИССЛЕДОВАНИЕ ТЕПЛОФИЗИЧЕСКИХ И УСАДОЧНЫХ ХАРАКТЕРИСТИК СПЛАВОВ И МАТЕРИАЛОВ ФОРМЫ ДЛЯ КОМПЬЮТЕРНОГО МОДЕЛИРОВАНИЯ ПРОЦЕССА ФОРМИРОВАНИЯ СТАЛЬНЫХ ОТЛИВОК Специальность: 05.16.04 – Литейное производство АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Санкт-Петербург – 2004 2 Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Санкт-Петербургский государственный политехнический...»

«ЗИГАНШИНА ЭЛЬЗА ФРАНГИЗОВНА ЗАКОНОМЕРНОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ МОЛЕКУЛЯРНОЙ СТРУКТУРЫ ПОЛИИЗОПРЕНА, ПОЛУЧЕННОГО МЕТОДОМ КАТИОННОЙ ПОЛИМЕРИЗАЦИИ 02.00.06 – Высокомолекулярные соединения АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Иваново – 2011 www.sp-department.ru Работа выполнена в Институте экологии Волжского бассейна Российской Академии наук (г. Тольятти) Научный руководитель : доктор химических наук Розенцвет Виктор Александрович Официальные...»

«ИВАНОВ Алексей Геннадьевич ЭЛЕМЕНТООРГАНИЧЕСКИЕ ПОЛУПРОВОДНИКОВЫЕ ПОЛИСАЛИЦИЛИДЕНАЗОМЕТИНЫ Специальность 02.00.06 высокомолекулярные соединения АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Санкт- Петербург 2010 www.sp-department.ru 2 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте высокомолекулярных соединений РАН. Научный руководитель : доктор химических наук Шаманин Валерий Владимирович Официальные оппоненты : доктор...»

«КОТОВА НИНА СЕРГЕЕВНА Получение алкил(С16-С18)фенолов на макропористых сульфокатионитах и синтез фенольных оснований Манниха – моющих присадок к бензинам Специальность 02.00.13- Нефтехимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Самара 2012 Работа выполнена на кафедре Органическая химия химико-технологического факультета ФГБОУ ВПО Самарский государственный технический университет и в ОАО Средневолжский научно-исследовательский институт по...»

«Урбанская Маргарита Викторовна ОБРАЗОВАТЕЛЬНАЯ СРЕДА КАК ФАКТОР ФОРМИРОВАНИЯ ШКОЛЬНОЙ ГОТОВНОСТИ РЕБЕНКА В УСЛОВИЯХ ПРЕДШКОЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ Специальность: 13.00.01 - общая педагогика, история педагогики и образования АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Санкт-Петербург 2010 Работа выполнена на кафедре психологии Санкт-Петербургской академии постдипломного педагогического образования Научный руководитель - доктор педагогических...»








 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.