WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

Морфометрико-стереологический анализ ультраструктуры митохондрий при окислительном стрессе

На правах рукописи

Пилипенко Даниил Игоревич

Морфометрико-стереологический анализ

ультраструктуры митохондрий

при окислительном стрессе

специальность 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Москва - 2010

Работа выполнена в НИИ физико-химической биологии им. А.Н.Белозерского, МГУ им. М.В.Ломоносова.

академик РАН, доктор биологических Научные руководители наук, профессор В.П. Скулачёв доктор биологических наук, профессор Л.Е. Бакеева доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты О.В. Макарова, зам. директора по научной работе ГУ НИИ морфологии человека РАМН доктор медицинских наук, профессор В.И. Капелько, руководитель лаборатории экспериментальной патологии сердца Института экспериментальной кардиологии Институт биологии развития им.

Ведущая организация:

Н.К.Кольцова РАН, г. Москва

Защита состоится “” 2011 г. в _ на заседании диссертационного совета Д 501.001.52 при Московском государственном университете им. М.В.Ломоносова по адресу: 119899, Москва, Ленинские Горы, д. 1, корп. 12, Биологический факультет МГУ, аудитория М-1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Биологического факультета МГУ им. М.В.Ломоносова

Автореферат разослан “” _ 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Е.Н.Калистратова кандидат биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В последние два десятилетия внимание многих исследователей направлено на изучение окислительного стресса. Показано, что окислительный стресс лежит в основе множества нейродегенеративных заболеваний, таких, как, например, атаксия Фридриха [Kaplan, 1999], болезнь Альцгеймера [Gtz et al., 1994] и болезнь Паркинсона [Di Monte et al., 1992].

Показано, что окислительный стресс сопровождает процессы поражения при инфаркте миокарда [Loeper et al., 1991] и мозга [Choi, 1993]. Продемонстрирована роль окислительного стресса при сахарном диабете [Matkovics et al., 1982; Green et al., 2004]. Обнаружено, что в основе ряда возрастных патологий также лежит окислительный стресс. Одной из таких патологий, считающихся причиной ухудшения и потери зрения людьми старшего возраста, является макулярная дистрофия сетчатки [Островский, 2005].

К настоящему времени существует множество неоспоримых доказательств того, что важнейшую роль в процессе старения играют внутримитохондриальные активные формы кислорода (АФК). Согласно одной из теорий старения (теория Дэнхена Хармана) накопление повреждений под действием окислительного стресса и АФК приводит к возраст-зависимому повреждению тканей и старению [Harman, 1956]. Митохондрии считаются основным источником АФК, из-за чего функциональные и структурные характеристики митохондрий связывают со свободно-радикальной теорией Хармана [Skulachev et al., 2009].

Важнейшей особенностью митохондрий является значительная динамичность их морфологии в ответ на различные изменения клеточного метаболизма. Изменяться могут не только их форма, расположение, размеры и количество, но и внутренняя организация – ультраструктура. Изучение особенностей ультраструктуры митохондрий в сочетании с современными теоретическими представлениями митохондриологии чрезвычайно перспективны в исследовании обусловленных возрастом патологий, и не только с точки зрения фундаментальных исследований, но и для разработки, профилактики и, возможно, даже для лечения заболеваний, связанных с возрастом.

Цель и задачи работы. Цель настоящей работы – исследование изменений ультраструктуры митохондрий при окислительном стрессе, а также защитного эффекта митохондриально-направленного антиоксиданта SkQ1 по отношению к этим изменениям методами морфометрического и стереологического анализа.

Были поставлены задачи разработки и применения указанных методов для оценки наблюдаемых изменений ультраструктуры митохондрий:

летательной мышцы Drosophila melanogaster при естественном старении;

кардиомиоцитов мышей, мутантных по PolgA-субъединице митохондриальной ДНК-полимеразы, при ускоренном старении;

кардиомиоцитов крыс при экспериментальном инфаркте миокарда.

Также в задачи настоящей работы вошла количественная оценка состояния ультраструктуры клеток пигментного эпителия (динамики липофусциновых и электронно-плотных гранул) крыс линии OXYS при естественном старении, а также оценка действия SkQ1, получаемого крысами в виде глазных капель, на состояние ультраструктуры клеток пигментного эпителия.

стереологического анализа ультраструктуры митохондрий являются принципиально новыми по сравнению с методами, использовавшимися ранее.

Кроме того, применение нами компьютерных технологий, программных алгоритмов обработки изображений и распознавания образов не только позволило значительно повысить эффективность классических методов стереологии и морфометрии, но и дало возможность значительно их усовершенствовать.

