WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

Прогностическое значение цитогенетических и молекулярных изменений в клетках первичной уротелиальной карциномы мочевого пузыря у пациентов до и после трансуретральной резекции

На правах рукописи

Малхасян Карен Альбертович

ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИХ И МОЛЕКУЛЯРНЫХ

ИЗМЕНЕНИЙ В КЛЕТКАХ ПЕРВИЧНОЙ

УРОТЕЛИАЛЬНОЙ КАРЦИНОМЫ МОЧЕВОГО

ПУЗЫРЯ У ПАЦИЕНТОВ ДО И ПОСЛЕ

ТРАНСУРЕТРАЛЬНОЙ РЕЗЕКЦИИ

14.01.12 - онкология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 2012

Работа выполнена в Приволжском филиале Федерального государственного бюджетного учреждения «Российский онкологический научный центр имени Н.Н.

Блохина» Российской Академии Медицинских Наук.

(директор – д.м.н., профессор Хасанов Рустем Шамильевич)

Научный руководитель:

Доктор медицинских наук, профессор Хасанов Рустем Шамильевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор, Пожарисский Казимир Марианович заведующий лабораторией иммуногистохимии ФГУ "Российский научный центр радиологии и хирургических технологий" МЗ и СР РФ доктор медицинских наук, профессор, Фигурин Константин Михайлович ведущий научный сотрудник урологического отделения ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» РАМН

Ведущая организация:

ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» МЗ и СР РФ

Защита диссертации состоится « » 2012 г. в _ часов на заседании диссертационного совета Д.001.017.01 при ФБГУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» РАМН (115478, г. Москва, Каширское шоссе, 24).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФБГУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» РАМН (115478, г. Москва, Каширское шоссе, 24).

Автореферат разослан 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета д.м.н., профессор Шишкин Юрий Владимирович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДИССЕРТАЦИИ

Актуальность работы Рак мочевого пузыря в структуре урологической онкопатологии составляет треть от всех случаев (Stenzl A., Babjuk M., 2012). Заболеваемость раком мочевого пузыря неуклонно растет, в среднем на 1,5% за 1 год. В 2010 году в России было зарегистрированно более 13 тыс. новых случаев рака мочевого пузыря (Чиссов В.И., Старинский В.В., Петрова Г.В., 2012).

Более 90% всех опухолей мочевого пузыря в мире составляет переходноклеточный, или уротелиальный рак (Fleshner NE, Herr HW, Stewart AK et al., 1996). В 75–80% вновь выявленных случаев рака мочевого пузыря диагностируется поверхностный (немышечно-инвазивный) рак (Матвеев Б.П., Кудашев Б.В., Бухаркин Б.В. и др., 2000). Казалось бы, это должно давать широкие возможности для органосохраняющего эффективного лечения. Но рак мочевого пузыря склонен к рецидивированию и вариабелен по степени злокачественности. Несмотря на то, что большинство диагностированных урокарцином являются немышечно-инвазивными, до 70% из них рецидивируют после лечения (Проничев В.В., 2002; Durek C., Wagner S., Zeylemaker B. et al., 2004). От 2% (Ta G1-2) до 15% (Ta G3) поверхностных опухолей прогрессируют и имеют достаточно скромный прогноз выживаемости, несмотря на остающуюся в запасе у уролога «спасительную» цистэктомию (Chin J.L., 2010).

Основой для прогнозирования течения заболевания уже много десятилетий является морфологическое заключение патолога. Два критических по важности параметра подобного заключения – это стадия (stage) и степень дифференцировки (grade) опухоли. Однако признанным также является утверждение, что заключение патолога не может быть полностью объективным (Gonul I.I, Poyraz A., Unsal C. et al., 2007). К тому же стадия и степень дифференцировки опухоли не являются исчерпывающей информацией, о чем говорят лишь относительные успехи в попытках построить предсказательную модель только по этим признакам (Fernandez-Gomez J, Madero R, Solsona E, et al., 2011).

В настоящий момент внимание исследователей обращено к дополнительным методам исследования генетических и фенотипических признаков опухоли. В ранних исследованиях (Pycha A, Mian C, Haitel A. et al., 1997; Zellweger T, Benz G, Cathomas G. et al., 2006), посвященых FISH диагностике урокарциномы, уже указывалось на возможную предсказательную значимость этого теста в отношении характера течения заболевания. Однако по настоящий момент нет окончательного согласия о значении положительного результата FISH теста в послеоперационном наблюдении за пациентами и о роли этого метода в диагностике урокарциномы (Pycha A., 2007). Также не изученным остается влияние отдельных хромосомных нарушений на морфологическую характеристику и риск рецидивирования опухоли.

Для фенотипирования же опухоли на настоящий момент наиболее часто используют иммуногистохимическое исследование (ИГХ). Однако в изученных нами литературных источниках мы не встретили попыток комплексного изучения независимого влияния различных маркеров на риск рецидивирования у самой многочисленной группы пациентов – пациентов после органосохраняющего лечения с помощью трансуретральной резекции (ТУР).