Результаты, полученные с использованием данных методов, впервые статистически достоверно показали, что SkQ1 оказывает защитный эффект на ультраструктуру митохондрий при различных процессах, обусловленных и/или сопровождаемых окислительным стрессом: при экспериментальном инфаркте миокарда, при ускоренном и естественном старении. Кроме того, нами показан защитный эффект SkQ1 по отношению к клеткам пигментного эпителия крыс линии OXYS при естественном старении. Данные результаты вносят весомый вклад в большую работу, посвящённую борьбе со старением и лечению обусловленных возрастом заболеваний.

Практическая ценность работы. Использование компьютерных методик анализа изображений в целом повышает удобство и ускоряет процесс исследования. Широкое применение данных методов может сделать изучение ряда биологических объектов и процессов более эффективным и интересным.

Разработанные нами методы могут быть в дальнейшем использованы для оценки функционального состояния митохондрий. Алгоритм распознавания мембран митохондрий на электронно-микроскопичеких снимках позволяет оценить множество параметров, характеризующих функциональное состояние митохондрий: плотность упаковки и упорядоченность крист, размеры областей, лишённых крист, длину, количество и форму крист.

Применение специализированных компьютерных методов в биологических исследованиях нам представляется чрезвычайно перспективным направлением.

Апробация работы. Материалы работы были представлены на IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (11-15 мая 2008 года) в г. Новосибирске, на XXIII Российской конференции по электронной микроскопии (РКЭМ-2010) в г. Черноголовке (31 мая – 4 июня 2010 года), а также на открытом семинаре отдела биоэнергетики Научно-исследовательского института физикохимической биологии им. А.Н.Белозерского МГУ 24 июня 2010 года. Кроме того, различные результаты работы регулярно представляются на других семинарах отдела биоэнергетики Научно-исследовательского института физико-химической биологии им. А.Н.Белозерского МГУ с 2008 года.

Структура и объём работы. Диссертация состоит из разделов: «Введение», «Обзор литературы», «Результаты и методы», «Обсуждение результатов», «Выводы» и «Список литературы». Работа изложена на 128 страницах, включает рисунка, список литературы содержит 291 ссылку.

МАТЕРИАЛЫ, МЕТОДЫ И РЕЗУЛЬТАТЫ

1. Изменения ультраструктуры митохондрий летательной мышцы Drosophila melanogaster при естественном старении. Влияние антиоксиданта SkQ летательной мышцы D. melanogaster обоих полов, получавших и не получавших SkQ1 в концентрации 1,85 нМ в течение всей жизни с сухим кормом.

Исследовались особи четырёх возрастов: 1,5 дня, 10 дней, 20 дней и 65 дней. Было показано, что с возрастом в митохондриях развиваются деструктивные изменения различного характера и, прежде всего, происходит реорганизация участков внутренней мембраны в миелиноподобные концентрические образования (рис. 1Б).

Причём у особей, получавших SkQ1, количество таких образований и степень их проявления ниже, чем у особей, не получавших SkQ1 (рис. 1В).

Рис. 1. Ультраструктура митохондрий летательной мышцы D. melanogaster. А – 1,5 дня. Б – 52 дня. В – 65 дней (особи, получавшие SkQ1).

деструктивные изменения, у особей разных возрастов и оценки влияния SkQ1 на возрастную динамику этих изменений рассчитывалась доля митохондрий, имеющих такие изменения.

Методы. Для получения электронно-микроскопических препаратов во всех проведённых исследованиях использовалась общепринятая методика. На электронно-микроскопических фотографиях подсчитывалось количество митохондрий, имеющих «повреждения», а также общее количество митохондрий.

В результате вычислялась доля митохондрий, имеющих повреждения, как отношение количества повреждённых митохондрий к общему числу митохондрий на снимке. Для подсчёта отбирались и сканировались непересекающиеся снимки продольных срезов (относительно пространственной ориентации миофибрилл), содержащие не менее 80-ти митохондрий. Подсчёт митохондрий проводился на компьютере с использованием программы Adobe Photoshop.

Результаты. На графиках (рис. 2) представлены результаты измерений и расчётов для самцов и самок, соответственно. Полученные результаты показывают, что с возрастом доля повреждённых митохондрий в летательной мышце самцов и самок D. melanogaster значительно возрастает, в то время как у насекомых, получавших SkQ1 в течение всей жизни с сухим кормом в концентрации 1,85 нМ, этот процесс происходит менее интенсивно.

Доля митохондрий, % Рис. 2. Доля митохондрий, имеющих повреждения, в летательной мышце D. melanogaster, получавших и не получавших SkQ1. Планки погрешностей соответствуют величинам стандартной ошибки.