Цель работы: установление прогностической значимости дополнительных цитогенетических, генетических и молекулярных маркеров у пациентов с урокарциномой мочевого пузыря, перенесших органосохраняющее лечение с помощью ТУР.

Задачи исследования:

Оценить эффективность цитологической и морфологической диагностики как элементов традиционного плана предоперационного обследования и наблюдения после операции ТУР опухоли мочевого пузыря.

Оценить эффективность формализованного FISH теста с помощью набора UroVysion® на промывных водах от пациентов с различной стадией и степенью злокачественности опухоли. Выявить характер хромосомных аномалий (анеуплоидия по 3,7 и 17 хромосомам и локусу 9p21) в клетках урокарциномы мочевого пузыря до и после операции, а также в зависимости от морфологических свойств опухоли Оценить характер экспрессии широкого набора иммуногистохимических маркеров и амплификации гена c-ERB-B2 в клетках урокарциномы, его связь с традиционными клинико-морфологическими параметрами опухоли.

Установить независимое влияние генетических и молекулярных маркеров на безрецидивную выживаемость пациентов с урокарциномой мочевого пузыря.

Разработать предсказательную модель с объективными критериями на основании изученных генетических аномалий и молекулярных маркеров в отношении риска рецидивирования урокарциномы.

В работе получены новые данные об эффективности метода FISH диагностики рака мочевого пузыря. Впервые выявлен и статистически проверен критерий для FISH диагностики (более 40% опухолевых клеток с генетическими нарушениями), позволяющий предсказать клинико-морфологические параметры опухоли на дооперационном этапе.

Выявлена независимая предсказательная значимость гиперплоидии по 7 и хромосомам и потери 3 хромосомы и локуса 9р21 в опухолевых клетках в отношении риска рецидивирования урокарциномы мочевого пузыря после ТУР.

Впервые на одной группе пациентов проведен анализ экспрессии широкой панели онкомаркеров. Продемонстрирован характер связи гиперэкспрессии Her2/neu и амплификации гена c-ERB-B2, а также выявлена значимая ассоциация этих событий с увеличением частоты клеток аномальных по 17 хромосоме, а также с ростом среднего числа копий 17 хромосомы.

Впервые выявлена независимая предсказательная значимость экспрессии топоизомеразы-II-a, Ki-67 и цитокератина №20. На основании этих данных разработан и статистически проверен объективный числовой предсказательный индекс риска рецидивирования урокарциномы мочевого пузыря после ТУР.

Выявлены закономерности роста частоты и изменения характера генетических аномалий для различных клинических подгрупп пациентов. На основании полученных данных разработан и статистически проверен цитогенетический критерий (менее 40% генетически аномальных клеток), позволяющий с достоверностью более 90% исключить до операции инвазию опухоли в мышечный слой (стадия Т2а) и высокозлокачественный (grade G3) характер опухоли. Эти данные дают дополнительное основание для сохранения мочевого пузыря ряду пациентов с опухолью большого размера на широком основании при условии технической возможности для ТУР. Также результаты FISH исследования помогут более дифференцированно отказаться от «ранней повторной» ТУР и обосновать проведение интраоперационной внутрипузырной химиотерапии.

Показана важность использования гистологических срезов с тканевых мультиблоков, выполненных по технологии Tissue Microarray (TMA), при проведении исследования экспрессии ИГХ маркеров и CISH проб.

Полученные данные о характере экспрессии белка Her2/neu, амплификации гена с-ERB-B2 и изменения числа копий 17 хромосомы для урокарциномы мочевого пузыря дают представление о значимой роли и механизме реализации этого звена канцерогенеза для этой патологии. Данные по HER2 особенно важны в свете только начавшегося в ряде стран клинического исследования эффективности таргетной терапии рака мочевого пузыря препаратом трастузумаб.

Разработанный объективный числовой индекс основан на ИГХ исследовании трех маркеров и обладает независимой значимой предсказательной силой в прогнозировании рецидивирования урокарциномы мочевого пузыря после ТУР. С помощью данного индекса можно обоснованно индивидуализировать схему послеоперационного наблюдения за пациентами, отказавшись от проведения первой контрольной цистоскопии на сроке 3 месяца для пациентов со значением индекса 11 баллов и менее. Также представляется оправданным проведение адъювантной внутрипузырной иммунотерапии пациентам со значением индекса более 11 баллов.

дифференцировки опухоли, а также о рецидивирующем потенциале урокарциномы мочевого пузыря. Это достижимо только с учетом и использованием дополнительных параметров теста (числа аномальных клеток и количества копий отдельных хромосом).

Результаты совместного использования ИГХ исследования материала опухоли на маркеры Ki-67, топоизомераза-II-a и цитокератин № достоверно предсказывают поведение опухоли после трансуретральной резекции в отношении развития рецидива. Это обосновывает уменьшение количества контрольных цистоскопий для отдельной группы пациентов в послеоперационном наблюдении.