2. Изменения ультраструктуры митохондрий кардиомиоцитов мышей, мутантных по PolgA, при ускоренном старении. Влияние антиоксиданта SkQ Описание модели. Исследовались мыши, мутантные по кодируемой в ядре PolgA-субъединице митохондриальной ДНК-полимеразы. Известно, что данная мутация приводит к преждевременному появлению у мышей множества признаков старения, а также к сокращению продолжительности жизни. В исследованном нами опыте две группы мышей (мутантные и дикого типа) получали препарат SkQ1 в течение всей жизни с питьевой водой в концентрации 1 мкмоль на килограмм веса, а другие две группы (также мутантные и дикого типа) не получали SkQ1.

Была исследована ультраструктура митохондрий кардиомиоцитов мышей указанных четырёх групп в возрасте от 36 до 42 недель. При электронномикроскопическом исследовании отличия ультраструктуры митохондрий мутантных мышей, получавших и не получавших SkQ1, очевидны (рис. 3). Более детальное сравнение возможно при большем увеличении (рис. 4 и 5).

Рис. 3. Ультраструктура митохондрий мышей дикого типа («WT»), а также мутантов, не получавших («Мутант») и получавших SkQ1 («Мутант + SkQ1»).

Для более точной и объективной оценки наблюдаемого эффекта SkQ1 на ультраструктуру митохондрий были проведены измерения и рассчитаны следующие параметры: относительное количество сечений митохондрий (на 1 мкм относительная электронная плотность матрикса митохондрий. Первый параметр получен методами количественной морфологии, а второй и третий – с помощью специально разработанного нами метода распознавания и анализа мембран.

Методы. Для измерения относительного количества сечений митохондрий (на единицу площади среза) отбирались непересекающиеся снимки, содержащие не менее 90 сечений, затем подсчитывалось их количество, и измерялась площадь снимка, на которой производился подсчёт.

Мы измеряли два параметра, наилучшим образом характеризующие наблюдаемые изменения ультраструктуры митохондрий: поверхностную плотность внутренней мембраны (мкм2/мкм3) и относительную электронную плотность матрикса (измеряемую относительно электронной плотности мембран).

Для анализа внутренней мембраны и матрикса митохондрий и последующего вычисления указанных параметров была специально написана компьютерная программа, центральной частью которой стал алгоритм распознавания мембран митохондрий на снимках. Алгоритм реализован на основе методов стереологии и аналитической геометрии (рис. 6), компьютерной денситометрии (рис. 7), а также распознавании образов (рис. 8).

Рис. 6. Основное стереологическое преобразование двумерного изображения мембраны в трёхмерную модель, позволяющую оценить площадь поверхности мембраны.

Рис. 7. Иллюстрация соответствия фрагмента электронно-микроскопического снимка графику денситометрии. Видно, что график отражает набор параллельных крист и позволяет приблизительно определить их параметры.

Рис. 8. Иллюстрация алгоритма распознавания «мембранных точек» по четырём чередующимся экстремумам (рисунок и график слева) позволяет распознавать мембраны с высокой точностью (центральный и правый рисунки).

Результаты. Данные обсчётов относительного количества сечений митохондрий представлены на рис. 4. Полученные результаты свидетельствуют о том, что относительное количество сечений митохондрий в кардиомиоцитах мышей, мутантных по PolgA-субъединице митохондриальной ДНК-полимеразы, ниже, чем у мышей дикого типа того же возраста (столбцы 3 и 1 на рис. 9), а у мутантов, получавших антиоксидант SkQ1, это значение соответствует значению у мышей дикого типа (столбцы 4 и 1 на рис. 9). В то же время, приём SkQ достоверно не влияет на этот параметр у мышей дикого типа по сравнению с мышами дикого типа, не получавшими антиоксидант (столбцы 2 и 1 на рис. 9).

Рис. 9. Количество сечений митохондрий в расчёте на 1 мкм2 снимка. Планки погрешностей на левом рисунке – стандартная ошибка среднего, на правом – стандартное отклонение.

Результаты измерений поверхностной плотности внутренней мембраны митохондрий, приведённые на рис. 10, свидетельствуют о том, что данный параметр в кардиомиоцитах мутантных мышей, не получавших SkQ1, достоверно ниже, чем у мышей дикого типа, а также у мутантных мышей, получавших SkQ1.

При этом значения поверхностной плотности внутренней мембраны практически не отличаются у мышей дикого типа и у мутантных мышей, получавших SkQ1.

Полученные значения относительной электронной плотности матрикса, представленные на рис. 11, позволяют сделать вывод о том, что митохондрии электронно-прозрачный (обводнённый) матрикс по сравнению с мышами дикого типа, а также с мышами, получавшими SkQ1. Значения относительной электронной практически не отличаются от таковых у мышей дикого типа.

3. Изменения ультраструктуры митохондрий кардиомиоцитов крыс при экспериментальном инфаркте миокарда. Влияние антиоксиданта SkQ ультраструктуру митохондрий кардиомиоцитов при экспериментальном инфаркте миокарда у 3-месячных крыс-самцов линии Wistar. Были исследованы четыре экспериментальному инфаркту, не получали SkQ1, а две другие – также подвергнутые и не подвергнутые инфаркту – получали SkQ1 с кормом в дозе нмоль на килограмм веса в сутки. Митохондрии кардиомиоцитов животных, расположенные фрагментированные кристы и более светлый матрикс, в то время как митохондрии кардиомиоцитов крыс, подвергнутых инфаркту, но получавших перед этим SkQ1, соответствовали митохондриям контрольных животных (рис. 12).

ультраструктуры митохондрий были измерены и рассчитаны поверхностная плотность (мкм2/мкм3) внутренней мембраны митохондрий, а также относительная электронная плотность матрикса.

Рис. 12. Ультраструктура митохондрий крыс трёх групп при экспериментальном инфаркте.

Методы. Методы измерений и подсчётов поверхностной плотности внутренней мембраны и относительной электронной плотности матрикса митохондрий описаны в предыдущем разделе (стр. 8-10).

Результаты. Полученные значения поверхностной плотности внутренней мембраны и относительной электронной плотности матрикса митохондрий приведены на рис. 13.

Рис. 13. Слева – поверхностная плотность (мкм2/мкм3) внутренней мембраны, справа – относительная электронная плотность матрикса митохондрий. Каждый столбец соответствует данным по 50 митохондриям. Планки погрешностей соответствуют значениям стандартной ошибки среднего.

Полученные данные показали, что поверхностная плотность внутренней митохондриальной мембраны достоверно ниже у крыс, подвергнутых экспериментальному инфаркту миокарда, чем у таких же крыс, получавших SkQ1 в течение трёх недель до инфаркта. У крыс, получавших SkQ1 и подвергнутых затем экспериментальному инфаркту миокарда, данный параметр соответствует значениям, полученным для митохондрий крыс контрольной группы. Аналогичным образом коррелирует электронная плотность матрикса: после экспериментального инфаркта митохондрии кардиомиоцитов крыс, не получавших SkQ1, имеют достоверно меньшую электронную плотность по сравнению с тремя другими группами животных, в которых значение этого параметра примерно одинаково.

4. Ультраструктура клеток пигментного эпителия крыс линии OXYS в процессе старения. Динамика липофусциновых гранул. Действие SkQ пигментного эпителия (ПЭ) крыс линий OXYS и Wistar, а также терапевтический эффект антиоксиданта SkQ1 на развитие у крыс OXYS зависимой от возраста макулярной дистрофии сетчатки.

Наличие и степень выраженности очаговых изменений макулярной области сетчатки оценивались офтальмоскопически в баллах согласно классификации Кацнельсона (1990). Исследования состояния сетчатки крыс линий OXYS и Wistar были выполнены в Институте цитологии и генетики СО РАН.

Крысы OXYS были разделены на 2 группы: первой группе закапывали в глаза 0,9% раствор NaCl, а второй – капли, содержащие 0,9% раствор NaCl и SkQ1 в концентрации 250 нМ. Третья группа – крысы линии Wistar – не получали капли с SkQ1.

При электронно-микроскопическом исследовании ПЭ крыс Wistar, не имевших признаков поражения сетчатки, было показано наличие непрерывного слоя электронно-плотных цитоплазматических включений (рис. 14). Детальный анализ ультраструктуры данного слоя показал, что он содержит чрезвычайно гетерогенные по своей морфологии структуры, небольшая часть которых представляет собой липофусциновые гранулы. Ультраструктура клеток ПЭ 11-ти месячных крыс OXYS с признаками поражения сетчатки, оцениваемыми в 2 балла, сильно отличалась от таковой у крыс Wistar, в частности, отсутствием непрерывного слоя электронно-плотных гранул (рис. 15). Вместо него гранулы (в основном, липофусциновые) образовывали скопления в основаниях выростов цитоплазмы, окружающих палочки. У крыс, получавших в течение 2-х месяцев капли SkQ1, патологические изменения сетчатки полностью исчезли либо значительно уменьшились.

Для оценки наблюдаемых изменений были проведены измерения и рассчитаны следующие количественные параметры: относительное количество липофусциновых гранул и всех электронно-плотных гранул в расчёте на 1 мкм длины ПЭ (мембраны Бруха), распределение площадей сечений, а также ширина зоны распределения всех электронно-плотных гранул.