Результаты исследований были представлены в докладах на:

1. IV Конгрессе Российского общества онкоурологов (Москва, Россия, 2009);

«Патологоанатомическая служба XXI века» (Санкт-Петербург, Россия, 3. Всероссийской научной конференции «Медико-генетические проблемы онкологических заболеваний» (Стерлитамак, Россия, 2010);

«Петровские Чтения – 2011» (Санкт-Петербург, Россия, 2011);

5. 23-м Европейском Конгрессе по патологии ESP (Helsinki, Finland, 2011);

6. IX Всероссийском съезде клинических цитологов (Казань, Россия, 2011).

Материалы диссертации отражены в 8 опубликованных работах, в том числе в 1 за рубежом.

Автор участвовал во всех этапах диагностики и лечения большинства пациентов из групп 2 и 3. Автором лично выполнены сбор, статистическая обработка и анализ полученных результатов, изучена выживаемость в зависимости от изученных клинико-морфологических и молекулярногенетических факторов, предложены практические рекомендации по тактике диагностики и лечения. Автору принадлежит наибольший вклад среди соавторов в написании опубликованных научных работ.

Соответствие диссертации паспорту специальности Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.01. исследования соответствуют областям данной специальности, пунктам 2 и паспорта научной специальности.

Диссертация изложена на 165 страницах машинописи и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, главы результатов собственного исследования, обсуждения полученных данных и выводов. Текст иллюстрирован 23 таблицами, 28 рисунками. Список литературы содержит наименований, из которых 19 отечественных и 233 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Республиканского клинического онкологического диспансера Министерства здравоохранения Республики Татарстан (РКОД МЗ РТ), г. Казань. Все пациенты разделены по методам исследования на 3 группы:

1-я группа – 225 пациентов с первичным уротелиальным раком мочевого пузыря, прошедших лечение в РКОД МЗ РТ за период с 2003 по 2007 год. В этой группе проведен ретроспективный анализ результатов трансуретральной резекции (ТУР) опухоли мочевого пузыря, гистологического исследования операционного материала и результатов дооперационного цитологического исследования мочи.

Также в этой группе пациентов была оценена частота рецидивирования заболевания после ТУР.

2-я группа – 51 пациент с первичным раком мочевого пузыря, перенесший операцию ТУР мочевого пузыря в РКОД за период с 2009 по 2010 год. В случаях была проведена внутрипузырная химиотерапия путем однократного введения в просвет мочевого пузыря раствора доксорубицина не позднее чем через 6 часов после операции. В 33 случаях операция ТУР применялась как единственный специальный метод лечения. Ни в одном случае адьювантной терапии не проводилось. Эта группа вошла в состав проспективного когортного исследования.

Пациентам из этой группы в дополнение к стандартному предоперационному протоколу диагностических анализов было проведено исследование промывных вод из мочевого пузыря методом флюоресцентной гибридизации in situ (FISH) с использованием диагностического набора UroVysion® (Abbott Laboratories, США) (данный этап работы выполнен в лаборатории иммуногистохимической диагностики РКОД МЗ РТ при неоценимой помощи заведующего, профессора Петрова С.В.). Двадцати шести пациентам из состава этой группы также было проведено повторное FISH исследование по той же методике, с забором промывных вод при контрольной цистоскопии в период времени 1-3 месяца после операции ТУР.

3-я группа – 103 пациента с первичным раком мочевого пузыря, перенесших операцию ТУР в РКОД МЗ РТ за период с 2007 по 2010 год. В состав этой группы вошл и 51 пациент из 2-й группы. Из операционного материала всех пациентов были составлены 3 парафиновых тканевых мультиблока по технологии Tissue Microarray (TMA). На срезах с этих мультиблоков проведено ИГХ исследование на молекулы p53, p63, Е-кадгерина, Бета-катенина, топоизомеразыII-а, CD44v6, цитокератина №20, Ki-67 и рецептора Her2/neu. В каждом случае из этой группы также было проведено методом хромогенной гибридизации in situ (CISH) исследование амплификации гена с-ERB-B2, локализованного на хромосоме и кодирующего рецептор Her2/neu (данный этап работы выполнен в лаборатории иммуногистохимической диагностики РКОД МЗ РТ при неоценимой помощи заведующего, профессора Петрова С.В.).

Рутинное гистологическое исследование проводилось во всех случаях сертифицированными патоморфологами РКОД МЗ РТ. В каждом случае выставлялось заключение, содержащее информацию о стадии опухоли (Stage) (классификация TNM, 7-я редакция, 2009) и степени дифференцировки (Grade) (классификация ВОЗ, 1973).

У 51 пациента (2 группа) непосредственно перед операцией ТУР были взяты образцы промывных вод из мочевого пузыря. Из полученного материала выполнялись мазки с круглой областью отложения клеток 6 мм в диаметре с помощью центрифуги CytoSpin 4 (Thermo Fisher Scientific Inc., CША).

Полученные мазки далее подвергались специальной обработке, гибридизации с ДНК пробой и окрашиванию согласно протоколу производителя с некоторыми изменениями.

комплементарные центромерным участкам 3 хромосомы (красная метка SpectrumRed), 7 хромосомы (зеленая метка SpectrumGreen) и 17 хромосомы (синяя метка SpectrumAqua), а также зонд к локусу 9p21 на 9 хромосоме (желтая метка SpectrumGold). Флюоресцентное микроскопирование выполнялось в тот же день по приготовлении мазка в затемненном помещении с помощью микроскопа Leica DM 5000B с предустановленными светофильтрами DAPI single, Aqua single, Yellow single и Red/Green dual. Исследование каждого препарата выполнялось до обнаружения 100 клеток уротелия с визуально аномальным ядром, которое характеризовалось увеличенными размерами, неровными контурами и неравномерной окраской DAPI. Для каждого случая фиксировалось количество сигналов по каждой метке в аномальном ядре. В каждом случае оценивались несколько дополнительных параметров: общее число опухолевых клеток с генетическими аномалиями, число клеток с аномалией по каждой метке в отдельности и среднее число сигналов от каждой метки. Выставление формального заключения о наличии рака проводилось по критериям от производителя набора. А именно положительным результатом считалось обнаружение 4-х и более клеток с гиперплоидией по 2 и более центромерным меткам, или 12 и более клеток с гомозиготной делецией локуса 9p21.

Выполнение гистологических мультиблоков по технологии Tissue Всего было изготовлено 3 мультиблока TMA из гистологического материала от 103 пациентов с первичным раком мочевого пузыря, перенесших операцию ТУР в РКОД МЗ РТ с 2008 по 2010 год. Для каждого опухолевого образца были выбраны как минимум 2 точки, ткань из которых была перемещена в мультиблок.

Для технического выполнения мультиблока был использован программноаппаратный комплекс TMA Master (3DHISTECH Ltd, Венгрия). Был выполнен забор образцов из донорских блоков (в виде столбиков ткани диаметром 1,6 мм) и имплантация их в 3 реципиентных мультиблока, рассверленных под 104 образца (по формуле 8x13).

Интерпретация результатов ИГХ и CISH исследования Все окрашенные слайды проходили автоматизированное сканирование на сканере для гистологических препаратов Mirax MIDI (Carl Zeiss MicroImaging GmbH, Германия). Полученные цифровые графические образы препаратов хранились на серверной станции Fujitsu Celsius R570-2. Для просмотра и анализа использовалась компьютерная программа Pannoramic Viewer 1.14.50 (3DHISTECH Ltd, Венгрия).

Для маркеров Ki-67 и топоизомераза-II-а результат записывался в виде числа позитивно окрашенных ядер на 100 опухолевых клеток (в процентах). Далее при статистической обработке полученные проценты были переведены в дихотомическую оценку с пороговым уровнем позитивного заключения в >10%.

Оценка реакции на маркер цитокератин №20 (CK20) проводилась с помощью общепринятых критериев (Desai S., Lim S.D., Jimenez R.E. et al., 2000).

Для последующей статистической обработки случаи с окрашиванием клеток, отличных от зонтичных, считались положительной реакцией, а остальные отрицательной.

Реакция на Е-кадгерин, CD44V6 и Бета-катенин расценивалась как негативная (- нет реакции, ± отдельные позитивные клетки c секторальной мембранной реакцией), гетерогенная (до 25% с циркулярной мембранной реакцией или любое количество клеток с частичной, секторальной мембранной реакцией), позитивная реакция (более 25% клеток с циркулярной мембранной реакцией, визуально не отличающейся от реакции в нормальном уротелии). При дальнейшем анализе и статистической обработки результатов случаи с гетерогенной реакцией и негативной реакцией были объединены в одну подгруппу со «сниженной» экспрессей указанных маркеров.

При анализе реакции на белки p53 и p63 нами использовались критерии с дихотомической системой оценки. Позитивной реакцией считалась в случае интенсивного окрашивания ядер в более чем 25% клеток.

ИГХ оценка экспрессии HER2 осуществлялась согласно критериям DAKO HercepTest™ (Завалишина Л.Э., Андреева Ю.Ю., Рязанцева А.А., Франк Г.А., амплифицированным, если среднее число меток превышало 6 при их подсчете в 60 ядрах опухолевых клеток.

Статистическая обработка полученных данных Статистическая обработка проводилась на персональном компьютере с помощью пакета программ SPSS Statistics 17.0. При сравнении величин использовались статистические критерии Кси-Квадрат и Фишера, тесты МаннаУитни, Краскела-Уоллиса, Спирмена. Сравнение безрецидивной выживаемости проводилось с помощью кривых Каплана-Майера с тестом Log-Rank.