Методы. Подсчеты проводили на снимках, охватывающих участки срезов протяженностью 50-250 мкм. Для анализа таких участков снимки высокого разрешения склеивались на компьютере при помощи графического редактора.

Результаты. Полученные нами данные показали, что у 11-месячных крыс линии OXYS, имеющих повреждения сетчатки, количество липофусциновых гранул в 4,5 раза выше, чем у крыс линии Wistar того же возраста, не имевших таких повреждений. В то же время у крыс линии OXYS, получавших глазные капли SkQ1, количество липофусциновых гранул выше, чем у здоровых крыс, чуть менее чем в 2 раза (рис. 16).

Согласно данным, представленным на рис. 17, относительное количество гранул в ПЭ у крыс линии OXYS, не получавших SkQ1, несколько ниже, чем у крыс линии Wistar. В то же время у крыс OXYS, получавших SkQ1, этот параметр соответствовал значению у крыс линии Wistar.

электронно-плотных гранул, отнесенная к 1 мкм мембраны Бруха, – коррелирует (рис. 18) с плотностью гранул (коэффициент корреляции равен 0,7).

0, распределения электронно-плотных гранул в клетках ПЭ показали, что у крыс линии Wistar и у крыс линии OXYS, получавших SkQ1, гранулы располагаются компактно, образуя сплошной слой в апикальной части цитоплазмы клеток ПЭ, в то время как у крыс OXYS, не получавших SkQ1, гранулы не образуют сплошного слоя: они располагаются не только в апикальной части клеток ПЭ, но и в их цитоплазматических отростках, оплетающих клетки-палочки.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Визуальное описание выявляемых изменений ультраструктуры митохондрий, как, впрочем, и других клеточных компонентов, при различных патологических процессах является недостаточным и малоинформативным: оно не может дать точную, объективную и статистически достоверную оценку степени этих изменений. Такая оценка возможна лишь с использованием специальных методов, – методов морфометрии и стереологии, – позволяющих объективизировать исследование и получить принципиально новые данные о строении и пространственной организации изучаемых структур.

Нами были разработаны и применены методы оценки основных параметров ультраструктуры митохондрий, характеризующих их функциональное состояние.

Метод оценки доли митохондрий, имеющих миелиноподобные структуры, показал, что SkQ1 существенно замедляет накопление этих структур в митохондриях летательной мышцы D. melanogaster с возрастом. Количественные методы, а также методы анализа мембран и матрикса митохондрий показали, что SkQ1 снижает степень основных ультраструктурных изменений митохондрий при ускоренном старении мышей, а также при экспериментальном инфаркте миокарда у крыс.

Методы морфометрии также были применены нами для оценки эффекта SkQ на ухудшающееся с возрастом состояние ПЭ быстро стареющих крыс OXYS. Нами было показано, что количество липофусциновых гранул в клетках ПЭ с возрастом увеличивается, а непрерывность слоя электронно-плотных гранул уменьшается.

Недавно нами были получены данные, согласно которым у 24-месячных крыс линии OXYS, имеющих максимальную степень выраженности патологических изменений сетчатки, оцениваемую в 3 балла, слой электронно-плотных включений состоит только лишь из гранул липофусцина.

По-видимому, накопление липофусциновых гранул и снижение количества электронно-плотных структур, а также фагосом, являющихся фагоцитированными обломками фоторецепторов, в цитоплазме клеток ПЭ свидетельствует о нарушении зрительного цикла у крыс OXYS, не получавших SkQ1, в то время как капли, содержащие SkQ1, предотвращают эту патологию и восстанавливают зрительный цикл, что, в результате, приводит к нормализации состояния сетчатки.

Морфометрико-стереологические методы анализа митохондрий, на наш взгляд, следует применять наряду с гистологическими и биохимическими методами, чтобы лучше выявлять и понимать корреляции между параметрами ультраструктуры митохондрий и их функциональным состоянием.

ВЫВОДЫ

1. Разработаны морфометрико-стереологические методы, позволяющие анализировать и оценивать изменения ультраструктуры митохондрий.

2. Применение разработанных методов для анализа ультраструктуры митохондрий при окислительном стрессе показало, что:

a. В процессе старения в летательной мышце D. melanogaster происходит увеличение доли митохондрий, имеющих миелиноподобные структуры, а получение SkQ1 в виде сухого корма в концентрации 1,85 нМ снижает долю таких митохондрий, как у самок, так и у самцов.