Многофакторный анализ проводился с помощью регрессионного анализа по Коксу. Во всех сравнениях пограничный уровень значимости установлен при p=0,05. Графический анализ и представление данных проводились с помощью программы Microsoft Office Excel 2003 и SPSS Statistics 17.0.

В процессе исследования проанализированы 328 случаев урокарциномы мочевого пузыря у пациентов, оперированных в РКОД МЗ РТ в 2003 – 2010 годах.

Чувствительность цитологического исследования в 1-й группе пациентов оказалась крайне низкой. Результат в 17,8% оказался значительно ниже, чем в среднем по литературным данным (30-50%) (Van Rhijn B., van der Poel H., van der Kwast T., 2005; Mishriki S., Molokwu C., Sweeney C. et al., 2010). Имея результат чувствительности в 38%, эти авторы делают выводы о возможности отказа от этого метода в диагностике первичного рака мочевого пузыря (Mishriki S., Molokwu C., Sweeney C. et al., 2010).

Анализ рецидивирования заболевания в 1-й группе пациентов не показал однозначной связи между стадией и степенью анаплазии опухоли и частотой рецидивирования. В среднем рецидив развился в 24,5% пациентов, со средним сроком до рецидива 13,83 месяца. В литературе значимым фактором более плохого прогноза рецидивирования являлся минимально-инвазивный рак Т (Sylvester R.J., van der Meijden A.P., Oosterlinck W. et al., 2006). По нашим результатам, ни стадия Т1, ни даже Т2, не ассоциированы с более высокой частотой рецидивирования.

В одной из недавних публикаций (Fernandez-Gomez J., Madero R., Solsona E. et al., 2011) используемая шкала оценки риска для немышечно-инвазивного рака мочевого пузыря (EORTC risk tables) (Sylvester R.J., van der Meijden A.P., Oosterlinck W. et al., 2006) не прошла проверку. Авторы признали, что, по крайней мере, для некоторых пациентов данная шкала завышает предполагаемый риск рецидивирования. Наши наблюдения также ставят под сомнение возможность безоговорочного глобального применения этой шкалы и подтверждают актуальность поиска других признаков урокарциномы, обладающих предсказательной значимостью для рецидивирования в реальных условиях.

Результаты цитогенетического исследования (FISH метод) и их В нашем исследовании FISH диагностика продемонстрировала высокую чувствительность (88%). Выявлено однозначное увеличение чувствительности с ростом стадии и степени анаплазии опухоли. Значимые различия выявлены при изменении степени дифференцировки опухоли. В целом формализованная оценка метода UroVysion® показала высокую чувствительность диагностики рака мочевого пузыря даже при самых начальных формах Ta и G1 (минимум 70%).

При анализе дополнительных параметров FISH диагностики в настоящей работе выявлен рост частоты (среднего число клеток с мутациями) и глубины (среднего числа копий хромосом 3, 7 и 17 и локуса 9р21) генетических аномалий с увеличением стадии и степени дифференцировки опухоли. Обращает на себя внимание ступенчатое увеличение частоты аномалий при переходе от поверхностного рака Ta, T1 к мышечно-инвазивному раку Т2, а также от степени анаплазии G1, G2 к степени G3.

Отмеченные в результатах различия в характере изменений локуса 9р21 могут свидетельствовать о переходе мутаций этого локуса от преимущественной потери (для клеток опухолей Та, Т1 и G1, G2) к увеличению числа копий этого локуса (в опухолях T2 и G3). Следовательно, наличие клеток с потерей одного или двух локусов 9р21 может отражать неинвазивный характер опухоли с низкой степенью анаплазии клеток. Наши данные соотносятся с результатами других исследователей (Richter J., Jiang F., Gorog J.P. et al., 1997), где выявлены статистически значимые различия. Этот факт, в свою очередь, позволяет предположить низкий риск прогрессирования у этих пациентов. В других исследованиях (Бабаян А.Ю., Башкатов С.В., Карякин О.Б. и др., 2009; Degtyar P., Neulander E., Zirkin H. et al., 2004) было показано, что потеря локуса 9р коррелирует с развитием ранних рецидивов в течение первого года наблюдения. В локусе 9р21 кодируются несколько белков, однако основную роль в механизмах канцерогенеза в уротелии отводят белку P16, являющемуся белком супрессором и одним из регуляторов контрольной точки G1 клеточного цикла.

В ходе обработки полученных результатов нами предпринята попытка выяснить предсказательную значимость определения числа клеток с абберациями хотя бы по одной метке по отношению к стадии и степени анаплазии опухоли. А именно за неблагоприятный прогноз были выбраны наличие инвазии опухоли в мышечный слой (стадия T2) и наличие опухоли G3. Согласно результатам вычислений порог в 40% мутированных клеток обладает наибольшей отрицательной предсказательной значимостью по обоим критериям. На практике это позволит с вероятностью более 90% исключить инвазию в мышечный слой и низкодифференцированный характер опухоли у пациентов, имеющих менее 40% клеток с мутациями хотя бы по одной метке по результатам FISH диагностики.

Подобный подход к оценке результатов FISH теста был описан ранее (Севанькаев А.В., Лушников Е.Ф., Карякин О.Б. и др., 2008), где все пациенты с наличием более 25% клеток с полисомией по 3, 7 и 17 хромосомам относились к опухолям высокой степени злокачественности (классификация ВОЗ 2004). Однако авторами не проведена проверка статистической значимости их наблюдения.

Забор промывных вод возможен при первой цистоскопии до операции.

Поэтому крайне заманчивой является возможность выявить пациентов с опухолями высокого риска рецидивирования и прогрессирования уже на этом этапе. Это поможет более дифференцированно и обоснованно провести интраоперационную внутрипузырную химиотерапию, «раннюю повторную» ТУР и адьювантную внутрипузырную терапию.

Части пациентам из FISH группы было проведено цитогенетическое исследование на этапе послеоперационного наблюдения (26 пациентам из 51).

Рецидив в этой группе был зафиксирован в 14/51 случаях (27,5%), в то время как послеоперационный FISH тест дал положительный результат в 16/26 случаев (61,5%). Этому находится как минимум два объяснения. Во-первых, нам кажется возможным наличие у некоторых пациентов резидуальных мелких опухолей, которые могут оставаться клинически незначимыми долгое время после операции, либо вообще со временем элиминироваться собственной иммунной системой. Вовторых, воспалительные явления и процессы интенсивной регенерации и активной генетическими отклонениями от нормы.

В целом согласно результатам нашего исследования отрицательный результат положительный результат не ассоциирован с бльшим риском развития рецидива после операции.

При прямом сравнении параметров FISH исследования промывных вод, взятых до и после операции, нами выявлено значимое уменьшение числа клеток с абберацией по каждой метке в отдельности и всем меткам вместе. Также значимым оказалось увеличение среднего числа сигналов от локуса 9p21 после операции, в то время как все остальные метки (центромерные) показали незначимое уменьшение среднего числа сигналов в одной клетке. Это наблюдение также может указывать на различную природу клеток с мутациями до и после удаления опухоли.

выживаемость. Частота рецидивирования составила 27,5% (14/51 случаев). Это соотносится с результатами по 1-й группе. При сравнении безрецидивной достоверных различий не выявлено. Однако общий вид кривых указывает на отрицательным результатом FISH теста перед операцией и с количеством мутантных клеток в промывных водах 40%. Причем в последнем случае уровень значимости приблизился к порогу устойчивой тенденции (p=0,132).

Результаты молекулярно-генетического исследования (методы ИГХ и В целом в 3-й группе пациентов рецидив был зафиксирован в 34 случаях из 103 (33%). Сводные данные по безрецидивной выживаемости пациентов этой группы в зависимости от результата молекулярного исследования представлены в таблице 1.

Результаты исследования молекулярных маркеров описаны согласно локализации типичной реакции и роли маркера в канцерогенезе. Ядерная экспрессия белков Ki-67, топоизомераза-II-a и мутантного белка р53 в целом увеличивалась с ростом стадии и степени злокачественности опухоли. Для всех этих маркеров оказалось характерным значимое увеличение экспрессии при переходе от неинвазивных опухолей Та к минимально инвазивным Т1. Для белков Ki-67 и топоизомераза-II-a проявилась четкая тенденция к увеличению экспрессии с ростом стадии и степени анаплазии со значимыми отличиями стадии Т2а от «поверхностных» опухолей Та и Т1. Несмотря на схожие результаты ранее проведенных исследований (Casetta G., Gontero P., Russo R. et al., 1997; Gontero Р., Casetta G., Zitella A. et al., 2000), при их обобщении в ходе крупных мета-анализов пока нет убедительных доказательств предсказательной значимости этих маркеров (Malats N., Bustos А., Nascimento С.М. et al., 2005). Объективными причинами этому могут служить различия в критериях оценки иммуногистохимической реакции: от 10 до 50% окрашенных ядер для р53, от 10 до 50% клеток с позитивной ядерной реакции для Ki-67.

Сравнение среднего времени безрецидивного выживания по подгруппам в зависимости от результатов ИГХ и CISH исследования. Значимость приведена для Маркер «-» результат, «+» результат, Значимость,



Похожие работы:

«Татауров Кирилл Александрович Каталитическое облагораживание нефтяного сырья с помощью гидроксилапатита 05.17.07. Химия и технология топлив и специальных продуктов АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва - 2007 год 1 Работа выполнена в Российском химико-технологическом университете им. Д.И.Менделеева. Научный руководитель : - кандидат химических наук, Синицин Сергей Александрович Официальные оппоненты : - доктор технических наук,...»