митохондриальной ДНК-полимеразы и подверженных ускоренному старению, по сравнению с мышами дикого типа того же возраста наблюдается снижение относительного количества сечений (на 1 мкм2), кардиомиоцитов. При ежедневном получении мутантными мышами препарата SkQ1 (в концентрации 1 мкмоль на килограмм веса животного) в течение всей жизни снижение значений указанных параметров не наблюдается: значения соответствуют значениям у мышей дикого типа.

b. У крыс при экспериментальном инфаркте миокарда наблюдается снижение кардиомиоцитов зоны ишемического повреждения. При ежедневном получении крысами SkQ1 в концентрации 250 нМ в течение 3-х недель до инфаркта снижение значений указанных параметров не наблюдается:

значения соответствуют значениям у крыс, не подвергнутых инфаркту.

c. У 11-месячных крыс OXYS (модель ускоренного старения) по сравнению с крысами Wistar в клетках ПЭ сетчатки наблюдается значительное увеличение относительного количества липофусциновых гранул, снижение относительного количества и суммарной площади сечений, а также увеличение ширины зоны распределения электронно-плотных гранул (в расчёте на 1 мкм длины ПЭ – мембраны Бруха). При получении SkQ1 в виде глазных капель (250 нМ) в течение 68 суток указанные изменения не наблюдаются, а значения соответствуют значениям у крыс Wistar.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бакеева Л.Е., Сапрунова В.Б., Пилипенко Д.И. Ультраструктура митохондрий в условиях эндогенного окислительного стресса, защитное действие митохондриального антиоксиданта SkQ1. // IV съезд Российского общества биохимиков и молекулярных биологов, Новосибирск, 11-15 мая 2008 г., с. 329.

2. Пилипенко Д.И. Динамика липофусциновых гранул при развитии возрастной макулодистрофии: морфометрический анализ. // XXIII Российская конференция по электронной микроскопии (РКЭМ-2010), Черноголовка, 31 мая – 4 июня 2010 г., с. 139.

3. Анисимов В.Н., Бакеева Л.Е., Егормин П.А., Филенко О.Ф., Исакова Е.Ф., Манских В.Н., Михельсон В.М., Пантелеева А.А., Пасюкова Е.Г., Пилипенко Д.И., Пискунова Т.С., Попович И.Г., Рощина Н.В., Рыбина О.Ю., Сапрунова В.Б., Самойлова Т.А., Семенченко А.В., Скулачев М.В., Спивак И.М., Цыбулько Е.А., Тындык М.Л., Высоких М.Ю., Юрова М.Н., Забежинский М.А., Скулачев В.П. Производное пластохинона, адресованное в митохондрии, как средство, прерывающее программу старения. 5. SkQ1 увеличивает продолжительность жизни и предотвращает развитие признаков старения. // Биохимия, 2008, 73 (12), с. 1329-1342.

4. Нероев В.В., Архипова М.М., Бакеева Л.Е., Фурсова А.Ж., Григорян Э.Н., Гришанова А.Ю., Зиновкин Р.А., Иомдина Е.Н., Иващенко Ж.Н., Катаргина Л.А., Хорошилова-Маслова И.П., Килина О.В., Колосова Н.Г., Копенкин Е.П., Коршунов С.С., Ковалева Н.А., Новикова Ю.П., Пилипенко Д.И., Робустова О.В., Сапрунова В.Б., Сенин И.И., Скулачев М.В., Сотникова Л.Ф., Стефанова Н.А., Тихомирова Н.К., Цапенко И.В., Щипанова А.И., Филиппов П.П., Скулачев В.П. Производное пластохинона, адресованное в митохондрии, как средство, прерывающее программу старения. 4. С вязанные с возрастом заболевания глаз. SkQ возвращает зрение слепым животным // Биохимия, 2008, 73 (12), с. 1317Сапрунова В.Б., Пилипенко Д.И., Алексеевский А.В., Фурсова А.Ж., Колосова Н.Г., Бакеева Л.Е. Динамика липофусциновых гранул при развитии макулодистрофии, зависимой от возраста. // Биохимия, 2010, (2), с. 130-138.





Похожие работы:

«МАРКИДОНОВ АРТЕМ ВЛАДИМИРОВИЧ БЕЗДИФФУЗИОННЫЙ МЕХАНИЗМ МАССОПЕРЕНОСА В КРИСТАЛЛАХ, СОДЕРЖАЩИХ АГРЕГАТЫ ВАКАНСИЙ И МЕЖУЗЕЛЬНЫХ АТОМОВ Специальность 01.04.07 - физика конденсированного состояния Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Барнаул - 2009 Работа выполнена в Алтайском государственном техническом университете им. И.И.Ползунова и Кузбасской государственной педагогической академии Научный руководитель : заслуженный деятель...»