«Урбанская Маргарита Викторовна ОБРАЗОВАТЕЛЬНАЯ СРЕДА КАК ФАКТОР ФОРМИРОВАНИЯ ШКОЛЬНОЙ ГОТОВНОСТИ РЕБЕНКА В УСЛОВИЯХ ПРЕДШКОЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ Специальность: 13.00.01 - общая педагогика, история педагогики и образования АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Санкт-Петербург 2010 Работа выполнена на кафедре психологии Санкт-Петербургской академии постдипломного педагогического образования Научный руководитель - доктор педагогических...»

«Исаева Наталья Сергеевна Управление потенциалом конкурентоспособности предприятий химической отрасли на основе аддитивного подхода СПЕЦИАЛЬНОСТЬ 08.00.05 - ЭКОНОМИКА И УПРАВЛЕНИЕ НАРОДНЫМ ХОЗЯЙСТВОМ (экономика, организация и управление предприятием, отраслями, комплексами – промышленность) Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата экономических наук Казань –2007 Работа выполнена в Казанском государственном финансово-экономическом институте Научный...»

«ЯНТЕМИРОВА АЛЕНА АРТЕМОВНА СИНТЕЗ И КОМПЛЕКСООБРАЗУЮЩИЕ СВОЙСТВА ЗАМЕЩЕННЫХ ПО НИЖНЕМУ ОБОДУ п-трет-БУТИЛТИАКАЛИКС[4]АРЕНОВ, СОДЕРЖАЩИХ АМИДНЫЕ, СЛОЖНОЭФИРНЫЕ И ГИДРОКСИЛЬНЫЕ ГРУППЫ 02.00.03 - Органическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Казань – 2011 Работа выполнена на кафедре органической химии Химического института им. А.М.Бутлерова федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего...»

«КОТОВА НИНА СЕРГЕЕВНА Получение алкил(С16-С18)фенолов на макропористых сульфокатионитах и синтез фенольных оснований Манниха – моющих присадок к бензинам Специальность 02.00.13- Нефтехимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Самара 2012 Работа выполнена на кафедре Органическая химия химико-технологического факультета ФГБОУ ВПО Самарский государственный технический университет и в ОАО Средневолжский научно-исследовательский институт по...»

«ЗИГАНШИНА ЭЛЬЗА ФРАНГИЗОВНА ЗАКОНОМЕРНОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ МОЛЕКУЛЯРНОЙ СТРУКТУРЫ ПОЛИИЗОПРЕНА, ПОЛУЧЕННОГО МЕТОДОМ КАТИОННОЙ ПОЛИМЕРИЗАЦИИ 02.00.06 – Высокомолекулярные соединения АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Иваново – 2011 www.sp-department.ru Работа выполнена в Институте экологии Волжского бассейна Российской Академии наук (г. Тольятти) Научный руководитель : доктор химических наук Розенцвет Виктор Александрович Официальные...»

«ВАСЮТИН Олег Алексеевич ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ УСЛОВИЙ СИНТЕЗА НА АДСОРБЦИОННЫЕ СВОЙСТВА ФЕРРОШПИНЕЛИ И ПОВЕРХНОСТНЫХ СВОЙСТВ ФЕРРОГРАНАТА ИТТРИЯ МЕТОДАМИ ПОТЕНЦИОМЕТРИИ И СМАЧИВАНИЯ Специальность 02.00.11 – коллоидная химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Санкт-Петербург 2012 www.sp-department.ru Работа выполнена на кафедре коллоидной химии химического факультета Санкт-Петербургского...»

«Половкова Марина Александровна Гетероядерные комплексы редкоземельных элементов с фталоцианинами 02.00.01 – Неорганическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук...»

«Бредов Николай Сергеевич Новые функциональные олигосилсесквиоксаны и олигофосфазены для модификации полимерных композиций стоматологического назначения 02.00.06 – Высокомолекулярные соединения 05.17.06 – Технология и переработка полимеров и композитов АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва 2011 www.sp-department.ru Работа выполнена в Российском химико-технологическом университете имени Д.И. Менделеева Научные руководители: доктор...»

«Савченков Антон Владимирович СИНТЕЗ И СТРОЕНИЕ НОВЫХ КРОТОНАТ-, БУТИРАТИ ВАЛЕРАТСОДЕРЖАЩИХ КОМПЛЕКСОВ УРАНИЛА 02.00.01 – неорганическая химия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Нижний Новгород – 2014 Работа выполнена в ФГБОУ ВПО Самарский государственный университет Научный руководитель : Сережкин Виктор Николаевич доктор химических наук, профессор Официальные оппоненты : Григорьев Михаил Семенович доктор химических наук, заведующий...»

«Христолюбова Татьяна Алексеевна ИЗУЧЕНИЕ КИНЕТИЧЕСКИХ ЗАКОНОМЕРНОСТЕЙ И МЕХАНИЗМА ФОРМИРОВАНИЯ ТРИЦИКЛИЧЕСКИХ СИСТЕМ НА ОСНОВЕ РЕАКЦИИ НУКЛЕОФИЛЬНОГО ВНУТРИМОЛЕКУЛЯРНОГО ЗАМЕЩЕНИЯ НИТРОГРУППЫ Специальность 02.00.03 – Органическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва 2009 Работа выполнена в Научно-образовательном центре “Инновационные исследования” Государственного образовательного учреждения высшего профессионального...»