«СТАРИЦЫН МАКСИМ ВЛАДИМИРОВИЧ ПРИНЦИП МАКСИМУМА ДЛЯ ЗАДАЧ ИМПУЛЬСНОГО УПРАВЛЕНИЯ С ОГРАНИЧЕНИЯМИ СМЕШАННОГО ТИПА И ЧИСЛЕННЫЕ МЕТОДЫ ПОИСКА ЭКСТРЕМАЛЕЙ 05.13.01 – Системный анализ, управление и обработка информации (в технике, экологии и экономике) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Иркутск – 2012 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте динамики систем и теории управления...»

«СВЕТЛИЧНЫЙ Валентин Михайлович ТЕРМОПЛАСТИЧНЫЕ ПОЛИИМИДЫ ДЛЯ КОМПОЗИЦИОННЫХ МАТЕРИАЛОВ Специальность - 02.00.06 - Высокомолекулярные соединения АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук Санкт-Петербург 2007 2 Работа выполнена в ордена Трудового Красного Знамени Институте высокомолекулярных соединений Российской Академии наук. Официальные оппоненты : Член-корреспондент РАН, доктор химических наук, профессор Куличихин Валерий Григорьевич доктор...»

«Троицкий Николай Артурович Изучение распределения электронной плотности в силолах, гермолах, силаинденах и их дианионах методом спектроскопии ЯМР Специальность 02.00.03 - Органическая химия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва - 2002 Работа выполнена в лаборатории физико-химических методов исследования органических соединений в Институте Органической Химии им Н.Д. Зелинского РАН Научный руководитель : доктор химических...»

«Адамьян Дмитрий Юрьевич Метод генерации синтетической турбулентности на входных границах для расчета турбулентных течений в рамках вихреразрешающих подходов 01.02.05 – Механика жидкости, газа и плазмы АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Санкт-Петербург – 2011 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования “Санкт-Петербургский государственный...»

«СТАРОСТЕНКО Александр Анатольевич ПРИМЕНЕНИЕ ЭЛЕКТРОННОГО ПУЧКА НИЗКОЙ ЭНЕРГИИ КАК СРЕДСТВА НЕРАЗРУШАЮЩЕЙ ДИАГНОСТИКИ ИНТЕНСИВНЫХ ПУЧКОВ ЗАРЯЖЕННЫХ ЧАСТИЦ 01.04.20 - физика пучков заряженных частиц и ускорительная техника АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук НОВОСИБИРСК – 2006 1 Работа выполнена в Институте ядерной физики им. Г.И.Будкера СО РАН. НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: Логачев кандидат физико-математических наук, – Павел...»

«Кольцов Дмитрий Анатольевич МЕТОДЫ АНАЛИЗА И ИДЕНТИФИКАЦИИ НЕОПРЕДЕЛЕННЫХ МОДЕЛЕЙ ЭКСПЕРИМЕНТА Специальность 05.13.18 Математическое моделирование, численные методы и комплексы программ Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Mосква 2006 г. Работа выполнена на кафедре компьютерных методов физики Физического факультета Московского Государственного...»

«Панин Илья Александрович Прецизионный расчет электронного переноса в неидеальной плазме Специальность 05.13.18 – математическое моделирование, численные методы и комплексы программ Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Москва 2009 Работа выполнена в Институте математического моделирования РАН Научный руководитель – доктор физико-математических наук, член-корреспондент РАН Калиткин Николай Николаевич Официальные оппоненты –...»

«Николаев Александр Юрьевич Изучение сорбции сверхкритического диоксида углерода полимерами и модификация их свойств Специальности: 02.00.06 - высокомолекулярные соединения 01.04.07 - физика конденсированного состояния АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук www.sp-department.ru Работа выполнена в Институте Элементоорганических Соединений РАН им. А.Н. Несмеянова Научные руководители: доктор физико-математических наук профессор...»

«Аттокуров Урмат Тологонович ИССЛЕДОВАНИЕ РЕЖИМОВ ЗАПИСИ МУЛЬТИПЛЕКСИРОВАННЫХ ГОЛОГРАММ В ФОТОПОЛИМЕРИЗУЮЩИХСЯ СРЕДАХ И АНАЛИЗ ДИСКОВЫХ ГЗУ НА ЭТИХ СРЕДАХ Специальность: 01.04.05 - ОПТИКА Автореферат Диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук БИШКЕК 1999 2 Работа выполнена в Институте Физики Национальной Академии наук Кыргызской Республики Научные руководители: доктор технических наук,...»

«КЛАДЬКО ВАСИЛИЙ ПЕТРОВИЧ УДК: Б39.26 - 548.731 ЗАВИСИМОСТЬ РАССЕЯНИЯ РЕНТГЕНОВСКОГО ТОРМОЗНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ ОТ СТРУКТУРНОГО СОВЕРШЕНСТВА МОНОКРИСТАЛЛОВ БИНАРНЫХ И ТРОЙНЫХ СОЕДИНЕНИЙ. Специальность 01.04.07 - физика твердого тела Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фнзико-математических наук Киев - 1986 г. Работа выполнена в Институте полупроводников АН УССР...»

«ЛАПИН ВИТАЛИЙ ГЕННАДЬЕВИЧ МАТЕМАТИЧЕСКОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ФРОНТАЛЬНОЙ ЧАСТИ ТЕЧЕНИЯ В КАНАЛАХ И РЕКАХ ПРИ НЕСТАЦИОНАРНОМ СТОКЕ 05.13.18 – Математическое моделирование, численные методы и комплексы программ АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Ставрополь – 2005 Работа выполнена в Ставропольском государственном университете Научный руководитель : доктор физико-математических наук, старший научный сотрудник Каплан Лев Григорьевич...»

«ПЕТРОВ Виктор Михайлович Оптические и электрические методы управления дифракцией света на фоторефрактивных голографических решетках Специальность 01.04.03 – радиофизика АВТОРЕФЕРАТ Диссертации на соискание учёной степени доктора физико-математических наук Санкт – Петербург 2004 Работа выполнена в Физико – Техническом институте им. А.Ф. Иоффе РАН Официальные оппоненты : доктор физико – математических наук, профессор Коровин Лев Иванович, доктор физико – математических наук,...»

«Казанцев Родион Петрович РАСЧЕТНО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПОВЫШЕНИЯ ЭНЕРГЕТИЧЕСКИХ ХАРАКТЕРИСТИК ГЛАВНЫХ ЦИРКУЛЯЦИОННЫХ НАСОСОВ АЭС Специальность 05.04.13 – гидравлические машины и гидропневмоагрегаты Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Санкт-Петербург – 2011г. Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Санкт-Петербургский государственный...»

«УДК 530.1 Тарасов Василий Евгеньевич МОДЕЛИ ТЕОРЕТИЧЕСКОЙ ФИЗИКИ С ИНТЕГРО-ДИФФЕРЕНЦИРОВАНИЕМ ДРОБНОГО ПОРЯДКА Специальность 01.04.02 Теоретическая физика Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора физико-математических наук Москва-2011 Работа выполнена в Научно-исследовательском институте ядерной физики имени Д.В. Скобельцина,...»

«Михайлов Игорь Анатольевич ПОЛУЧЕНИЕ ГАЛОГЕНСОДЕРЖАЩИХ КАУЧУКОВ МЕТОДОМ МЕХАНОХИМИЧЕСКОЙ МОДИФИКАЦИИ, СВОЙСТВА ЭЛАСТОМЕРНЫХ КОМПОЗИЦИЙ НА ИХ ОСНОВЕ. 02.00.06 – высокомолекулярные соединения АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учной степени кандидата химических наук Москва 2012 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте биохимической физики им. Н.М. Эмануэля Российской академии наук. Научный руководитель : доктор технических наук...»

«ЛАТФУЛЛИН Денис Фатбирович Импульсный скользящий поверхностный разряд в газодинамическом потоке Специальности: 01.04.17 – химическая физика, в том числе физика горения и взрыва 01.04.08 – физика плазмы АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Москва – 2009 Работа выполнена на кафедре молекулярной физики физического факультета Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова Научные руководители доктор...»

«Куштанова Галия Гатинишна ЧИСЛЕННОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ТЕРМОГИДРОДИНАМИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ В ПОДЗЕМНОЙ ГИДРОСФЕРЕ 25.00.29- Физика атмосферы и гидросферы Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора физико-математических наук Казань-2007 Работа выполнена в Казанском государственном университете Официальные оппоненты : доктор физико-математических наук профессор Якимов Н.Д. доктор физико-математических наук Храмченков М.Г. доктор технических наук Рамазанов А.Ш. Ведущая...»

«Ломова Наталья Валентиновна УДК 538.945 ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДА РЕНТГЕНОЭЛЕКТРОННОЙ СПЕКТРОСКОПИИ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ СПИНОВОГО МАГНИТНОГО МОМЕНТА АТОМОВ В СИСТЕМАХ НА ОСНОВЕ ЖЕЛЕЗА Специальность 01.04.01. – Приборы и методы экспериментальной физики АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Ижевск – 2007 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Удмуртский государственный...»

«Новиков Владимир Анатольевич Оптико-электронные приборы, методы и информационное обеспечение контроля реакций биообъекта на лазерное воздействие Специальность 05.11.07 — Оптические и оптикоэлектронные приборы и комплексы Специальность 05.11.17 — Приборы, системы и изделия медицинского назначения АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Москва 2011 Работа выполнена в ГОУ ВПО Казанский государственный энергетический университет Научный...»














 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.