«ШИРЯКИНА ЮЛИЯ МИХАЙЛОВНА СИНТЕЗ ПОЛИСТИРОЛЬНЫХ МИКРОСФЕР, СОДЕРЖАЩИХ НА ПОВЕРХНОСТИ НАНОЧАСТИЦЫ ОКСИДА ЦИНКА Специальности: 02.00.06 высокомолекулярные соединения 02.00.11 коллоидная химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учной степени кандидата химических наук МОСКВА 2011 Работа выполнена в ФГБОУ ВПО Московском государственном университете тонких химических технологий имени М.В. Ломоносова на кафедре Химия и технология высокомолекулярных соединений им. С.С. Медведева....»

«Тимашова Елена Алексеевна Научные основы технологии сопряженного каталитического синтеза циклогексанкарбоновой кислоты гидрокарбоксилированием циклогексена Специальность 05.17.04 – Технология органических веществ Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва 2008 г. 1 Работа выполнена на кафедре Общей Химической Технологии государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Московская государственная...»

«Соловьев Михаил Михайлович ЛОКАЛЬНАЯ ДИНАМИКА ОЛИГОБУТ АДИЕНОВ РАЗЛИЧНОЙ МИКРОСТРУКТУРЫ И ПРОДУКТОВ ИХ МОДИФИКАЦИИ 02.00.06- Высокомолекулярные соединения АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Ярославль - 2009 www.sp-department.ru Работа выполнена на кафедре Тех~ология полимерных материалов Госу­ дарственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Ярославский государственный технический университет Научный...»

«Объявление о защите Новиков Роман Александрович Новые превращения донорно-акцепторных циклопропанов под действием кислот Льюиса: димеризация 2-арилциклопропан-1,1дикарбоксилатов и их реакции с пиразолинами 02.00.03 - органическая химия Химические наук и Диссертационный совет Д 002.222.01 Федеральное государственное учреждение науки Институт органической химии им. Н.Д. Зелинского Российской академии наук 119991, Москва, Ленинский проспект, 47 Тел.:(499) 137-13-79 E-mail: sci-secr@ioc.ac.ru Дата...»

«РОМАНОВА ЕКАТЕРИНА ИГОРЕВНА ЭЛЕКТРОДЫ, МОДИФИЦИРОВАННЫЕ КОМПОЗИТАМИ С НАНОСТРУКТУРИРОВАННЫМИ ЧАСТИЦАМИ МЕТАЛЛОВ, В ОРГАНИЧЕСКОМ ЭЛЕКТРОАНАЛИЗЕ 02.00.02 – аналитическая химия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Казань – 2012 2 Работа выполнена на кафедре аналитической химии Химического института им. А.М. Бутлерова Федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего профессионального образования Казанский...»

«УДК 373.1 Лёвкин Антон Николаевич Технология проектирования и применения компьютерных обучающих программ по химии для средней школы на основе имитационного моделирования Специальность 13.00.02 - Теория и методика обучения и воспитания (химия) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Санкт-Петербург - 2002 2 Диссертация выполнена на кафедре методики обучения химии Российского государственного педагогического университета им. А.И....»

«Ильина Марина Евгеньевна УПРАВЛЕНИЕ ОТХОДАМИ ПРОМЫШЛЕННЫХ ПРЕДПРИЯТИЙ РЕГИОНА С УЧЕТОМ МЕЖОТРАСЛЕВЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ В СИСТЕМЕ (на примере Владимирской области) Специальность 05.13.06. – Автоматизация и управление технологическими процессами и производствами (технические системы) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Москва, 2007 Работа выполнена на кафедре Экология ГОУ Владимирского государственного университета Научный руководитель :...»

«Котарева Ирина Алексеевна Нанесенные металлокомплексные катализаторы низкотемпературного окисления оксида углерода (II) в воздухе специальность 02.00.04. – Физическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва 2007 2 Работа выполнена на кафедре химии и технологии основного органического синтеза Московской государственной академии тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова Научный руководитель : доктор химических наук,...»

«Шакирова Юлия Андреевна АНАЛИЗ ПРОСТРАНСТВЕННОГО РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ЗАБОЛЕВАЕМОСТИ НАСЕЛЕНИЯ КАК КОМПЛЕКСНОГО ИНТЕГРАЛЬНОГО ПОКАЗАТЕЛЯ КАЧЕСТВА ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ (НА ПРИМЕРЕ РЕСПУБЛИКИ ТАТАРСТАН) Специальность 25.00.23. – Физическая география и биогеография, география почв и геохимия ландшафта АВТОРЕФЕРАТ Диссертации на соискание ученой степени кандидата географических наук Ярославль 2006 2 Работа выполнена в отделе гидрологии Института экологии природных систем Академии наук...»








 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.